血中CL-K1濃度測定によるDIC診断法 旭川医科大学 医学部 医学科 准教授 大谷 克城、 教授 若宮 伸隆 Harvard Medical School, Massachusetts General Hospital Assistant Professor Kazue Takahashi 注）発表当日には、配布資料に乗せていないデータと補足説明があります。 コレクチン(コラーゲンを有するレクチンの呼称) Low serum concentration of MBP in man is associated with recurrent infections Super et al, Lancet 1989 コレクチンの機能 中 和 凝 集 感染拡大阻止 ウイルス MBL 補体活性化（レクチン経路の活性化） 補体 オプソニン C3 C4 MASP-2 溶解 溶解 コレクチンファミリー発見の歴史 < Old collectin members > 1909 1978 1985 1989 1993 Bovine conglutinin (SP-D family） Mannan-binding lectin (MBL) Surfactant protein A ( SP-A ) Surfactant protein D ( SP-D ) CL-43 (SP-D family） Bordet Kawasaki White Crouch Holmskov < New collectin members were found by our group > 1999 CL-L1 Ohtani 2001 CL-P1 Ohtani 2006 CL-K1 Keshi ＤＩＣ （Disseminated Intravascular Coagulation） 播種性血管内凝固症候群は、本来出血箇所のみで生じる べき血液凝固反応が、全身の血管内で無秩序に起こる 症候群である。 早期診断と早期治療が求められる重篤な状態である。 基礎疾患：妊娠合併症（産科疾患（胎盤性組織因子の血管 侵入））や敗血症（グラム陰性桿菌の感染症）、悪性腫瘍 （膵・胆系腫瘍、組織因子の血管内漏出）、急性白血病（白 血病細胞内の組織因子）、外傷、熱傷、膠原病（血管炎合 併）、肝臓疾患（肝硬変、劇症肝炎）、膵臓疾患（急性膵炎）、 脱水など様々な生体ストレスが原因になりうる。 ＤＩＣ （Disseminated Intravascular Coagulation） 播種性血管内凝固症候群は、 全身血管内における持続性の著しい凝固活性化により 微小血栓が多発し、進行すると微小循環障害による 臓器障害をきたすとともに、凝固因子・血小板が使い 果たされる（微小血栓の材料として消費される。医学的には 消費性凝固障害と言う）ため、出血症状が出現する。 凝固活性化とともに、線溶活性化（血栓を溶かそうとする 生体の反応）もみられる。 血を止めるための血栓（止血血栓）が、過剰な線溶に より溶解することも出血の原因となる。 急性期 DIC 診断基準. SIRS (Systemic Inflammatory Response Syndrome) 全身性炎症反応症候群 日本救急医学会雑誌 vol 18 P237‐272. MBL-MASPsはトロンビン様活性により凝固の役割を担う K. Takahashi, Immunobiology, 2011 216(1‐2):96‐102 Establishment of CL-K1 ELISA system Using CL-K1 antibodies No. site (J Histochem Cytochem, 2007) 1 CRD Monoclonal antibodies 20 CRD Polyclonal antibodies 2 whole anti CL-K1 antibody Polyclonal antibody Coating with 1st CL‐K1 antibodies ↓ expression rhCL-K1 incubation ↓ Addition of detection antibodies E.coli ↓ Avidin-Biotin HRP-Complex E.coli ↓ CHO cells Peroxidase substrate ↓ 450 nm observation ヒト 血漿中CL-K1濃度 ～ MBLとの比較 ～ CL-K1 10.00 CL-K1 (g / mL) 10.00 8.00 male 6.00 female 9.00 8.00 4.00 7.00 2.00 6.00 0.00 0 50 100 150 200 5.00 4.00 MBL 