PML/RARA - Technogenetics

PML/RARA
Sonde per Citogenetica Molecolare (FISH)
Descrizione della sonda
La sonda CGI PML/RARA è stata sviluppata per la rilevazione della traslocazione tra il gene PML sul cromosoma
15q24.1 (in precedenza era stato posizionato sulla banda 15q22) e il gene RARA sul cromosoma 17q21.1 mediante
ibridazione in situ fluorescente (FISH). La trslocazione t(15;17) è il marcatore diagnostico della leucemia acuta
promielocitica (LMA-M3) e risulta nella fusione dei geni PML e RARA. La presenza della fusione PML-RARA è predittiva
di una risposta favorevole alla terapia di differenziazione con l’acido tutto-trans retinoico (ATRA) ed è attualmente il
sottotipo di LMA più curabile. Questa traslocazione si riscontra anche in casi di leucemia mieloide cronica (LMC) con crisi
mieloblastiche.bilanciate che non bilanciate come cloni separati..
Rappresentazione schematica della sonda PML/RARA
PML
15q24
centromere
5’
telomere
3’
~270kb
~350kb
RARA
RARA
PML
17q21
15
centromere
17
5’
3’
~570kb
telomere
Le barre orizzontali rossa e verde indicano le regioni coperte
dalla sonda (approssimate alla scala
NCBI Build
36.1/Hg18/2006). Le marcature dirette PML (verde) e RARA
(rossa) affiancano i comuni breakpoints della traslocazione
(frecce). Sul gene PML, i breakpoints si raggruppano in 3
regioni: bcr1 (esoni 6-7, freccai destra; 70%), bcr2 (esoni 5-6
freccia centrale; 10%) e bcr3 (introni 3-4, freccia sinistra; 20%).
Sul gene RARA i breakpoints si raggruppano attorno all’introne
2 di approssimativamente 17 kb.
~510kb
Interpretazione del segnale
Nella metafase normale diploide e nei nuclei in interfase, la sonda genera 2 segnali rossi e 2 verdi corrispondenti
rispettivamente ai 2 cromosomi 15 e 17 normali (figura 1). Nelle cellule con la traslocazione tra PML e RARA il pattern
che si osserva più comunemente è un segnale rosso e uno verde, che rappresentano i cromosomi 15 e 17 normali e
due segnali di fusione (rosso/verde o giallo) che invece rappresentano i 2 cromosomi traslocati (figura 2). Sono state
riportate in letteratura traslocazioni varianti, mascherate e a 3 cromosomi. Si raccomanda l’ibridazione di metafasi
tumorali per confermare le varianti anormali del pattern di segnali che includono almeno un segnale di fusione.
Figura 1: Metafase diploide
normale e nucleo in interfase (da
sangue periferico normale) con 2
segnali rossi (RARA) e due verdi
(PML).
Referenze
1. Kakizuka, a., et al., Cell, 1991. 66: 663-74.
2. Brockman, S. R, et al. Cancer Genet Cytogenet, 2003. 145:144-15.
3. Mistry, A.R., et al., Blood Rev., 2003. 17(2): 71-97
www.technogenetics.it
Figura 2: Nucleo in interfase con
1 segnale rosso (RARA) , 1
verde (PML) e 2 segnali di
fusione (rosso/verde o giallo).
Filtri Microscopio a Fluorescenza
Fluoroforo
Eccitazione max
Emissione max
Verde
496 nm
520 nm
Rosso
580 nm
603 nm
DAPI
360 nm
460 nm
27

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