Química ambiental Agua

Química ambiental Agua
5. ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA
INTRODUCCION
El crecimiento de la población a nivel mundial y el aumento del uso del agua para diferentes
actividades, ha incrementado los niveles de contaminación. Esta contaminación está relacionada con los
vertidos de origen doméstico e industrial a los cuerpos de agua. En el caso de los residuos de origen
doméstico, la carga contaminante está representada por altos porcentajes de materia orgánica y
microorganismos de origen fecal. Estos microorganismos son causantes de enfermedades que generan
altos porcentajes de morbi-mortalidad en la población. El control de la calidad microbiológica del agua
de consumo y de vertido, requiere una serie de análisis dirigidos a determinar la presencia de
microorganismos patógenos.
Dentro de los microorganismos patógenos se encuentran el grupo de bacterias coliformes el cual está
conformado por dos subgrupos: los coliformes totales y los termotolerantes. A estos últimos antes se
los denominaba coliformes fecales. El cambio de nombre se debe a que se demostró que en el grupo de
coliformes que se detectaban en siembras incubadas a temperaturas de 44,5 °C y en medios de cultivo
específicos, sólo una parte del grupo eran bacterias de origen fecal; el resto eran bacterias ambientales.
En el grupo de bacterias termotolerantes está incluida la Escherichia coli, considerada como un
organismo indicador de contaminación fecal. Se ha demostrado que esta bacteria siempre está presente
en un número elevado en las heces de humanos y animales poiquilotermos y comprende casi 95% de
los coliformes en las heces. Por esta razón, la contaminación de origen fecal puede ser evaluada
mediante la determinación de coliformes termotolerantes o mediante la presencia de E. coli.
OBJETIVOS

Determinar la presencia de coliformes totales y termotolerantes en una muestra de agua,
mediante el método de filtro de membrana
MATERIALES
 Sistema de filtración
 Pinzas
 Mechero
 Cajas de petri con medio de cultivo
 Filtros de membrana con poros de 0,45 µm
PROCEDIMIENTO
Recolección de muestras
Las muestras que se toman para el análisis deben ser representativas para poder determinar la calidad
microbiológica. Para recoger las muestras debe utilizarse frascos estériles y el volumen reconocido
varía entre 100 y 500 ml. Deben ser de boca ancha, tapa protectora y cierre hermético para evitar
escapes de agua; provistos con una cubierta de tela, papel resistente o papel de aluminio para proteger
la tapa en el momento del muestreo.
Si la muestra es tomada del grifo, debe dejarse correr por un rato (1 minuto aprox), con el fin de
limpiar la salida y descargar el agua que ha estado almacenada en la tubería. Debajo del chorro deberá
abrirse el recipiente, sin soltar la tapa de la mano para no contaminarla, llenar el frasco, dejando un
espacio de aire. No se debe enjuagar el frasco puesto que se perdería el preservante que contiene
(tiosulfato sódico)
Las muestras no deben tomarse seis hora antes del análisis de laboratorio y debe seguir la respectiva
custodia de muestra (etiquetado, cadena de refrigeración) hasta el momento de procesamiento. Si la
muestra se recoge de algún tanque colector, sumerja el recipiente y allí dentro ábralo de tal forma que
llene el recipiente e inmediatamente tápelo. Evite hablar o toser mientras realiza este procedimiento.
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Método de filtro de membrana.
La técnica de filtro de membrana se fundamenta en la filtración de un volumen determinado de
muestra (100 mililitros o volúmenes menores según la densidad bacteriana esperada), a través de un
filtro de membrana de 0,45 micrómetros de diámetro de poro, el cual es colocado sobre un medio de
cultivo específico y luego incubado a la temperatura adecuada. El método de filtración con membrana
para la determinación de coliformes totales y termotolerantes está aceptado por el Standard Methods
for the Examination of Water and Wastewater (American Public Health Association-American Water
Works Association, 1999), que lo propone como una alternativa para la determinación de los coliformes
totales y termotolerantes. La técnica de filtro de membrana, proporciona un análisis rápido y más
efectivo que la antigua técnica conocida como Número Más Probable-NMP. El uso de esta técnica no es
recomendable para aguas de alta turbidez o para detectar bacterias que no sean coliformes, pero muy
frecuente para la determinación de bacterias en muestras de agua potable y agua de origen
subterráneo.
En una rampa de filtración estéril conectada a vacío. Desenvolver el filtro de la envoltura con la que se
ha esterilizado.
Pasos para tener presente:
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Separar el embudo de la base del filtro.
Colocar la membrana filtrante sobre el portafiltros de la base del mismo. El manejo de las
membranas se debe realizar con pinzas de punta plana o guantes de goma para no lesionarlas.
Colocar el embudo sobre la base, teniendo cuidado de no lesionar la membrana y que esta
quede bien centrada. La membrana filtrante queda ahora situada entre el embudo y la basesoporte del filtro.
Filtrar 100ml de muestra de agua a través del filtro. Poner en marcha el sistema de vacío.
Una vez filtrada toda la muestra, parar el sistema de vacío y separar el embudo de la base del
filtro.
Retirar con pinzas estériles o flameadas la membrana filtrante.
Colocar la membrana sobre una placa petri e incubar en estufa a 37ºC durante 24 horas.
Comprobar resultados a las 24 horas.
CUESTIONARIO
1. Explique la importancia de realizar análisis microbiológicos tanto a las aguas crudas como a las
tratadas
2. Qué tipo de criterios se deben tener en cuenta para el muestreo microbiológico de aguas?
3. Cuál es la importancia de hacer diluciones a las muestras de agua, particularmente las
superficiales sin tratar, para los análisis microbiológicos?
4. De acuerdo a los resultados obtenidos que se puede decir de la calidad del de agua de los
puntos donde fueron tomadas las muestras ¿Qué medidas se deben tomar?
5. Existe alguna normatividad que estipule límites de detección para las características
microbiológicas determinadas para Coliformes y E. coli de acuerdo al tipo de agua? La muestra
analizada cumple con dicha normatividad?
BIBLIOGRAFIA
 APHA, AWWA, APLF. Métodos normalizados para análisis de aguas y aguas residuales. 17 edición.
American Public Health Association Enc. New York 1992
 Organización Mundial de la Salud (1995), Guías para la calidad del agua potable.
 METCALF & EDDY. Ingeniería de aguas residuales. Vol. 1 Ed.Mc Graw Hill. España, 1995.

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