シカジーニアス 分子疫学解析POTキット（黄色ブドウ球菌用） ® Cica Geneus Staph POT KIT ® メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA） は主な集団感染の原因菌であり、 この蔓延 防止には菌体間の相同性などを解析し、適切な拡散予防策を講じる必要があります。 製品情報はコチラ この度、愛知県衛生研究所の鈴木匡弘先生らにより開発されたPCR-based ORF Typing（POT法）*1 は、マルチプレックスPCRを用いて複数の特定遺伝子を同時に 増幅し、アガロース電気泳動で検出された増幅バンドパターンを解析する方法です。 *1 製品のラインナップが増えた為、POTの意味を広義に変更させて頂きました。 参考文献 1. Suzuki.M et.al. 2. Suzuki.M et.al. 101(4):938-947 (2006) 107(4):1367-1374 (2009) 特長 ●最適化したマルチプレックスPCRなので、約4時間以内で分子疫学解析が可能です。 ●パルスフィールドゲル電気泳動（PFGE）のように特殊な装置は不要です。 ●解析結果を数値化（POT値） することで、菌体間の相同性を比較できます。 ■キット の構成 (120回分) ■操作手順 個別名称 容 量 試薬Ａ AptaTaq DNA Master （5×Conc.） 1.0ml ×1本 試薬Ｂ PCRサプリメント 1.0ml ×1本 試薬Ｃ プライマーミックスα 0.5ml ×1本 試薬Ｄ プライマーミックスβ 0.5ml ×1本 試薬Ｅ ポジティブコントロール 1.0ml ×1本 試薬Ｆ 6× ローディングバッファー 1.0ml ×1本 ＊2 黄色ブドウ球菌 を単離する（培養） DNA 抽出 を行い テンプレート DNA を調製 ＊３ 2 種類の マルチプレックス PCR アガロースゲル 電気泳動（別途準備） 各検体での POT 値の比較解析 *2 AptaTaq DNA Master（5×Conc.） は、Roche Diagnostics K.Kの商品です。 ® *3 シカジーニアス DNA抽出試薬は別売です。 POT 値の算出 バンドパターンの 読み取り POT No. 増幅サイズ（bp） POT 係数 ターゲット領域 positive control 601 Reaction mixture 1 POT 1-1 530 64 POT 1-2 449 32 POT 1-3 355 16 POT 2-1 304 128 POT 2-2 271 64 プロファージ POT 2-3 228 32 プロファージ POT 2-4 197 16 プロファージ POT 2-5 161 8 プロファージ POT 2-6 131 4 プロファージ POT 2-7 106 2 プロファージ POT 2-8 81 1 Genomic Island gene complex class B SCC type Ⅱa specific Tn positive control 601 Reaction mixture 2 POT 1-4 477 8 cassette chromosome recombinase A2 POT 1-5 388 4 遺伝的バックグラウンド POT 1-6 320 2 遺伝的バックグラウンド POT 1-7 273 1 POT 3-1 243 64 プロファージ POT 3-2 197 32 プロファージ POT 3-3 171 16 プロファージ POT 3-4 140 8 プロファージ POT 3-5 115 4 プロファージ POT 3-6 95 2 プロファージ POT 3-7 78 1 プロファージ gene complex class A ①2 つのマルチプレックス PCR の電気泳動結果（図１）からバンドパターン（表１）を読み取ります。 ②この電気泳動のバンドの有無の結果を用いて、POT 値解析用の計算シートに二進法で入力し、３つのカテゴリーの POT 値を算出します。 ⅰ が陽性の場合、その検体は黄色ブドウ球菌（ ）であることが確認できます。また、MRSA の場合、POT 1 の値の合計は 64 以上になります。 ⅱ 検体間の POT 値を比較することで、菌体間の相同性を客観的に推測出来ます。 ⅲ 集団感染から得られた菌体は POT 1 ∼ 3 の POT 値が全て同一になります。（例：図１の６と７、８と９） ＊POT 値解析用の計算シートは弊社製品 HP に掲載しております。表面の QR コードからもアクセスできます。 製品番号 製品名 包 装 希望価格（円） 保 存 08180-96 ® （黄色ブドウ球菌用） シカジーニアス 分子疫学解析POTキット 120回分 83,000 冷凍（-20 ℃） 08178-96 シカジーニアス DNA抽出試薬 120回分 22,000 冷蔵（2 ℃∼8 ℃） ® 関連試薬 関連機器 製品番号 製品名 包 装 希望価格（円） 製品番号 製品名 メーカー 72046 クロモアガーMRSAスクリーン培地 10 枚 2,750 49909-00 ジーンアトラス322 ASTEC 290,000 1L 5,000 49909-01 ジーンアトラスE02 エコノミー仕様 ASTEC 436,000 10 mL 5,000 49904-01 Mupid-exU Mupid 56,950 125 gel lanes 13,000 49904-00 Mupid-2plus Mupid 100 g 27,000 49908-00 ゲル撮影装置 SCOPE21 46510-79 10×TBE緩衝液 14575-43 臭化エチジウム溶液（2 mg/mL、点眼瓶入） 49881-08 Quick-Load 50 bp DNA Ladder 01089-23 アガロースKANTO HC（短フラグメント用） OPTIMA 希望価格（円） 40,760 339,000 ＊希望価格は税抜きです。 ★上記の他に必要な機材などがございますので、弊社営業所もしくは販売店へお問合せください。 ●愛知県衛生研究所 鈴木匡弘先生のご厚意により、電気泳動パターンの実例データをご提供いただきました。 ●本キットは愛知県から特許許諾を得て、製造販売しております。他メーカーの商品に関するライセンスについては、各メーカーにご確認ください。 2015年2月改定（第四版）
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