Title
結核免疫に関する研究: 第16報 結核菌菌体蠟質の免疫学的性状に関
する研究 [第2篇] 抗体産生能およびツベルクリン・アレルギー賦与
能について (ウサギを用いての実験)
Author(s)
宮森, 正孝
Citation
金沢大学結核研究所年報 = Annual report of the Research Institute of
Tuberculosis, Kanazawa University, 16(1): 17-22
Issue Date
1958-06-20
Type
Departmental Bulletin Paper
Text version
publisher
URL
http://hdl.handle.net/2297/41208
Right
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http://dspace.lib.kanazawa-u.ac.jp/dspace/
17
結核免疫に関する研究
第16報
結核菌菌体蝋質の免疫学的性状に関する研究
第 2 編
抗体産生能及びツベルクリン・アレルギー賦与能について鵜
（ウサギを用いての実験）
金沢大学結核研究所細菌免疫部（主任：柿下正道教授）
宮 森 正 孝
(受付：昭和33年1月6日）
緒
結核菌菌体脂質の抗体産生能に関しては既に
言
とを確認している．
多くの先人によって認められて居る．当教室に
私はWaxの抗体産生能及びツベルクリン．
おいても先に秋山')がAnderson2)による諸分
アレルギー（以下「ツ・ア」と略記す）賦与能
画の内，特に燐脂質に抗体産生能のある事を報
をWax単独の場合とSchlepperを用いた場
告した．又一方武田3)は蝋(WaxD)にも抗原
合に就いても検討を加えると共に菌体の其の他
性が存在し，且つこのWaxDを水解して得
のフラクシヨンの抗体産生能及び「ツ・ア」賦
られる多糖体には明かな血球感作能の存するこ
与能との比較を行ったので報告する．
実験方法
1）免疫原及び反応原の製法:c)旧ツベルクリン(OT):人型結核菌H2株を
a)Wax;Wax抗原の製法は前編4〕に報告した.Sauton培地に10週培養し，培養ろ液より型の如
b)菌体蛋白(PF),菌体蛋白I(PFI),菌体多く作製した．
糖体(CF),菌体多糖体I(CFI)菌体多糖体II2)実験動物：体重2,000∼2,500gmの雄性健康ウ
(CFII),の拙出法びに性状：
サギで10倍OTO､1mlによる皮内反応陰性のもの
PF並びにCFは夫々蔵5),秋山6)の方法に準10頭を使用した．
じて抽出し，得られたPF,唖､は更に浅見等7)の3)免疫方法:10頭のウサギを5群に分ち，各群に夫
方法によって夫々三塩化錯酸沈殿法及びアルコー々Wax(40mg),PF(30mg),Wax(40mg)+PF
ル沈殿法によりPFI,PFI,及びCFI,CF,,に分(30mg),Wax(40mg)十ブタ血清（以下PSと略
画した.それ等の各々10mgをとりPF,PFIは記す)(1ml)を2mlの流バラに浮遊したものを1週
0.1N-NaOH1mlに,CF,CFI,CFI,は蒸溜水間隔で2回臂筋内に注射した．対照群にはH2株加
1mlに溶解して定性反応を行った．熱死菌40mgを前記同様2mlの流バラに浮遊し同
第1表はその成績である．様の方法で注射した．
＊本論文の要旨は昭和31年11月4日日本細菌学会北陸地方会で発表した．
１１１
宮
18
森
d)結核菌に対する喰菌現象：結核菌浮遊液の製
法，反応術式及び成績の判定法は大山9)の方法に
4）反応術式
a)OT感作血球凝集反応，東風沈降反応伽Wax
従った．
を抗原とした補体結合反応並びに沈降反応等の術
e)吸収試験
式は前編4)記載の通りである．
i)OT或はCFによるそれぞれの感作血球遠心
洗浄沈澄2m1ii)菌体及び脱脂菌体（乾燥菌
体)2mgをそれぞれ1mlの抗血清に加え,37｡C
に2時間放置する．この操作を2回繰り返して
b)CF,CFI及びCF,,感作血球凝集反応:CF,
CF,及びCF,,の各々2mgを生理的食塩水1ml
に溶解し,pH7.0に修正した後，型の如く健常ウ
サギ血球を感作して用いた．
c)PFI感作タンニン酸処理血球凝集反応:PFI
吸収の完全を計りそれぞれOT感作血球吸収血
2mgを0.1N-NaOH1mlに溶解し,pH7.0に修
清,CF感作血球吸収血清，菌体吸収血清及び
脱脂菌体吸収血清として反応に供した．
正した後，タンニン酸処理血球遠心沈澄0.05ml
f)ツベルクリン反応:10倍OTO､1mlを皮内に
(Boyden8)法に準じた）を加え型の如く感作して
注射し48時間後の発赤及び硬結を観察した．
用いた．
実験成
1)OT感作血球凝集反応（第1図）
PF注射群ではほとんど抗体産生が認めら
れなかったがWax,Wax+PF,Wax+PS
及び死菌注射群ではいずれも5∼6週にて抗
体価最高となり,Wax群は最高129倍,Wax
績
Wax+PS群及びWax群の最高抗体価はい
ずれも8倍でPS混合による抗体価の上昇は
