全胚培養の歴史 • • 全胚培養 • 全胚培養の歴史 • 1967 Circulator systemが考案される【長所】ラットおよびマウス胚の器官形成期（ラット9～11日、マウス7～10 日）を96時間まで培養できた。【短所】準備に時間と手間を要する一度の実験で培養できる胎子の数が少ない培養液の消耗が激しい汚染する確率が高い～1920年代 1930年代着床前の初期胚に関する報告のみ全胚培養の研究が始まる。血漿含有培地で、体節期まで培養。 1960年代医薬品による催奇形性が問題となる。時計皿を用いた凝固血漿培養法。培養胚の72％に血液循環系が形成され、30％が胚芽形成期まで発育全胚培養の歴史 • 1970 • 1974 ローラーボトル法（Roller bottle/tube system）の開発 →長期培養に向かない自動送気型回転式胎子培養装置（Rotator system）の開発。改良（1978）を経て普及。 → 医薬品の代替試験法としては使用されなかった。 Circulator system 培養中のラット胎子回転式胎子培養装置（全胚培養） <池本理化工業＞ Rotater system 1 ラット胎子培養法の実験条件培養可能なラット胚およびマウス胚の発生段階と培養期間実験動物：ラット胎子体齢11日目、12日目培養時間：48時間、72時間解剖手技：Newの子宮壁切開法、Cockloftの卵黄嚢開放法、他培養装置：自動送気式回転培養装置回転数：20回／分培養温度：38℃ 培養液：ラット血清100％培養液量：5ml 培養瓶容量：25ml 培養気相：5％CO2,95％O2混合ガス培養気相流量：100ml／分観察項目：（生理機能）胎子心拍動数、（分化機能）胎子総体節数、（成長指標）胎子総体重、総蛋白質量、頭部長等（脳科学辞典Webより）横山（2006）日薬理誌128:303より胎生12.5日齢ラット胎子を用いた全胚培養の過程 A:妊娠ラット子宮から得られた受胎産物（ｄ：脱落膜） B:胎盤側にて脱落膜を除去した状態（ｐ：胎盤、R：ライヘルト膜） C:さらにライヘルト膜を除去した状態（ｙｓ：卵黄嚢） D:卵黄嚢の開口とラット胎子（ｅ）の摘出Ｅ：全胚培養開始6時間後Ｆ：全胚培養開始42時間後 (J.Vis.Exp42,e2170 , 2010より) 応用の例 ① 細胞系譜や分化様式の研究 ② 発生毒性、胎子代謝、催奇形性など医薬品の安全性試験 ③ 遺伝子導入や遺伝子発現制御技術を利用した基礎研究 ④ 疾患モデル動物に対する遺伝子治療の研究 2