モノリス 核酸精製・抽出キット MonoFas®シリーズ <2015年5月改訂> モノリス 核酸精製・抽出キット MonoFas ® シリーズ フラグメントDNAの精製 プラスミドDNAの抽出 ゲノムDNAの抽出 Based on monolithic technology, Merck KGaA, Darmstadt, Germany INDEX シリカモノリスによって実現した次世代のDNA抽出 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 3 フラグメントDNAの精製 ～ゲル中のDNA抽出、PCR産物の精製～ MonoFas DNA精製キットⅠ ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 4 プラスミドDNAの抽出 MonoFas プラスミド抽出キットⅢ MonoFas BAC抽出キットⅤ ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 6 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 8 ゲノムDNAの抽出 MonoFas 培養細胞ゲノムDNA抽出キットⅥ ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 19 MonoFas バクテリアゲノムDNA抽出キットⅦ ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 10 MonoFas レジオネラ属菌ゲノムDNA抽出キット ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 11 MonoFas 口腔粘膜細胞ゲノムDNA抽出キットⅧ ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 12 MonoFas マウス・ラットテイルゲノムDNA抽出キットⅨ MonoFas 糞便DNA抽出キットⅩ ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ MonoFas 加工食品DNA抽出キットⅪ MonoFas 植物DNA抽出キットⅫ ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 13 14 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 15 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 16 サンプルガイド ターゲット PCR産物 MonoFas DNA 精製キットⅠ アガロースゲル 所要時間 他社製品所要時間 4分 15 分 9分 20 分 大腸菌（プラスミド） MonoFas プラスミド 抽出キット Ⅲ 10 分 25 分 BAC（Bacterial Artificial Chromosome） MonoFas BAC 抽出キット Ⅴ 10 分 30 分 培養細胞 MonoFas 培養細胞ゲノム DNA 抽出キット Ⅵ グラム陽性菌 バクテリア グラム陰性菌 レジオネラ属菌 2 キット名 MonoFas バクテリアゲノム DNA 抽出キット Ⅶ MonoFas レジオネラ属菌ゲノム DNA 抽出キット 15 分 60 分 38 分 60 分 30 分 60 分 ー ー 口腔粘膜細胞 MonoFas 口腔粘膜細胞ゲノム DNA 抽出キット Ⅷ 20 分 60 分 マウス細胞 MonoFas マウス・ラットテイルゲノムDNA 抽出キット Ⅸ 30 分 ～180 分 糞便 （腸内バクテリア、腸内上皮細胞） MonoFas 糞便 DNA 抽出キット Ⅹ 10 分 50 分 加工食品 MonoFas 加工食品 DNA 抽出キット Ⅺ 15 分 60 分 植物葉 MonoFas 植物 DNA 抽出キット Ⅻ 10 分 60 分 シリカモノリスによって実現した次世代のDNA抽出 シリカモノリスは、ケイ酸エチルから合成された均一な連続孔をもつ一体型のシリカゲルです。粒子とは異なりディスク状に成形 されています。シリカモノリスは貫通孔となるスルーポアと、骨格表面にある微細な孔のメソポアを持つため、大きな通液空間に より低圧で使用でき、大きな表面積のために高い精製度が得られます。次世代の分離媒体として注目されています。 MonoFasシリーズはシリカモノリスの特長を活かした高性能なDNA精製、抽出キットです。 メソポア スルーポア MonoFas® シリーズ 5つのコンセプト ①高純度 ②高負荷量 シリカモノリス 分離能→高 シリカモノリスは表面積が大きいため、DNAの保持力が高くなります。