2 - デオキシグルコース (2DG) 代謝速度測定キット 本製品は、非放射性物質である 2- デオキシグルコースを細胞内に 取込ませた後、細胞抽出液を 2 段階の酵素反応および酵素サイクリング法で 糖取込み量を測定する画期的な測定キットです。RI を用いることなく細胞内への 2DG 取り込み量を測定することができ、創薬を含めたメタボリックシンドロームの研究に有用です。 培養細胞における 2 DG の取り込み量を測定することができます。 non-RI 法なので通常の実験室レベルで測定できます。 2DG6Pを測定するので細胞内の糖取り込み量を定量することができ、細胞外に存在する 2DG の影響を受けません。 酵素サイクリング法で高感度に検出可能です。 測定原理 細 胞 内 に 取 り 込 ま れ た 2DG は、 グルコース代謝 ヘキソキナーゼによって 2DG6P に 低濃度 G6PDH ヘキソキナーゼ glucose リン酸化されますが、次の酵素反 G6P NAD 応に進まずに細胞内に留まります。 そのため細胞内には内因性 G6P と ヘキソキナーゼ 2DG すが、本キットの第１段階で試料 2DG6P 高濃度 G6PDH NADP 中に含まれる内因性 G6P を分解さ り込まれた 2DG6P 量に比例して NADH 酸素サイクリング法 2DG and 2DG6P 2DG6P が含んでいる状態になりま せた後に、第２段階で細胞内に取 6PG 脂肪細胞における グルコースの取り組み NADPH 測定法 6PG G6PDH 6PDG NADPH GR NADP GSSG 2GSH 発色 DTNB NADPH を産生し、酵素サイクリン グ法で高感度に検出します。 G6P 本キットと RI 法の比較 RI法 2-デオキシグルコース(2DG)代謝速度測定キット 細胞 H-2DG(緑色)添加 3 H-2DGが取り込まれて3H-2DG6Pで貯留。 3 洗浄後に取り込まれなかった3H-2DGは細胞間隙に残る 細胞溶解 高バックグラウンド 細胞 2DG(緑色)添加 2DGが取り込まれて2DG6Pで貯留。 洗浄後に取り込まれなかった2DGは細胞間隙に残る 細胞溶解 低バックグラウンド 3 H-2DG6P + 検出される 3 H-2DG 検出されない 放射活性では3H-2DGと 3H-2DG6P の区別が できない為、バックグラウンドが高くなる。 2DG6P (420 nm) 2DG6Pを基質とした酸素反応系で産生されたNADPH量を 酸素サイクリング法で比色定量し、2DGには反応しない為、 バックグラウンドが低い。 2 - デオキシグルコース (2DG) 代謝速度測定キット 本キットの測定性能 1.5 0.5μM 1μM 0.5μM 1μM 0.05 2μM 0.04 5μM 2μM 5μM 1 0.06 0μM 0.1μM 0μM 0.1μM Slope Optical density at 430nm 2 0.03 0.02 0.5 0.01 0 0 25 5 10 15 20 25 0 30 0 Time (min) 30 1 2 3 4 5 Concentration of 2DG6P(μM) 2DG6P の各濃度における吸光度の経時的変化 エンドポイント法による検量線（発色後 30 分 ) カイネティック法による検量線 ( 発色後 30 分 ) 実験例 1 3T3-L1 細胞による 2DG の取り込み serumfree medium (D-MEM) Phloretin (200μM) Insulin (1μM) HKRP buffer -6hr 0 30min 2DG (1 mM) 48min 50min Cell collection 70min 3000 2DG6P incorporated into cells (pmole/well) Time (min) 20 2500 2000 1500 1000 500 0 2DG Insulin Phloretin*1 - + - + + - + + *1 Phloretin : glucose transporter inhibitor Mouse Preadipocyte 3T3-L1 Medium：D-MEM + 10%CS, D-MEM +10%FBS 実験例 2 ヒト皮下脂肪細胞による 2DG の取り込み HKRP buffer Wortmannin (50 nM) serumfree medium (DE/F-12) --6hr Insulin (1μM) 0 Phloretin (200μM) 30min 2DG (1 mM) 48min 50min Cell collection 70min 800 2DG6P incorporated into cells (pmole/µg DNA) 15 600 400 200 0 2DG Insulin Phloretin Wortmannin 製品情報 *1 Phloretin: glucose - + - + + - + + + - + + + transporter inhibitor *2 Wortmannin: PI3 kinase inhibitor Human Preadipocyte −subcutaneous fat tissue （ScienCell Research Laboratories Cat.# 7220） Medium ： Visceral Adipocyte Culture Medium ver.2 （Cat.# PMC-VACM2-COS） コスモ・バイオ株式会社 メーカー略号：CSR 品名 2-Deoxyglucose uptake measurement kit 品番 包装 希望販売価格 OKP-PMG-K01 1 kit (50 test) ￥91,000 ● 希望販売価格 ･･･「希望販売価格」は参考であり、販売店様からの販売価格ではございません。 記載の希望販売価格は２０１5 年 8 月１日現在の希望販売価格です。 予告なしに改定される場合がありますので、ご注文の際にご確認下さい。消費税は含まれておりません。 ● 使 用 範 囲 ･･･ 記載の商品は全て、「研究用試薬」です。 人や動物の医療用・臨床診断用等としては使用しないよう、十分ご注意ください。 (12277)
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