SuperScript IV ® Reverse Transcriptase 10 分間で全てを転写します。 SuperScript® IV 逆転写酵素（RT）は、SuperScript® III RTの高性能な品質を全て兼ね備え、さらに確実性を高めるように改良された新しい逆転写酵素です。 • • • • 先着300名様サンプル配布中お申し込みは裏面をご覧ください。反応阻害剤に対する高い耐性反応時間はわずか10 分高い熱安定性（最大 55℃）広範囲の種類のサンプルからの特異的なcDNA合成反応阻害剤の存在下でも高効率で確実性の高い逆転写反応が行えるように改良されました。 RNAサンプル中に高頻度で含まれる反応阻害成分は、cDNA合成に干渉し、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-qPCR）の結果に偽陰性を生じさせる可能性があります。反応阻害剤としては、RNA 抽出工程で使用された試薬、あるいは胆汁酸塩やフミン酸などの生物学的サンプル由来の成分が考えられます（表1）。SuperScript® IV RTは、SuperScript® III RTや他社RT製品に比べて、混入している阻害物質に対して顕著な耐性を示します（図1）。ホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）RNAのような精製度の低いサンプルでも明確な結果を得られます。 Biological inhibitors Sample Prep inhibitors 表1. 逆転写反応の阻害剤 T Q 50 ng/µL humic acid 0.5% TRIzol® Reagent SSIII SSIV P N SSIII SSIV P N T Q T Size (kb) 8 6 SSIII SSIV P N Q 0.05% bile salts SSIII SSIV P N T Q No inhibitors 4 3 2 1.5 1 0.5 図1. 生物学的サンプルおよびサンプル調製液に含まれる阻害剤の存在下における一本鎖cDNA合成の解析 500ngの0.5–10 kb RNA Ladder（製品番号 15623200）を鋳型として、 oligo（dT）20プライマーと10µL SuperScript® III（SSIII）またはSuperScript® IV （ SSIV ）を用いて、添付のプロトコールに従い、逆転写反応を行った。他社 RT 製品については製造元の推奨プロトコールに従った。阻害剤は、プライマーのアニーリングおよびRT Reaction Mix添加を行う前にトータルRNAに添加した。一本鎖 cDNAは、アルカリゲル電気泳動およびSYBR® Gold Nucleic Acid Gel Stain （製品番号 S11494）による染色により確認した。全てのRNAはNaOHを用いて加水分解し、cDNAのみを可視化した。阻害剤エタノール/イソプロパノ―ル、塩、フェノール/クロロホルム、界面活性剤由来サンプル調製液へパリン、ヘマチン、胆汁酸塩血液、糞便フミン酸、ポリフェノール、多糖土壌、植物ホルマリン、パラフィン FFPE 逆転写困難なRNAサンプルや分解されたRNAからも感度と再現性に優れたcDNA合成が可能理想的な逆転写酵素は、植物由来のRNAサンプル（通常分解されており、RNA 転写産物のコピー数が少なくなります）などの最も逆転写困難なタイプのRNA からの逆転写反応も可能とします。SuperScript® IV RTは確実性および感度が非常に高いため、RNA 分解物だけでなく生体サンプルから未精製のRNAも逆転写検出することが可能です。 B 0.8 0.4 0.2 0 SSIII SSIV P T BR Q N 25S/28S → 18S→ 0.6 SSIII SSIV P T BR Q N Wheat germ RIN >8 Flax seeds RIN 1–3 Normalized RT efficiency A EF1A Wheat germ ETIF5A Flax seeds 5S→ 図2. SuperScript® IV RT の使用で分解RNAからの反応効率が向上（ A ）異なるサンプル由来の 500ng のトータル RNA の 1.2% E-Gel® アガロースゲル電気泳動結果。インタクトなリボソームRNAは高品質なRNA（RIN>8）であることが示された。Agilent Bioanalyzer™ による分析の結果、それ以外の全てのRNAサンプルのRINスコアは1∼3であった。（B）分解されたトータルRNAのRTqPCR解析。分解された RNA（ 100ng ）を鋳型として、20µL の SuperScript® IV をランダムヘキサマーとともに用いて、添付のプロトコールに従い逆転写反応を行った。他社RT 製品については製造元の推奨プロトコールに従った。各逆転写酵素による反応で得られた cDHA 生成液の 10%をEXPRESS qPCR Supermix, Universal（製品に加え、EF1AおよびETIF5A遺伝子を番号 1178501K）ターゲットとして、TaqMan® アッセイを行った。各ターゲット遺伝子について、CT値はSuperScript® IV RT サンプルで得られたCT値に対して標準化した。 SuperScript® IV First-Strand Synthesis System 必要な試薬がそろった便利なキットです。 Ordering information 製品名サイズ製品番号価格* SuperScript IV Reverse Transcriptase 2,000 units 18090010 ¥ 13,100 SuperScript IV Reverse Transcriptase 10,000 units 18090050 ¥ 53,700 SuperScript® IV Reverse Transcriptase 4 × 10,000 units 18090200 ¥ 170,000 SuperScript IV First-Strand Synthesis System 50 rxns 18091050 ¥ 79,200 SuperScript IV First-Strand Synthesis System 200 rxns 18091200 ¥ 269,300 ® ® ® ® * 記載の価格は2015年3月現在の価格です。消費税は含まれておりません。価格は予告なしに変更する場合がありますので予めご了承ください。先着300名様サンプル配布中 SuperScript® IV Reverse Transcriptase サンプルのお申し込みはこちらから www.lifetechnologies.com/xxxxxxxxxxx 製品はの詳細は www.lifetechnologies.com/ssiv をご覧ください。最新の価格および在庫数は、弊社ホームページ右上の “製品価格と在庫の検索” でご確認いただけます。研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続上での使用はできません。記載の社名および製品名は、弊社または各社の商標または登録商標です。標準販売条件はこちらをご覧ください。www.lifetechnologies.com/TC For Research Use only.Not for use in diagnostic procedures. © 2015 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific and its subsidiaries unless otherwise specified. TaqMan is a registered trademark of Roche Molecular Systems, Inc., used under permission and license. Bioanalyzer is a registered trademark of Agilent Technologies, Inc. TRIzol is a registered trademark of Molecular Research Center, Inc. Printed in Japan. INV042-A1502OB サーモフィッシャーサイエンティフィックライフテクノロジーズジャパン株式会社本社：〒108-0023　東京都港区芝浦 4-2-8 [email protected]　0120-477-392　テクニカルサポート TEL：03-6832-6980　FAX：03-6832-9584 オーダーサポート TEL：03-6832-9300　FAX：03-6832-9580 営　業　部 facebook.com/LifeTechnologiesJapan　@LifetechJPN www.lifetechnologies.com 販売店