Immuno-assays: ONDERZOEK NAAR HET VERHOGEN VAN DE GEVOELIGHEID VAN DE FLxBEPALING VAN TOBRAMYCINE. D.J. T o u w , z i e k e n h u i s a p o t h e k e r A.I. de G r a a f , klinisch farmaceutisch analist Apotheek Haagse Ziekenhuizen Inleiding De F L x b e p a l i n g t o b r a m y c i n e v a n A b b o t t heeft een bepalingsondergrens van 0,1 m g / 1 . E r z i j n s i t u a t i e s d e n k b a a r d a t er toch gevoeliger gemeten moet kunnen ;orden. Hierbij valt voornamelijk te denken aan farmacokinetisch onderzoek w a a r b i j in d e e l i m i n a t i e f a s e v a n t o b r a mycine s e r u m c o n c e n t r a t i e s onder de 0,1 mg/l v o o r d e b e s c h r i j v i n g v a n h e t m o d e l relevant zijn. De F L x p i p e t t e e r t 2 0 p l u i t h e t m o n s t e r v a a t j e in h e t v e r d u n n i n g s v a a t j e e n v o e g t hier 340^1 b u f f e r aan t o e . O m een factor 10 g e v o e l i g e r t e k u n n e n m e t e n w o r d t d e volgende concentratiestap voorgesteld: In h e t monstervaatje dient buffer te worden gepipetteerd en in het verdunn i n g s v a a t j e 450p<l v a n d e t e o n d e r z o e k e n oplossing. Deze methode is vervolgens gevalideerd volgens de gangbare richtl i j n e n '. Methoden Voor het o n d e r z o e k op s p e c i f i c i t e i t en selectiviteit werden een blanco kalfsen b l a n c o h u m a a n s e r u m m o n s t e r 6 x g e a n a lyseerd alsmede m o n s t e r s w e l k e de v o l gende antibiotica bevatten in T D x - b u f fer: ceftazidime ( 2 5 , 5 0 , 75 e n 1 0 0 m g / 1 ) , aztreonam (25, 5 0 , 100 en 200 mg/1), flucloxacilline ( 1 2 . 5 , 2 5 e n 50 m g / 1 ) , cilastatine (25, 5 0 , 100 en 200 m g ) en imipenem (25, 50, 100 en 200 mg/1), g e n t a m i c i n e ( 0 . 5 , 1 . 5 , 3, 6 e n 10 m g / 1 ) en netilmicine (1.5, 6 en 10 mg/1). Ceftazidime, aztreonam, flucloxacilline, cilastatine en imipenem zijn onderzocht omdat deze antibiotica frequent naast tobramycine in de onderzoekspopulatie worden voorgeschreven. Uit de g e v o n d e n w a a r n e m i n g e n werd cross-over percentage berekend. Voor h e t o n d e r z o e k o p j u i s t h e i d is e e n calibratielijn opgesteld bestaande uit 12 p u n t e n in e n k e l v o u d . In h e t v o o r b e e l d d i e n t d e b e p a l i n g l i n e air t e z i j n in h e t v o l g e n d e g e b i e d : 0,01 mg/1 - 1 m g / 1 . reprodu- Voor het o n d e r z o e k naar de herhaalbaarheid zijn 6 m o n s t e r s b i j d r i e v e r s c h i l l e n d e c o n c e n t r a t i e s g e a n a l y s e e r d : 0,769 m g / 1 , 0,375 m g / 1 e n 0 , 0 9 3 8 m g / 1 . G e z i e n d e a a r d v a n h e t o n d e r z o e k is h e t onderzoek naar de reproduceerbaarheid niet u i t g e v o e r d . het Bepaling van de detectiegrens Gezien de aard van de bepalingsmethode is b e p a l i n g v a n d e d e t e c t i e g r e n s niet mogelijk. Bepaling van de bepalingsgrenzen Ter bepaling van de o n d e r s t e b e p a l i n g s grens werd een reeks geanalyseerd bestaande uit 0.10, 0.08, 0.07, 0.06, 0 . 0 5 , 0 . 0 4 , 0 . 0 3 , 0.02 e n 0.01 m g / 1 . Houdbaarheid van de monsters Onderzoek naar niet v e r r i c h t . de houdbaarheid is nog Bepaling van het bereik Het bereik is het bepalingsgrenzen. Bepaling van de juistheid Bepaling van de precisie en de ceerbaarheid Onderzoek op specificiteit en selectiviteit interval tussen de Bepaling van de gevoeligheid De gevoeligheid zocht. is niet nader onder- Bepaling van de robuustheid De robuustheid is n i e t nader onderzocht. Resultaten Bepaling van de juistheid en lineariteit De regressielijn kon met de volgende vergelijking worden beschreven: y = -0,085 + 10,349 * X , R = 1,000. De recovery (proportionele systematische f o u t ) b e d r o e g 9 8 , 1 % en h e t i n t e r c e p t 0,085 mg/1 (constante systematische fout). Bepaling van de precisie D e v a r i a t i e c o ë f f i c i ë n t b e d r o e g b i j 0,769 m g / 1 , 0,375 m g / 1 en 0,0938 m g / 1 respectievelijk 2,7%, 2,3% en 2,4%. Deze waarden zijn in o v e r e e n s t e m m i n g m e t de w a a r den gevonden voor de controles low, medium en high bij de normaal uitgevoerde b e p a l i n g . Onderzoek op specificiteit en selectiviteit De v o l g e n d e c r o s s - o v e r p e r c e n t a g e s w e r den g e v o n d e n : ceftazidime 0%, a z t r e o n a m 0%, flucloxac i l l i n e 0%, c i l a s t a t i n e 0%, imipenem 0%, gentamicine bij 3 m g / 1 1,0%, bij 6 mg/1 0,85% en bij 10 m g / 1 0,40% en netilmicine b i j 1,5 m g / 1 2 , 7 % , b i j 6 m g / 1 0 , 5 % e n b i j 10 m g / 1 0 , 3 % . Bepaling van de bepalingsgrenzen De recovery a l s m e d e de v a r i a t i e c o ë f f i ciënt b i j c o n c e n t r a t i e s onder de 0,14 mg/1 waren als volgt (n=6): Bepaling van het bereik H e t b e r e i k v a n d e b e p a l i n g is 0,02 5- 1,0 mg/l. Conclusie Met de gevolgde m e t h o d e b l i j k t het m o g e lijk om de gevoeligheid van de FLxbepaling tobramycine te vergroten. Als gevolg van een te grote variatiecoëfficient bij concentraties kleiner dan 0,025 m g / 1 is a l s o n d e r g r e n s voor de bepaling 0,025 m g / 1 v a s t g e s t e l d . Referentie: 1. Vaart F.J. v.d. Richtlijnen voor de analytische validatie. Pharm.Weekblad 1992; 127:1229-1235.