健常人(MT) の末梢血単核球の MLPC 法で2週間培養後 の細胞内サイトカインの解析 方法 l 健常人の末梢血単核球と WT1 peptide を MLPC 法で2週間培養後、WT1テトラマー 解析を行う。 l テトラマー陰性 well と陽性well をそれぞれチューブにまとめ等分し、以下の2種類の 方法で4時間培養する。 ① no stimulation (Brefeldin A 10µg/ml) ② WT1 peptide (mWT1 : 5µg/ml + Brefeldin A : 10µg/ml) l 培養後、細胞表面染色、細胞内染色を行い細胞内 IFN-γ の解析を行う。 使用した抗体 : WT1 tetramer -PE, CD8 -PerCP Cy5.5, IFNγ -APC, 140501 IgG1-PE MT WT1テトラマー陰性well 003 MT PerCP/5.5.003 IgG1-APC 003 MT PerCP/5.5.003 100 104 CD8-PerCP/Cy5.5 CD8-FITC IFNγ-APC 0.45 100 101 102 103 104 CD8-PerCP/Cy5.5 0.02 0.05 85.62 14.31 CD8-PerCP Cy5.5 Cy5.5 008 MT tet- p-.008 100 101 102 103 104 CD8-PerCP/Cy5.5 0.00 0.00 0.00 100.00 100 101 102 103 104 CD8-PerCP/Cy5.5 CD8-PerCP Cy5.5 CD8-PerCP Cy5.5 ② WT1 peptide 007 MT tet- p+.007 0.24 100 101 102 103 104 CD8-PerCP/Cy5.5 CD8-PerCP Cy5.5 0.05 2.02 85.02 12.91 100 101 102 103 104 CD8-PerCP/Cy5.5 CD8-PerCP Cy5.5 007 MT tet- p+.007 IFNγ-APC WT1 tetramer-PE 007 MT tet- p+.007 IFNγ-APC 100 101 102 103 104 CD8- FITC WT1 tetramer-PE 0.04 008 MT tet- p-.008 IFNγ-APC 008 MT tet- p-.008 005 MT -.005 WT1 tetramer-PE CD8-PerCP Cy5.5 ① no stimulation 刺激前 100 104 CD8-PerCP/Cy5.5 CD8-PerCP 0.00 8.33 0.00 91.67 100 101 102 103 104 CD8-PerCP/Cy5.5 CD8-PerCP Cy5.5 140501 IgG1-PE MT WT1テトラマー陽性well 003 MT PerCP/5.5.003 IgG1-APC 003 MT PerCP/5.5.003 100 104 CD8-PerCP/Cy5.5 CD8-PerCP 3.20 0.21 IFNγ-APC WT1 tetramer-PE 100 101 102 103 104 CD8-PerCP/Cy5.5 CD8-PerCP Cy5.5 CD8-FITC 82.0 006 MT tet+ p-.006 0.06 17.73 100 101 102 103 104 CD8-PerCP/Cy5.5 0.00 0.15 0.00 99.85 100 101 102 103 104 CD8-PerCP/Cy5.5 CD8-PerCP Cy5.5 CD8-PerCP Cy5.5 ② WT1 peptide 005 MT tet+ p+.005 0.49 0.11 100 101 102 103 104 CD8-PerCP/Cy5.5 CD8-PerCP Cy5.5 85.66 005 MT tet+ p+.005 0.70 13.53 100 101 102 103 104 CD8-PerCP/Cy5.5 CD8-PerCP Cy5.5 IFNγ-APC 005 MT tet+ p+.005 IFNγ-APC 100 101 102 103 104 CD8- FITC WT1 tetramer-PE WT1 tetramer-PE 1.82 006 MT tet+ p-.006 IFNγ-APC 006 MT tet+ p-.006 004 MT +.004 CD8-PerCP Cy5.5 Cy5.5 ① no stimulation 刺激前 100 104 CD8-PerCP/Cy5.5 0.00 6.25 0.00 93.75 100 101 102 103 104 CD8-PerCP/Cy5.5 CD8-PerCP Cy5.5 140501
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