また、 キットの構成を最適化しているため、溶出液中の高純度DNAは、エタノー ル沈殿などの後処理を必要とせず、そのままシーケンスや形質転換などに 用いることができます。 ③微量溶出 液抵抗→低 堅い骨格 →加圧によって 変形しない 粒子充填 シリカモノリスは、粒子を止めるためのフリットを用いていないため、液残り が生じにくく、通液性に優れています。そのため、微量溶出が可能で、高純 度で高濃度なDNAサンプルを得ることができます。 ④高い再現性 フィルター に液残り 粒子の漏れ 高い品質管理のもとシリカモノリスを製造しているため、スルーポアとメソポ アが制御され、再現性良くDNAを回収できます。 スポンジフィルター ⑤高速処理 シリカモノリスは通液性と液切れが非常に良く、従来の他社製品と比べて、 圧倒的に操作工程が少なく、処理時間の短縮を実感できます。洗浄工程 の際に、「空遠心」や「溶出Buffer負荷後の静置時間」も不要です。 フィルター に液残り 3 フラグメント DNA 精製 MonoFas®DNA 精製キットⅠ 操作方法 ①PCR産物 ②アガロースゲルから抽出 Buffer A 吸着 10,000 rpm、30 sec 洗浄 Buffer B 500 µL 10,000 rpm、30 sec 特長 PCR産物やアガロースゲル中も単一のキットで抽出可能 溶出 Buffer C 10～50 µL 微量溶出による濃縮精製 10,000 rpm、1 min 幅広いサイズのDNA精製に対応 高いプライマー除去効率 フラグメントDNA 迅速処理で高純度精製 【製品仕様】 【価格表】 項目 PCR産物からの精製 ゲルからの抽出 入数・容量 Cat.No. 価格 操作時間 4分 9分 50 回分 5010-21500 12,000 最大DNA結合量 10 µg 10 µg 最大ゲル処理量 - 1g 最小溶出量 10 µL 10 µL DNA回収範囲 35 bp～35 kbp 35 bp～35 kbp Buffer B 60 mL 5010-21507 2,000 ＞80 % （100 bp～5 kbp） ＞50 % （5 kbp～35 kbp） Buffer C 10 mL 5010-21508 2,000 回収率 ＞85 % （100 bp～5 kbp） ＞60 % （5 kbp～35 kbp） MonoFasⅠ Spin Column 100 本 5010-21541 19,000 プライマー除去率 95 % - MonoFas DNA精製キットⅠ 100 回分 5010-21501 23,000 250 回分 5010-21502 44,000 50 mL 5010-21506 3,000 Buffer A 196 bp のフラグメントDNA精製による再現性 クロマトグラムによるDNA精製比較 M 1 2 3 4 5 6 dNTPs primer Fragment DNA (400 bp) 196 bp 0 1 2 3 4 5 6 Time（min） 7 8 9 ①PCR産物精製前 ②MonoFas精製後 ③他社製品精製後 イオン交換クロマトグラフィーによって、プライマーの除去効率や フラグメントDNA残存率を比較した結果、他社製品に比べて、よ り良い純度が得られました。 4 10 M：pHY Marker 1～6：MonoFas マイクロサイズで制御されたシリカモノリスを高い品質管理のもとで 製造しているため、再現性良くDNAを回収できます。 MonoFas®DNA 精製キットⅠ 溶出量の違いによる電気泳動、および分光光度計による回収率の比較 MonoFas C 1 2 3 4 5 B社製品 6 7 8 C社製品 D社製品 9 10 11 12 13 14 15 回収率（%） M A社製品 15 50 100 15 50 100 15 50 100 15 50 100 15 50 100 溶出量（µL） M：DNA Marker 溶出量（µL） C：Control （6000 bp） 核酸の保持能力が強いため、100 bp以下または、10 kbp以上のフラグメントDNAでも簡単な遠心処理のみで精製できます。 対応可能なサイズは35 bp～35 kbpです。 120 M 1 2 3 M 1 2 3 M 1 2 3 M 1 2 3 100 35 bp 500 bp 10 kbp 回収率（％） 80 35 kbp 60 40 20 M ：pHY Marker 1 ：PCR産物精製前 2 ：MonoFas精製後 3 ：他社製品精製後 MonoFas 他社製品 0 35 80 100 500 1 k 5 k 10 k 20 k 30 k DNA断片の大きさ（bp） MonoFas DNA精製キットⅠは、卓上遠心分離機で操作可能です。回転数・回転時間による回収率の変化は見られません。 ●フラグメントDNA：35 bp 使用可能な 簡易型卓上遠心機 定常回転数 6,200 rpm以上 （±20 %）（固定設定） 一定遠心加速度 2,000×g以上 （19,600 m/s2） M 1 2 3 4 ●フラグメントDNA：35 kbp 5 M 1 2 3 4 5 フラグメントサイズが35 bpでも35 kbpでも遠心分離機で精製可能です。 洗浄工程では1分間の遠心が必要です。 5 プラスミド DNA 精製 MonoFas® プラスミド抽出キットⅢ 操作方法 大腸菌培養液1～3 mL 13,000 rpm、1 min Buffer A3 250 µL＊ Buffer B3 250 µL Buffer C3 300 µL 13,000 rpm、5 min 溶解 ＊: Buffer A3 に事前にRNase Aを混入 吸着 13,000 rpm、1 min 洗浄 Buffer D3 600 µL 特長 13,000 rpm、1 min プラスミドDNAの損傷なし 溶出 後処理なしで次のアプリケーションに適応可能 Buffer E3 50～200 µL （シーケンス、ライゲーション、ライブラリスクリーニング、PCR、 13,000 rpm、1 min 制限酵素処理、形質転換） プラスミドDNA 安定した回収率 【製品仕様】 【価格表】 項目 仕様 操作時間 培養液処理量 10 分 高コピープラスミド 入数・容量 Cat.No. 価格 50 回分 5010-21503 11,000 100 回分 5010-21504 21,000 44,000 MonoFas プラスミド抽出キットⅢ ［冷蔵］ 1～3 mL 低コピープラスミド 1～5 mL 250 回分 5010-21505 高コピープラスミド 15 µg/mL culture Buffer A3 50 mL 5010-21515 2,000 低コピープラスミド 5 µg/mL culture Buffer B3 50 mL 5010-21516 2,000 推奨溶出量 50～200 µL Buffer C3 50 mL 5010-21517 2,500 DNA純度（O.D.260/280） 1.7～1.9 Buffer D3 50 mL 5010-21518 2,000 Buffer E3 10 mL 5010-21519 2,000 RNase A ［冷蔵］ 500 µL 5010-21520 4,000 収量 注）［冷蔵］は、冷蔵輸送品ですので、冷蔵送料¥1,000が別途必要となります。 冷蔵輸送品のため、返品・交換はご遠慮ください。 大腸菌（DH5α株）1.5 mLから2.6 kbpプラスミドDNA抽出 M 1 2 3 4 5 6 7 大腸菌（JM109株）中の2.6 kbp低コピープラスミド抽出に おける再現性 M 8 1 2 3 4 5 6 7 8 9 2.6 kbp 5.0 kbp 2.5 kbp M：DNA Marker 1～4：MonoFas 5、6：A社製品 7、8：B社製品 MonoFas プラスミド抽出キットⅢはシリカモノリスを用いているため、 プラスミドDNAにニックなどが入らず、高純度に抽出できます。 6 M：pHY Marker 1～9：MonoFas プラスミドDNA （2.6 kbp低コピープラスミド） シリカモノリスの品質管理により、スルーポアのサイズが一定で あるため、再現性良く抽出が行えます。 MonoFas® プラスミド抽出キットⅢ 高コピープラスミドDNAの制限酵素処理 M 1 2 3 4 5 6 4870 bp pUC 119/ARL 1 M ：pHY Marker 1～3： pUC 119/ARL 1 プラスミド（3714 bp） 4～6： 高コピープラスミドを制限酵素消化処理 pUC 119（3162 bp） 2016 bp ARL 1（552 bp） ARL 1遺伝子を導入したプラスミドDNAを大腸菌（DH5α株） からMonoFasを用いて抽出。 レーン1～3抽出後のプラスミドを、制限酵素EcoRⅠ-HindⅢ にて消化し、目的遺伝子（ ARL 1 ；552 bp）を確認しました。 低コピープラスミドDNAの制限酵素処理 MonoFasと他社製品で抽出したプラスミドDNAを用いて制限酵素で2時間処理した消化物です。 M 1 2 3 4 5 6 7 8 M M ：pHY Marker 1、5 ： A社製品 2、6 ： B社製品 3、7 ： C社製品 4、8 ： MonoFas 1～4：プラスミドDNA （2.6 kbp） 5～8：プラスミドDNA （3.6 kbp） 1～8：ApaLⅠ処理 4870 bp 2016 bp 1360 bp 1～4検出バンド：1246 bp、943 bp、497 bp 5～8検出バンド：2617 bp、1246 bp、498 bp 35 kb 5 kb 1 2 3 4 M：pHY Marker 1： A社製品 2： B社製品 3： C社製品 4： MonoFas 1～4：プラスミドDNA （5271 bp） 1～4：ApaLⅠ処理 1～4検出バンド：2617 bp、2246 bp、408 bp MonoFasキットにより抽出したDNAサンプルは、抽出液中にナトリウムを含まないため、エタノール沈殿などの後処理をしなくてもシーケンスな どの実験に用いることが可能です。 