認められなかった．
5）東風沈降反応（第4図）
Wax群,Wax+PF群及びWax+PS群
+PF群では最高64倍,Wax+PS及び死菌群
の3群では前記のWaxを抗原とした沈降反
では最高1,024倍を示した．すなわち,Wax
応よりも一般に低い抗体価を示し，かつPS
とブタ血清を混合して注射することにより
混合による抗体価の上昇は認められなかっ
Wax単独注射時よりも強くOT感作血球凝
た．
集素の産生する事を認めた．
2)PF,Wax+PF及びWax+PS群におけ
るPF,感作タンニン酸処理血球凝集反応（第
2表）
本反応はPF,Wax+PF及びWax+PS
群において共に殆んど陰性で特にWax+PS
6）結核菌に対する喰菌現象（第5図）
PF群では4週まで軽度に低下しその後漸
次回復し8週で軽度の上昇を示した．
死菌群では漸次上昇を示し6週にて一時復
旧傾向を示したが8週目には再び上昇した．
Wax群及びWax+PF群では6週迄上昇
群においても陰性成績を示した事はまことに
し8週には軽度の下降を認めた.Wax+PS
興味ある所見である．
群のみ8週まで上昇し終始他群に比し高い喰
3)Waxを抗原とした補体結合反応(第2図）
PF群では観察期間中陽性を示さず，他の
群では何れも5週にて最強となり，死菌群で
は最高160倍陽性,Wax群,Wax+PF群，
Wax+PS群ではそれぞれ40倍陽性を示した．
4)Waxを抗原とした沈降反応（第3図）
PF群ではほとんど陰性に終始し,Wax群，
菌能を示した．すなわち，ブタ血清を混合す
る事により白血球の喰菌力も他の免疫群に比
し増強するものと考えられる．
7)Wax免疫血清の吸収試験（第3表）
吸収前後におけるOT,CF,CF,及びCF
I'感作血球凝集反応を比較した.すなわち吸収
前,OT感作血球に対する凝集価は64倍,CF
Wax+PF群,Wax+PS群及び死菌群では
及びCFII感作血球に対する凝集価は16倍，
いずれも4∼6週後最高の抗体価を示したが
CFI感作血球に対する凝集価は2倍陽性であ
結核免疫に関する研究
つたが菌体及びOT感作血球による吸収血清
19
8）ツベルクリン反応（第4表）
ではいずれの感作血球を以ってする凝集反応
死菌群及びWax+PS群では同程度の強い
も陰性となり，脱脂菌体による吸収ではOT.
硬結発赤を伴なった「ツ」反応が惹起された
CFII感作血球凝集価は2倍に低下し,CF感
作血球による吸収血清ではOT感作血球凝集
がWax群では硬結は伴なわなかつたが著明
反応のみ軽度に残存し（凝集価4倍)CF,
2乃至4週で陽性，6週以後は陰性となり，
CFI及びCFII感作血球凝集反応は陰性となっ
他の1頭は終始陰性であった．此の件に関し
な発赤が認められた.Wax+PF群の1頭が
た
．
ては現在尚検討中である．
考
武田3)は菌体から抽出したWax中免疫原性
接
PF+Wax注射群についてPFI感作タンニン酸
を有するものはWaxDであり，此のWaxD
処理血球凝集反応を行ったが,PF+Wax群の
を水解すると血球感作原性を有する多糖体が証
一頭にのみ抗体産生が認められたに過ぎな･かつ
明されると述べまた抗WaxD血清はOT感作
た.Waxの混合がPFに対する抗体産生を促
血球，多糖体感作血球と反応するが蛋白感作血
進したと確言出来る所見は得られなかった．
球とは反応しないと報告している．前編4)にて
Waxの「ツ・ア」賦与能に関してはMyrvik
報告したNollu・Bloch'0)の12週培養WaxD
ら'2)はWaxは「ツ・ア」を賦与すると言い，
に近似せるWaxを免疫原として行った私の成
柳沢'3)は人型菌青山B死菌体よりAnderson
績もまた僚壁これと一致した．た野武田ら3)の
2)の方法で抽出せるWax(蛋白反応陽性）は
成績に比して一般にCFに対する抗体価が低か
強い‘「ツ･ア」賦与能を有するが,H37Rv生
ったが，これは反応原として用いたCFが私の
菌体よりAnderson及びSchargafrl4)法を併
場合は菌体に，武田の場合はツベルクリンに由
用して抽出した蛋白反応陰性のWaxには「ツ
来した為かも知れない．
・ア」賦与能なく，蛋白は弱い「ツ・ア」賦与
Robert等11)は1955年egg-albuminに結
能を示すと報告した．私の場合もPF注射群
核菌Waxを混じて免疫すればegg-albumin
はWax群よりR6mer反応弱く柳沢の成績に
単独免疫時よりも抗egg-albumin抗体の増産
一致した．
されることを報告しているが，私はPF及び
結
ウサギを用い前編4)にて報告したWaxの抗体
＝
同冊
産生能及び「ツ・ア」賦与能の検討を行った．
混合して注射した場合はOT感作血球凝集反
応のみに対する抗体産生の著しい昂進が認めら
重要な知見を摘記すると次の如くである．
れた．
1)Wax単独注射によってOT感作血球
及びCF感作血球凝集反応，東風沈降反応，
Waxを反応原とする沈降反応及び補体結合反
応等に対する抗体産生が認められたが,PFI感
作タンニン酸処理血球に対する抗体産生は認め
られなかった．
