生物工学的手法を用いた無病こんにゃくの計画的増殖法 1．試験のねらい生物工学的手法を用いて無病こんにゃくの計画的な増殖を図るための培養条件を検討し、将来、県内こんにゃくのウィルスフリー種球の生産供給体制確立に資するものとする。 2．試験方法在来種の生子を殺菌して茎頂培養を行った。無菌的に生育した培養個体の葉の一部を用いてこんにゃくモザイクウィルス（KMV）の検定（EL I SA法）を行い、KMVフリーを確認した培養個体を増殖のための元株とした。増殖のために無菌個体の葉柄、塊茎、根をそれぞれ用いた。葉柄は5㎝程度に切取ったものを約7㎜の長さに細切し、シャーレの培地に置床した。1か月後葉柄の切断面から形成したカルスを約10㎎の大きさで目的とする数に細切し培養すると約3 か月で馴化可能な幼苗となった。この間20日ごとに継代し、シュートが形成してからは発根用の培地に移植した。塊茎は約50∼100㎎の大きさに細切しシャーレで培養した。培養の初期に目的の数に分割しその後は2週間ごとに継代しながら塊茎を肥大させ、シュートが形成してからは発根用の培地に移植し、馴化可能な幼苗とした。根は約5mの長さに細切し培養後工か月後に形成したカルスを増殖培地に移し、増殖したカルスを不定胚誘導培地に移行した。移行後約1か月ごろから胚様体が形成し、それらは数日のうちに塊茎になるとシュートを形成しながら発根した。根から形成したカルスの一部は5℃で30日間保存し、増殖をほぼ停止させた後、再び25℃の増殖条件に移行させた。馴化したユ，017個体の中から28個体の葉についてKMVの検定を行った。 3 試験結果およぴ考察培養条件を検討した結果、それぞれの培養に最も適した条件を表一1に示した。また、無菌母株の葉柄、塊茎、根を用いた増殖フローを図一1に示した。それぞれの培養系の長所と短所を示したものが表一2である。根から形成した胚様体は不定胚としては不完全であるため今後さらに検討する必要がある。また根から形成したカルスを低温で増殖をほぼ停止させ、3か月後に再び増殖、再分化能を有していることが確かめられた。今後、保存期問の延長を図ると共に凍結法、乾燥法など他の保存方法についても検討する必要がある。大量増殖の手法は増殖の向上を図ると同時に無菌個体の保存法が確立されて増殖の制御が可能となることによってさらに実用に即した増殖技術に発展すると考えられる。なお、馴化した個体のKMV検定結果は全てウィルスフリーであることが確認された。 4 成果の要約こんにゃく在来種の茎頂培養により得られた無菌個体のうちKMVフリーを確認した個体を培養元株としてその葉柄、塊茎、根からの計画的な増殖法を開発した。（担当者生物工学部小林光子）一23一表一1 培養条件’覧塔地固成，書讐灸俳略曇黎本 2．4・o 1＾ II＾＾ ○内蛙図‘ Iの看号溜地 □巴1’ I1’2 1−1’ 墓吸切代略蟹（ I ，凹5 茎頂帖代噛雀 ‘ □ ，均讐黎噂さ墨の醐一〇．1 0．o1 試籔管竈靹初代毫倶（ I 〕奄一 1．0 0．㎝晧曇ぴん莞硬蟻8曙曇｛ ‘ 一靱一 1．0 0．01 シ㌃・レ略竈湧∼カルス晧讐｛‘ ，ー 1．o o．ol ■ 免硬1轟8崎賓｛ ‘ ，一一 ‘ 蛤讐ぴん靱靱茎初代堵養 ‘ I ，一！．0 0．Oi シt一レ崎塊蟹1；穴堵讐｛ ■ ， ’ 1．O O．01 I書蟹ぴん靱轟纈誘靱略讐一 ‘ ，黎勿代蜷￡｛π ， 1．0 便∼カルス溜簑｛ ● ， 1，0 不症唖畷靱略讐｛ ‘ ， 1．o 幻婁8犬狢蟹｛ ‘ ， 0．5 シf i I’ 略臼．2 1．o 垢曇ぴん O．01 廃襖露靱壌讐｛口）帽写真1．葉柄から形成したカルス柱崎鴫舳・ずれも刺1‘1‘■I0，2一．シ□83．O一．ψ5．Oに固黎Lた．蠣灸艘は316“一〃1〃伽②園司壌轟冒度舳、ずれの均合も25℃であoた．菱一2 籔菌母蛛の魁薫衝およぴ檀を周いた均殖系⑳比峻一1本の蟹菌母榛から1．O00便体蟻殖のモデ凡一一．長厨棚系鰹欠点囚化までの鰯蝸碑い．螺の司雌妙帆、と考え帥る．蛭菌汚鮒注童が必璽．供鰯と易詔堕舷から誹薗的増殖が可能．母榊鵡失．分胸傲舳．’ 少量のカルス“胸，から壇冠できるためカルス鯉を香定腺仙計醐鞭が’可蕗母㈱嫉の可雛犬．麟細形戯回鰹固化までの鯛が鼠も風1．鰯硬メスで分鮒顯作が秘要．カルス黎馳香定蛛帆1．ヵルスを低遭で増殖を惇止させ．保存司鮨諭藪性脇る．母㈱鱗できる．写真2．根から形成したカルスと胚葉体一一・’一舳一’’一一’一’ 一一一一‘一’一‘一一一一’｝＾・．一’’一一i 竈“篶．カルス竈広 “讐”＾ η三8犬クs三ト葦書…、免o居o l・㊧一銘、r鶉、、rプ、簑ボム制一凹ト鳩 i＿、‘一一．一一…・一一■一一一‘｝‘一＾一‘i一’一一一一・一一 “一 ’；言芯‘‘‘……蒜脹’‘… ‘ 蠣；‘18口 ■三犬況讐o勿｝6むク＾・トー；● ：98 屋8 臼一食 1 カ或口” 1 口㊧一銘、、協．、識、r鴇ム竜却一濃 1 蟹四｛3掠‘oウ成側篶的簑カ’■ス泌成カ ’1’ ス o● 口唖撒伶 o■一ク＾一｝一1□ ，2偲晶；o 螂収，固O 螂戌口D● 1π㊧一箭一腎蔚箭箭一幽箭一心浄判伽膿。一州 5月 o月，1月，月’ 40 50 60 ■0 80 80 IO0 I10 120 190．コ’0 150 ，O0 170 I80 8月 9月 10月 11月 1月 2月 3月 ’月 12月 1月 2月 5月 8月 7月図一ユこんにゃくの増殖フロー（1本の母株から1，000個体を増殖すろ場合）一24一