Sample：DNA to make it amplify from human genome by suing Takara PCR kit. Sequence data analyzed with ABI Prism 3730 xl Genetic Analyzer 7 BAC（Bacterial Artificial Chromosome）、コスミド DNA 抽出 MonoFas® BAC 抽出キットⅤ 特長 操作方法 わずか10分で簡単に抽出精製可能 大腸菌培養液1～8 mL エタノール沈殿、フェノール/ クロロホルム抽出不要。タンパク質分解 10,000 rpm、1 min Buffer A5 250 µL＊ Buffer B5 250 µL Buffer C5 300 µL 15,000 rpm、5 min 溶解 酵素不要、界面活性剤有機溶媒、毒性のある試薬は含みません。 高純度で回収ロスが少ない 高純度：O.D.260/280＝1.7～1.9 O.D.260/230＝1.8～2.2 回収溶液はナトリウムフリー。 ＊: Buffer A5 に事前にRNase Aを混入 吸着 微量サンプル処理能力が高い 5,000 rpm、1 min 微量サンプルからも抽出可能です。 洗浄 DNAの結合能力が高い Buffer D5 500 µL 大腸菌培養液8 mLの試料から5 µgまでのBACやコスミドDNAを 10,000 rpm、1 min 抽出できます。 溶出 あらゆる用途が可能 Buffer E5 50～200 µL 通常のプラスミドと同様に宿主の染色体と分離して抽出できるため、 10,000 rpm、1 min クローン解析などにそのまま使用できます。 BAC、コスミドDNA 【製品仕様】 項目 仕様 操作時間 10 分 低コピー数BACの回収量 5 µg 大腸菌培養液 1～8 mL 【価格表】 培養（時間、O.D.） 12～14時間、O.D.=2.0～2.5 推奨溶出量 50～200 µL DNA純度（O.D.260/280） 1.7～1.9 M 1 2 3 4 5 100 kbp MonoFas BAC抽出キットⅤ ［冷蔵］ 使用回数 Cat.No. 価格 50 回分 5010-21840 29,000 100 回分 5010-21841 49,000 250 回分 5010-21842 99,500 注）［冷蔵］は、冷蔵輸送品ですので、冷蔵送料¥1,000が別途必要となります。 冷蔵輸送品のため、返品・交換はご遠慮ください。 レーン 使用キット 抽出サンプル 大きさ コピー数 培養液処理量 溶出量 収量 M pHY Marker - - - - - - 1 MonoFas BAC 約100 kbp 20/cell 3 mL 100 µL 42 ng/µL 2 MonoFas BAC 約100 kbp 20/cell 3 mL 50 µL 59 ng/µL 3 A社製品 BAC 約100 kbp 20/cell 200 mL 200 µL 140 ng/µL 4 MonoFas コスミド 約100 kbp 1/cell 3 mL 100 µL 40 ng/µL 5 MonoFas コスミド 約100 kbp 1/cell 3 mL 50 µL 79 ng/µL MonoFas BAC抽出キットⅤの収量は、A社製品より多いことがわかります。（100 kbp、コピー数20/cell） M 1 2 3 4 M MonoFasを用いて、培養液 8 mL からBACとコスミドを抽出しました。 M ：pHY Marker 1～2：コスミド 3～4：BAC 溶出量：100 µL 8 1 2 3 4 MonoFasで抽出したBAC、コスミドDNA は、環状であることが確認できます。 （Plasmid Safe 処理） M ：pHY Marker 1～2：抽出コスミド Plasmid Safe：酵素 3～4：抽出BAC Plasmid Safe：酵素 培養細胞ゲノム DNA 抽出 MonoFas® 培養細胞ゲノム DNA 抽出キットⅥ 特長 操作方法 わずか15分で簡単に抽出可能 培養細胞 ～1×107 エタノール沈殿、フェノール/ クロロホルム抽出不要。分解用RNase、 Buffer A6 600 µL Proteinase K 20 µL 70 ℃ 10分間 イソプロパノール 200 µL 溶解 分解酵素不要。