BD バイオコートTM T細胞活性化プレート（抗マウスCD3） 製品説明 マウス脾細胞 増殖アッセイ T細胞レセプター複合体抗体をコーティングしたプレートは、様々な動 物種のT細胞活性化誘導に使われています。BD バイオコート T細 胞活性化プレートは、高品質の抗CD3抗体（BD ファーミンジェン） あらかじめ調製する緩衝液と培地 ● 無血清培地： 2 mM L-グルタミン含有RPMI 1640（GIBCOカタ ● 完全培地：2 mM L-グルタミン含有RPMI 1640（10%FBS入り） ● 1XダルベッコPBS（DPBS； GIBCOカタログ番号： 14190-Xま ログ番号： 11875-X） でコーティングされています。BD バイオコート T細胞活性化プレート は、ロット間の品質にバラツキがなく、プレートが使いやすいようにフ タ付きで個別包装されています。全ロットは培養T細胞の増殖能に たは21600-X） ついて品質テスト済みです。 ● BD バイオコート T細胞活性化プレート（抗マウスCD3）の用途 ● T細胞の活性化 ● サイトカイン産生 ACK緩衝液： 0.15 M NH4Cl、0.01 M KHCO3、0.1 mM Na2EDTA、pH 7.2∼7.4 500 mLの場合： 400 mLのdH 2 OにNH 4 Cl 4.01 gおよび KHCO3 500 mgを添加。0.5 M EDTA溶液を100 µL加えます。 NaOHまたはHClで、pH を7.2∼7.4に調整します。 ● サイトカインmRNAの定量 ● Co-stimulation マウス脾細胞の採取 ● T細胞機能におよぼす薬効の研究 1. T細胞活性化プレート（抗マウスCD3）の品質保証 ● 細菌、および真菌の陰性確認検査済み ● マウス脾細胞増殖能について検査済み マウスより無菌的に脾臓を取り出し、10 mLの無血清培地が 入った100 mmディッシュ （BD ファルコン カタログ番号： 351029または351999） に脾臓を入れます。一般に、100 mmのディッシュ1枚にマウスの脾臓を3つ入れます。 留意： 6週齢のマウスから回収できるリンパ球は、平均5∼15×107 個です。この数値は、 マウスの年齢、系統、性別、ストレスなどにより異なります。 2. 結合組織を切り離し廃棄します。 3. 無血清培地10 mL入りの清潔な100 mmディッシュに、脾臓 を移します。 4. ピンセットとメスを用いて、脾臓をできるだけ細かく切り刻み懸 濁させます。培地は濁って赤みを帯びるはずです。 5. 10 ccシリンジと18ゲージ注射針を用いて、ディッシュの中で脾 臓懸濁液の吸引・排出操作を、ゆっくり3回行ないます。 6. 針を付けたまま、脾臓懸濁液をもう一回吸引し、BD ファルコ ン遠心分離用50 mLコニカルチューブ （BD ファルコン カタロ T細胞活性化プレート（抗マウス CD3）でマウス脾細胞を2日間培養した後、細胞増 殖アッセイを4時間実施。 グ番号：352070または352098） へ移します。 7. ディッシュを10 mLの無血清培地でリンスし、残っている脾臓 懸濁液 をシリンジに吸引し、50 mLコニカルチューブに移し ます。 8. 450×gで3分間遠心分離し、上清を捨てます。 9. チューブに残った培地で細胞を静かに懸濁します。 10. ACK 緩衝液15 mL（採取脾臓1つに対し5 mL） を加え、ピ ペットで静かに吸引・排出操作を行ないます。 11. 室温で5分間インキュべートし、2∼3分間手で静かに混和し 使用説明書 ます。 232 12. 採取した脾臓1つにつき5 mLの1X DPBSを加えて、細胞溶 解を止めます。直ちに、200×gで10分間遠心分離を行ない ます。 13. 30 mLの1X DPBSで細胞を再懸濁します。200×gで5分間 遠心分離します。 14. 上清を捨てます。完全培地5.25 mLで細胞を再懸濁します。 ピペットで細胞懸濁液の上下操作を数回行ない混和します。 15. コールターのカウンターで、懸濁した細胞を数えます。細胞密 度1×107 個/mLに必要な容量を計算します。50 mLコニカル チューブの中に、完全培地を必要な容量加えます。 製品リスト 製品 入数（ケース） カタログ番号 抗マウス CD3 96ウェル、透明、フタ付き 5枚 354720 コーティングなし、コントロールプレート 5枚 354730 96ウェル、透明、フタ付き 細胞増殖アッセイ 1. 適当な濃度（6.25×10 5個/mLから2.5×10 6個/mL） の細胞 100 mLをT細胞活性化プレートに播種し、CO2インキュベー 入数（ケース） カタログ番号 354725 BD ファルコン 50 mLコニカルチューブ ポリプロピレン、25本/ラック×20、滅菌 500 352098 BD ファルコン 50 mLコニカルチューブ ポリプロピレン、25本×20 （ラックなし） 、滅菌 500 352070 長490 nmのODを測定します。 BD ファルコン 100 mmディッシュ スタンダード100 mm×15 mm、滅菌 500 351029 （米国特許番号 * MTSテトラゾリウム化合物は、南フロリダ大学に特許が与えられており 、Promega Corporationに使用権が与えられています。 5,185,450） BD ファルコン 100 mmディッシュ 100 mm×15 mm、滅菌、スタッカー 240 351999 BD ファルコン 5 mLピペット 200 357543 200 357551 50 353071 3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-5-（3-carboxymethoxyphenyl）2-（4-sulfophenyl）-2H-tetrazolium（MTS* Promega カタログ 番号： G3581）20 mLを各ウェルに添加し、CO2インキュベータ で37℃で4時間培養します。 3 製品 5枚 タに入れて37℃で45∼48時間培養します。 2 関連製品 マイクロプレート分光光度計で、対象波長700 nmで測定波 抗ヒトCD3 96ウェル、透明、フタ付き BD ファルコンTM 製品 滅菌、個別包装 BD ファルコン 10 mLピペット 滅菌、個別包装 96ウェルプレート用フタ 滅菌、個別包装 BDファーミンジェン製品 BD OptEIATM ELISAセット、マウス IL-2 マウス IL-2ELISAセット、IL-2捕捉抗体、 2614KI 検出用ビオチン化抗体 BD製品 注意： 製品は受領後2∼8°Cで保管してください。 製品は発送後3ヶ月間安定。 研究以外の目的には使用しないでください。 10番メス替え刃 371110 シリンジ 10 cc シリンジ 309604 登録商標 BD バイオコート、BD ファルコンおよびBD OptEIAは、ベクトン・ディッキンソン社 の登録商標です。 使用説明書 カタログ番号： 354720、354730 メス替え刃 233
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