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DiSH™ キット
ハイブリドーマ作製 / セレクション
ハイブリドーマの作製および蛍光もしくは磁気によるセレクションが可能なキットです。
ミエローマ融合パートナー細胞の改良により、目的抗体を生成するハイブリドーマだけを標識し、何十万の細胞の中から分離で
きます。また、本キットで作製するハイブリドーマは、抗原特異的な抗体を分泌するだけでなくハイブリドーマ表面にも抗体を
発現します。リンパ球の採取からはじめのスクリーニングまで、平均で 16 日（14 ～ 18 日）で完了します。
特長
● 短時間・低コストでハイブリドーマを作製
● 特異的で安定なハイブリードーマのセレクションが可能
● 限界希釈サブクローニングと比較して、クローン化細胞株が最小限の操作で作製可能
構成内容
●
●
●
●
Sp2ab ミエローマパートナー細胞 (1 vial of 2x106 )
PCM (Prefusion Medium)
WCM (Wash Medium)
FCM (Fusion Medium)
●
●
●
●
AbeoClone™ Medium
RCM (Recovery Medium)
ECM (Expansion)
ポリエチレングリコール (PEG)
アプリケーション
● マウスのモノクローナルハイブリドーマの作製、セレクション、クローニング
● 細胞株開発
1. 免疫
2. 融合
8−16
週間
8−11
日間
4. クローン
3. 標識と分離
1日
磁気ビーズによる分離
10-14
日間
Antigen
AbeoClone のメディ
ウムでディッシュ上
で培養し、コロニー
を選択、ハイブリドー
マの増殖へ
磁気ビーズに結合した抗原
または
gαと Igβを発現している
ミエローマ細胞 Sp2ab と融合
抗体を分泌する
B 細胞
96 穴プレ−トなどで、
ハイブリドーマから抗体
の分泌を確認し、その後
ハイブリドーマの増幅へ
Antigen
ハイブリドーマが
抗体を分泌
表面にも抗体を発現
FACS による分離
蛍光標識された抗原を
発現させた細胞
1
目的抗原で免疫したマウスからリンパ球を採取します。
2
B 細胞をミエローマ細胞 Sp2ab（Igα及び Igβを発現）と融合させ、特異的なイムノグロブリンを分泌・表面発現するハイブリドーマを作製します。
磁気ビーズによる分離方法
3
磁気標識を用いて抗原特異的ハイブリドーマを単離します。
4
上清を AbeoClone のメディウムで 10 ～ 14 日間培養します。
5
10 日後、上清を分析して分泌された抗体（目に見えるコロニー）
を確認します。
FACS による分離方法
3
抗原特異的ハイブリドーマを、蛍光活性化セルソーター（FACS）
によって、単一細胞に選別します。
4
上 96 ウェルプレートに細胞を移し、10 日後抗原特異的抗体の有無を
分析します。
5
必要に応じ、目的のハイブリドーマを増幅します。
Enzo Life Sciences, Inc.　メーカー略号：ENZ
品名
DiSH™ Kit
品番
ENZ-71001-0001
包装
1 kit
希望販売価格
\179,000
ハイブリドーマ作製 / セレクション
DiSH™ キット
作用機序
B 細胞が形質細胞に発達すると、HC 核転写の転写後プロセシングの変化に
より、HCm から HCs の発現へ変わると報告されています。膜貫通ドメイン
欠損の HCs タンパク質は、関連レセプタータンパク質 Igαと Igβと結合
できず、分泌されます。この発現の切り替わりと転写効率の増加により、
形質細胞は安定的に抗体を分泌します。
本キットでは、Igαを過剰発現するよう改良されたミエローマ融合パート
ナー細胞を用いて、大量の BCR 複合体を細胞表面に持つハイブリドーマを
作製します。膜表面の免疫グロブリンの発現は、ハイブリドーマクローン
の分泌能力と相関します。
その後、ターゲット抗原に高い親和性を持つハイブリドーマは標識され、
FACS や磁気分離によって数時間のうちに何十もの細胞の中から分離する
ことができます。
試薬の使用手順
免疫
ミエローマ細胞の準備
融合
リンパ球の採取
重鎖
HCs
細胞膜上にある
B 細胞受容体
（BCR)
軽鎖
LC
Igα Igβ
抗体分泌
膜ドメイン
標識と分離
融合
軽鎖
LC
重鎖
HCｍ
スクリーニング
選択ソート
クローン
分離クローニング
採取
FGM(Fusion Medium)
WCM(Wash Medium)
RCM(Recovery Medium)
PEG
ECM(Expantion Medium)
Sp2ab myeloma fusion partner
二次抗体
AbeoClone™ (Semisolid Medium)
AbeoClone™ (Base Semi-solid Medium)
DiSH kit
キット構成品単品
Enzo Life Sciences, Inc.　メーカー略号：ENZ
品名
PCM (Prefusion Medium)
WCM (Wash Medium)
FCM (Fusion Medium)
AbeoClone™ (Semisolid Medium)
RCM (Recovery Medium)
ECM (Expansion Medium)
PEG (polyethylene glycol)
Sp2ab myeloma fusion partner
品番
ENZ-70001-0200
ENZ-70002-0200
ENZ-70003-0200
ENZ-70004-0090
ENZ-70005-0200
ENZ-70006-0200
ENZ-70007-0001
ENZ-70008-0001
関連商品
品名
AbeoClone™ (Base Semi-solid Medium) (2X)
Goat anti-mouse IgG (human & mouse Ig adsorbed)
包装
200 mL
200 mL
200 mL
90 mL
200 mL
200 mL
1.5 mL
1 vial
希望販売価格
\10,000
\9,000
\10,000
\53,000
\53,000
\17,000
\9,000
\161,000
Enzo Life Sciences, Inc.　メーカー略号：ENZ
品番
ENZ-70009-0045
ALX-211-205TS-C100
包装
45 mL
100 µg
希望販売価格
\26,000
\37,000
（12174）
● 希望販売価格･･･「希望販売価格」は参考であり、販売店様からの販売価格ではございません。
記載の希望販売価格は２０１5 年 1 月１日現在の希望販売価格です。
予告なしに改定される場合がありますので、ご注文の際にご確認下さい。消費税は含まれておりません。
● 使用範囲･･･記載の商品は全て、「研究用試薬」です。
人や動物の医療用・臨床診断用等としては使用しないよう、十分ご注意下さい。
品名
品番
包装
希望販

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