有機溶媒、毒性のある試薬は含みません。 高純度で回収ロスが少ない 高純度： O.D.260/280＝1.7～2.3 O.D.260/230＝1.7～2.2 回収溶液はナトリウムフリー。 吸着 不純物が少ないため、そのまま高効率PCR増幅ができます。 15,000 rpm、1 min 微量サンプル処理能力が高い 洗浄 培養細胞107までの場合、溶出量：20～200 µL、 Buffer B6 500 µL カラム容量：1000 µLを処理できます。 15,000 rpm、1 min DNAの結合能力が高い 溶出 50 µgまでのDNAを抽出可能。ゲノムDNAの断裂がおこりにくい Buffer C6 20～200 µL です。 15,000 rpm、1 min あらゆる用途が可能 リアルタイムPCR、PCR増幅、制限酵素処理、ウイルス・細菌・真菌 ゲノムDNA 分析、癌関連研究、ヒト遺伝学試験、法医学試験など。 【価格表】 項目 仕様 操作時間 15 分 最大DNA結合量 50 µg 推奨処理量 ～107 推奨溶出量 20～200 µL DNA純度（O.D.260/280） 1.7～2.3 DNA純度（O.D.260/230） 1.7～2.2 250 200 150 100 50 MonoFas培養細胞ゲノム DNA抽出キットⅥ MonoFas培養細胞ゲノム DNA抽出キットⅥ （Proteinase K付）［冷蔵］ 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0 O.D. A 社製品 B 社製品 C 社製品 2 3 4 5 6 Cat.No. 価格 25 回分 7820-11100 11,000 250 回分 7820-11101 75,000 25 回分 7820-11102 18,000 250 回分 7820-11103 98,000 M 7 M ：pHY Marker 1～7 ：溶出液 4870 bp 4870 bp 溶出量：200 µL 100 µL 1×107という多量の培養細胞からも MonoFasでは、10 µL溶出が可能です。 O.D.=1.7～2.3で、高純度なDNAを抽出 できます。 D 社製品 ヒト培養細胞HEK293からのDNA抽出 M 1 50 µL 10 µL 100 µL 50 µL 10 µL 100 µL 50 µL 10 µL 100 µL 50 µL 10 µL 100 µL 50 µL 0 MonoFas 使用回数 注）［冷蔵］は、冷蔵輸送品ですので、冷蔵送料¥1,000が別途必要となります。 冷蔵輸送品のため、返品・交換はご遠慮ください。 回収量 10 µL 回収量（μg/mL） 【製品仕様】 176 bp 1 2 3 4 5 6 左記で抽出したゲノムDNAを 用いて、ヒト成長ホルモン遺伝 子配列（176 bp）をPCR増幅 しました。 M ：pHY Marker 1～6 ：PCR増幅 10 µLロード 5 µLロード 9 グラム陽性菌・グラム陰性菌ゲノム DNA 抽出 MonoFas® バクテリアゲノム DNA 抽出キットⅦ 特長 【製品仕様】 1つのキットでグラム陽性菌＆陰性菌に対応 項目 グラム陰性菌 操作時間 38 分 30 分 最大DNA結合量 50 µg 50 µg 1つのキットでグラム陽性菌38分、グラム陰性菌は30分 と短時間でゲノムDNAを抽出精製可能です。 グラム陽性菌 バクテリア増殖O.D. 0.4～0.5 0.6～0.7 処理量 ～600 µL ～250 µL エタノール沈殿、フェノール/ クロロホルム抽出不要。分 推奨溶出量 20～100 µL 20～100 µL 解用RNase、分解酵素不要。有機溶媒、毒性のある試 DNA純度（O.D.260/280） 1.7～2.3 1.7～2.3 簡単に抽出可能 薬は含みません。 高純度で回収ロスが少ない 高純度： O.D.260/280＝1.7～2.3 【価格表】 回収溶液はナトリウムフリー。 不純物が少ないため、そのまま高効率PCR増幅ができ MonoFasバクテリアゲノム DNA抽出キットⅦ ます。 微量サンプル処理能力が高い MonoFasバクテリアゲノム DNA抽出キットⅦ （酵素付） ［冷蔵］ 溶出量：20～100 µL、カラム容量：1000 µLで処理でき ます。 MonoFasバクテリアゲノム DNA抽出キットⅦ （Proteinase K 付） ［冷蔵］ DNAの結合能力が高い 使用回数 Cat.No. 価格 25 回分 7820-11110 19,000 250 回分 7820-11111 75,000 25 回分 7820-11112 29,000 250 回分 7820-11113 138,000 25 回分 7820-11114 25,000 250 回分 7820-11115 102,000 50 µgまでのDNAを抽出可能。