3.00 MBL (g / mL) 10.00 2.00 8.00 1.00 6.00 0.00 4.00 CL-K1 CL-K1 2.00 0.00 0 50 100 150 200 0.34 ± 0.13 (g/mL) MBL MBL 1.72 ± 1.51 (g/mL) J. Biochem, 151:57‐64, 2012 Plasma concentration of CL-K1 CL-K1 ( g / mL) 1.50 male 1.00 female 0.50 0.00 age 播種性血管内凝固症候群 （disseminated intravascular coagulation：DIC） 基礎疾患の存在下に全身性持続性の著しい凝固活性化を きたし、細小血管内に微小血栓が多発する重篤な病態であ る。 DICの三大基礎疾患は、敗血症、急性白血病、固形癌で あるが、その他にも各種重症感染症、外傷、熱傷、熱中症、 手術、腹部大動脈瘤、巨大血管腫、膠原病（特に血管炎合 併例）、産科合併症（常位胎盤早期剥離、羊水塞栓）、劇 症肝炎、急性膵炎、ショック、横紋筋融解など多くの基礎 疾患が知られている。 DICおよびnonDIC患者におけるCL-K1の血漿中濃度 中央値 424 （健常人 238 ng/ml 245 ng/mL） DIC患者においてCL-K1レベルが有意に上昇した疾患 （High > 619 ng/mL） DICとは無関係にCL-K1レベルが有意に上昇した疾患 （High > 619 ng/mL） 凝固系におけるCL-K1の役割 MBLは肝臓で産生 血漿中濃度はDICと相関 しない CL-K1 ligands CL-K1/MASP CL-K1はほとんど全て の臓器で産生 （血管内皮細胞でも） 血漿中濃度はDICと相関 が見られる 上昇した血漿CL-K1はDICの発症予測に有用な新たな危険因子であり バイオマーカーとなるのでは 従来技術とその問題点 • DIC診断では、厚生省の診断基準や各診療科 により個別の診断基準が存在し、統一されて いない。 • 多種の基礎疾患に起因して、ＤＩＣが発症する ために、統一した疾患としての形態をとらない。 • ＤＩＣ の予後に何が重要かが、基礎疾患により 異なる可能性があるために、各診療科での基準 が異なる等の問題がある。 新技術の特徴・従来技術との比較 • 若宮らが開発したCL‐K1血中濃度測定技術に よるDIC診断法は、簡易、迅速かつ安定した DIC診断法である。 • 従来とは、全く異なる観点での、血液の状態 を把握する点でユニークである。 想定される用途 • 本技術の特徴を生かすためには、マイクロデ バイスやイムノクロマト法などの簡便な測定 系に乗せることで、ベッドサイドでの利用にメ リットが大きいと考えられる。 • 本法による新しいタイプのＤＩＣが明らかにな る可能性がある。 • ＤＩＣの治療のマーカーにもなる可能性がある だけでなく、抗体等は、ＤＩＣの治療用途に展 開することも可能と思われる。 実用化に向けた課題 • 現在、ＥＬＩＳＡ法の測定系まで開発済みであ る。しかし、より簡便なマイクロデバイスやイ ムノクロマト法への開発が未解決である。 • 今後、マイクロデバイスやイムノクロマト法に ついて実験データを取得し、ベッドサイドで利 用できるように条件設定を行っていく。 • 実用化に向けて、血中濃度測定感度と精度 を、より向上できるように技術を確立する必 要がある。 企業への期待 • 未解決の簡便なマイクロデバイスやイムノク ロマト法への開発については、企業の技術に より克服できると考えている。 • 簡便なマイクロデバイスやイムノクロマト法へ の開発の技術を持つ、企業との共同研究を 希望している。 本技術に関する知的財産権 • 発明の名称 ： Methods of diagnosis and predicting risk of developing disseminated intravascular coagulation • 出願番号 ： U.S １４／３２３,７９３ • 出願人 ： Massachusetts General Hospital （MGH）, 旭川医科大学, 扶桑薬品工業 • 発明者 ： 若宮伸隆、大谷克城 (旭川医科大学), Kazue Takahashi (MGH) お問い合わせ先 国立大学法人 旭川医科大学 知的財産センター 尾川 直樹 TEL : ０１６６－６８－２２５９ FAX : ０１６６－６６－００２５ E‐mail : rs‐sr.g@asahikawa‐med.ac.jp
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