エクソソーム精製カラム EVSecond 近年、細胞外分泌小胞（Extracellular Vesicle）であるExosome（エクソソーム）が、がんの転移など様々な疾病の要因となっていることが示唆されています。そのため、エクソソームはバイオマーカーや生体メカニズム解明の標的として研究され始めています。しかし、エクソソームはその大きさが生体マトリクス中にあるタンパク質などの分子サイズと近く、既存の分離手法では単離するのが難しいと言われています。 EVSecondは、エクソソームの高純度精製に特化したサイズ排除クロマトグラフィーカラムです。血清、血漿、細胞培養上清などから簡単に高品質のエクソソームを単離します。（EVSecond：Extracellular Vesicle Isolation by Size Exclusion Chromatography on Drip Column）特長・超遠心機などを使用せず、自然落下のみの簡単操作です。・試料中のフリーRNAやフリータンパク質を高効率に除去可能なため、網羅的miRNA解析や高感度プロテオーム解析に適しています。・単離されたエクソソームはマイルドにPBS中へ回収されるため、構造的ダメージもなく、幅広いアプリケーションに使用可能です。カラムサイズ：全長75 mm 従来法との比較・超遠心法やポリマー沈殿法に比べて純度の高いエクソソームが単離できます。・特定のエクソソーム表面抗原をキャプチャーする抗体単離法と異なり、表面抗原のプロファイルによらないバイアスの少ないエクソソームの回収が可能です。 GL-SPE EXO フラクションラック操作方法操作は全て自然落下で行います。 EVSecond専用のラックです。通液や抽出液のフラクション回収が簡単に行えます。 1. 充填剤をよく混和してスタンドに設置し、保存液を捨てる。カラム取り付けラック EVSecondを装着します。 2. 0.22 μmフィルターを通した細胞培養用ウシ血清(FBS)でブロッキング。 EVSecond 3. PBSで6回洗浄。 4. 0.22 μmフィルターを通した血清、血漿などのサンプルをロードする。(50～700 µL) 5. PBSを適量流し、エクソソーム溶出画分を回収する。注）初回は抗CD9-抗CD63サンドイッチELISAや、抗CD9ウェスタンブロッティングなどでエクソソーム溶出位置を確認してください。回収用ラック回収用ラックホルダ回収用ラックを6セット設置できます。回収用チューブ（1,5 mL、2 mL）を8本までセットできます。レバーを引くことで回収用チューブの切換が可能です。大きさ：約 300(W)×300(D)×150(H) mm ヒト血清からのエクソソームの単離血清や細胞培養上清にはエクソソーム以外に多量のタンパク質や核酸、脂質が含まれています。精製効率が不十分な単離法を用いるとエクソソーム由来ではないタンパク質やRNA類が共検出され、特に定量的解析結果に大きな影響を及ぼします。 EVSecondを用いて100 µL、200 µL、300 µL、700 µLのヒト血清からエクソソームを単離しました。（下図）アルブミンやIgGなどの血清タンパク質とエクソソームが精度良く分離できていることが分かります。 Load 100 µL serum Load 200 µL serum Load 300 µL serum Load 700 µL serum 100 µLずつ溶出フラクションを回収赤：抗CD9-抗CD9サンドイッチELISAによるエクソソーム溶出位置の確認青：Bradford法による血清フリータンパク質の溶出位置の確認データご提供：東京大学植田先生【価格表】品名 EVSecond ［冷蔵］ GL-SPE EXOフラクションラック入数 Cat.No. 価格 10本 5010-21390 44,000 25本 5010-21392 98,000 1式 5010-50450 120,000 注）［冷蔵］は、冷蔵輸送品です。別途、冷蔵梱包費¥1,000を請求させていただきます。 EVSecond製品は、東京大学大学院新領域創成科学研究科植田幸嗣先生のご協力により開発されました。 AA941-20150313PDF