メンブランエンドウ寒天培地LES

カタログコード：
メンブランエンドウ寒天培地LES
MEMBRANE ENDO AGAR LES
OXOID コード：MM0551
2
CULTURE MEDIA
E 組成（培地1Lあたり）
法3）に比べより高い信頼性と正確性を示す。
MacCarthy、DelaneyとGrasso1）は、大腸菌群を最大限に
回復するために、2段階増菌法を推奨した。
ペプトンP ………………………………… 3.70
g
トリプトン ………………………………… 3.70
g
CalabreseとBissonnette4）は、カタラーゼとピルビン酸ナ
酵母エキス ………………………………… 1.20
g
トリウムを添加したM-エンドウ寒天培地は、塩素処理した
トリプトース ……………………………… 7.50
g
乳糖 ………………………………………… 9.40
g
リン酸水素二カリウム …………………… 3.30
g
リン酸二水素カリウム …………………… 1.00
g
ラウリルトリプトースブイヨン（ CM451） 1）（通常濃度)
汚水、排水中の大腸菌群の回復が向上することを発見した。
Noble5）の行った実験では、亜硫酸ナトリウムと塩基性フ
クシンは損傷を受けた大腸菌群には非常に有害になることが
あり、菌の総数を減少させることが示された。
塩化ナトリウム …………………………… 3.70
g
で2時間±0.5時間増菌すると、ストレスを受けた大腸菌群は
デオキシコール酸ナトリウム …………… 0.10
g
十分に回復され、飲料水の最適な水質検査が行える状態にな
ラウリル硫酸ナトリウム ………………… 0.05
g
る。
硫酸ナトリウム …………………………… 1.60
g
寒天 ……………………………………… 10.00
g
通常、飲料水に適さない水や汚水、排水の検査には増菌操
作は不要である。
検体量は検体中の予想される菌数によって決める。検体量
pH7.2±0.2
は、大腸菌群のコロニーが 50 より多く、その他の菌のコロ
ニー数は200未満になるのが理想的である。
塩基性フクシンを0.8g/L加える。
24時間以内の培養でゴールデングリーンの金属光沢のあ
るコロニーを形成する菌は全て大腸菌群と考えられる。金属
光沢はコロニー全体にみられることばかりではなく、中央部
E 調製方法
または外縁に限られていることもある。推奨されている本培
本品45gを1Lの精製水に懸濁し、8mLの10％（w/v）塩基
性フクシンアルコール溶液を添加する。穏やかに沸騰するま
地の厚さでコロニーの大きさは決まり、それによりコロニー
数算定が容易となる。
で加熱して溶解する。本培地を高圧蒸気滅菌してはいけない。
約50℃に冷却し50∼60mmシャーレに4mL分注する。大きな
シャーレを使用するときは、寒天の厚さが約 1.5mm となる
ように分注する。調製後は冷暗所で2週間保存可能。
E 方法
水検体は滅菌メンブランフィルターを通してろ過する6）。
増菌の第一段階には、滅菌培養パッドを滅菌シャーレの上
塩基性フクシン（BR50）
培地1Lに10％（w/v）塩基性フクシンの95％エタノール溶
半分に置き、この上にラウリルトリプトースブイヨン
（CM451）を2mLピペットで分注する。無菌的にメンブラン
液を8mL加える。
注意：塩基性フクシンは発ガン性を有しているので色素粉末
フィルターを培養パッドの上に置き、シャーレを逆さまにせ
を吸い込んだり皮膚に接しないように注意すること。
ず、湿度100％、35℃で1∼1.5時間培養する。その培養期間
中本培地のシャーレを培養器に入れておき、第二次増菌が必
要な場合、培地が適切な温度となっているようにする。第
一次増菌の培養物を培養器から取り出して、メンブランフ
E 用途・特徴
ィルターを培養パッドから無菌的に剥ぎ取り、本培地のシャ
1）
の Lawrence
ーレの表面に移す。メンブランと寒天表面とが完全に接触す
Experimental Station処方に基づくもので、水中の大腸菌群
ることが重要である。平板培地を倒置にして、 35℃で 22∼
の算定に用いられる。
24時間培養する。
本培地は、 MacCarthy 、 Delaney と Grasso
水中の大腸菌群算定のためのメンブラン濾過法は、MPN
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メンブランエンドウ寒天培地LES
これに代わる方法として、メンブランフィルター培養パッ
ドを本培地のシャーレのふたの中に置き、この上にラウリル
E 参考文献
トリプトースブイヨン（CM451）を2mLピペットで分注す
1. McCarthy J.A., Delaney J.E., Grasso R.J. (1961)
ることもできる。メンブランフィルターはパッドの上に上向
`Measuring Coliforms in Water', Water and Sewage
きに置いて、35℃で1∼1.5時間培養する。
Works, 108. 238-243.
二次培養を行うには、一次増菌物をインキュベーターから
2. American Public Health Association (1980) Standard
取り出して、メンブランフィルターをパッドから取り、本培
Methods for the Examination of Water and Wastewater.
地表面に上向きに置く。培養パッドはふたの中に残し、平板
15th Edn, APHA Inc, Washington DC.
培地は逆さまにして35℃で24時間培養する。
必要に応じ第二段階のみを用いてもよい。用意したメンブ
ランフィルターを直接寒天表面に置いて、上記のように培養
`Evaluation ofthe Reliability of Coliform Density Tests'.
2
AJPH, 48. 16-28.
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する。
3. McCarthy J.A., Thomas H.A.J., Delaney J.E. (1958)
4. Calabrese J.P. and Bissonnette G.M. (1990) Appl. Env.
24時間以内の培養でゴールデングリーンの金属光沢のあ
るコロニーは全て大腸菌群と考えられる。
Microbiol. 56. 3558-3564.
5. Noble R.E. (1960) `Reliability of MPN Indexes for
Coliform organisms'. JAWWA, 52. 803.
大腸菌群の算定
6. Departments of the Environment, Health & Social Security
大腸菌群密度は 100mL当たりの総大腸菌数として報告す
and PHLS (1982) The Bacteriological Examination of
る。メンブランフィルター1枚当たり、大腸菌群コロニー数
Drinking Water Supplies. Report on Public Health and
20∼80個および全コロニー数200個未満のメンブランフィル
Medical Subjects No.71. HMSO. London.
ターを数枚用いる。
総大腸菌群コロニー数/100mL ＝
大腸菌群コロニー数×100
濾過した検体の量（mL）
E 保存方法・使用期限
30℃以下の乾燥保存でラベル表示期限まで使用可能。調
製した培地は2∼8℃の暗所に保存する。
E 注意
塩基性フクシンは発ガン性を有しているので粉末を吸入し
たり、皮膚への付着を避けること。
メンブランエンドウ寒天培地LES
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