2)WaxにSchlepperとしてブタ血清を
3)Wax注射により白血球の喰菌能は昂進
したがブタ血清をSchlepperとして混合して
注射すると昂進は一層著明となった．
4)PF単独注射ではOT感作血球，東風
沈降反応,Waxを抗原とした補体結合反応及
び沈降反応に対する抗体の産生は認められなか
った．
宮
20
森
一
5)Waxは著明な「ツ・ア」賦与能を有す
文
るが,PFのそれは弱かった．
献
1）秋山舜一：金大結研年報，10(下),147,1952.
大結研年報,8（上),121,1949.10)Noll,
2)AndersOn,R、J、:J.Biol・Chem.,83,
H･andBloch,H.:Am・Rev.TUb.,67,828,
505,1929.3)Takeda,Y・etal.:J.J.
1953.11)Robert,G､,Albert,H・and
Tub・,2(4),361,1954;16(上),11,1958．2
Jeanne,M、:J･Exp･Med.,102,83,1955.
(2),216,1954.4）宮森正孝：金大結研年
12)Myrvik,Q・andWeisser,R，S、:J.
報，5）藏尚之：金大研結年報,8(上)，113,
Immunol,68,413,1952.13)柳沢謙：ア
1949.6）秋山舜一：金大結研年報,10（上)，
1,1952.7）浅見望,他：日本細菌学雑誌，
E･andSaidel,H.F、:J・Biol・Chem.,177,
9(4),271,1954.8)Boyden,S、V、:J.
417,1949.
レルギー.,4(2),73,1955.14)SchargaH,
Exp・Med.,93,107,1951.9)大山馨：金
第1表
第1図
PF,PFI,CF,CFI,CFIIの定性反応
各種免疫群におけるOT感作血球凝集反応
ー
PFI
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PF
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WaX+豚血清
一・・・■一･･⑨一・‘・一
死 菌
結核免疫に関する研究
21
第2表
第3図
PF,Wax+PF及びWax+ブタ血清
各種免疫群においてWaxを抗原と
免捜群におけるPFI感作タンニン酸処
する沈降反応
００
００
００
００
００
００
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や０
００
0
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‘(平均値を示す）
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０Ｏ ０
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Ｎ ＮＮ
ＮＮ
鶉、勇
６１８
４２
血清稀釈４０１
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0
００
００
1;2 1;2 1;2
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‘■･‘DC一一・・一ー
一
WaX+PF
死 菌
Wax+豚血清
ブタ血清
第4図
各種免疫群における東風沈降反応
(平均値を示す）
16
血清稀釈４１１
８４２
第2図
0
一
一菌
諏↑
一一
一一死
罪一一清
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一部
一Ｆ
一畔
一
一
争
る補体結合反応
●
各種免疫群においてWaxを抗原とす
第5図
各種免疫群の結核菌に対する喰菌現象
血清稀釈
）
4
喰菌率
３２
６１１１１
１０
↑
前 1 2 3 4 5 6 7 8
一
Ｆ↑菌
一
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半一一側
週一↓一附
１１
過．
経
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一隅
Wax+PFWax+豚血清死菌
一
−.‐･･･-→‘･･−o一・一一｡■■■−−−■■o−D−今
一
−−経過11数（週)−＞
‐-．‐‐----wax−ー一一一一PF
第3表Wax免疫血清の吸収後におけるOT,CF,CFI及びCFII感作血球凝集反応
●●
●●
一一一一
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森
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22
第4表各種免疫群におけるツベルクリン反応
（10×OT48時間判定）
(註)iは硬結を示す．
’
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