ゲノムDNAの断裂がおこ 注1）酵素付のキットにはRNase A、Proteinase Kが付属しています。 りにくいです。 注2）［冷蔵］は、冷蔵輸送品ですので、冷蔵送料¥1,000が別途必要となります。 冷蔵輸送品のため、返品・交換はご遠慮ください。 グラム陰性菌200 µL A社製品 M 1 2 3 グラム陽性菌600 µL MonoFas 4 5 6 A社製品 7 8 9 10 11 MonoFas 12 13 14 15 16 グラム陰性菌の抽出 LB液体培地で培養した大腸菌（DH5α株）より、 MonoFas：Proteinase Kで処理、RNase A処理なし （グラム陰性菌プロトコール） A社製品 ：Proteinase KとRNase Aで処理 グラム陽性菌の抽出 LB液体培地で培養した納豆菌（Bacillus natto株）より、 MonoFas：Proteinase KとRNase Aで処理 （グラム陽性菌プロトコール） A社製品 ：Proteinase KとRNase Aで処理 A社製品 M 1 2 3 A社製品のBuffer ＋MonoFasカラム MonoFas 4 5 6 7 8 9 10 11 12 E.Coli 5 µLから各社のプロトコールに沿って精製しました。 A社製品と比較すると回収量では大きな差は見られませんでした。しかし、 A社製品は、断片化DNAが確認されたのに対し、MonoFasでは確認され ず、A社製品より分子サイズが大きいDNAを抽出できたことがわかります。 M ：Marker 1～4 ：A社製品 （Proteinase K処理あり） 5～8 ：MonoFas （Proteinase K処理なし） 9～12 ：A社製品のBuffer ＋MonoFasカラム （Proteinase K処理あり） 溶出量：50 µL 10 ロード： 10 µL MonoFas® バクテリアゲノム抽出キットⅦ 操作方法【グラム陽性菌】 操作方法【グラム陰性菌】 グラム陽性菌培養液 ～600 µL 溶解 グラム陰性菌培養液 ～250 µL 15,000 rpm、2 min Buffer AP7 200 µL RNase A 10 µL、40 ℃ 15 min Proteinase K 10 µL、60 ℃ 10 min Buffer B7 200 µL、 75 ℃ 5 min 100 % エタノール 200 µL 溶解 吸着 15,000 rpm、2 min Buffer A7 200 µL Proteinase K 10 µL、60 ℃ 10 min Buffer B7 200 µL、 75 ℃ 5 min 100 % エタノール 200 µL 吸着 10,000 rpm、1 min 洗浄1 10,000 rpm、1 min 洗浄1 Buffer C7 300 µL Buffer C7 300 µL 10,000 rpm、1 min 洗浄2 溶出 10,000 rpm、1 min 洗浄2 溶出 Buffer D7 300 µL Buffer D7 300 µL 13,000 rpm、1 min 溶出 13,000 rpm、1 min Buffer E7 ～100 µL 溶出 Buffer E7 ～100 µL 13,000 rpm、1 min 13,000 rpm、1 min ゲノムDNA 【グラム陽性菌】 ゲノムDNA A社製品 M 1 2 3 4 【グラム陰性菌】 MonoFas 5 6 7 8 9 10 M ：pHY Marker 1～5 ：A社製品 6～10 ：MonoFas 2 3 MonoFas 4 5 6 7 8 9 10 A社製品 M 1 2 3 4 5 MonoFas 6 7 8 9 10 M ：pHY社Marker 1～5 ：A製品 6～10 ：MonoFas 溶出量：100 µL 10 µLロード 溶出量：100 µL 10 µLロード 【グラム陽性菌】 A社製品 M 1 M ：pHY Marker 1～5 ：A社製品 6～10 ：MonoFas A社製品 M 1 2 3 4 【グラム陰性菌】 MonoFas 5 6 7 8 9 10 200 bp PCR産物5 µLロード M ：pHY Marker 1～5 ：A社製品 6～10 ：MonoFas 200 bp PCR産物5 µLロード MonoFas® レジオネラ属菌ゲノム DNA 抽出キット 【価格表】 レジオネラ属菌の検査法は、JIS 0350-50-10 : 2006に記載の 培養法が実施されていますが、平成21年3月に財団法人ビル管 理教育センターより発行された「第3版 レジオネラ症防止指針」に、 培養法を補助する検査法として遺伝子検査法の詳細が記載され ました。 MonoFas レジオネラ属菌ゲノムDNA抽出キットは、本指針記載 のレジオネラ属菌ゲノム抽出法に対応した製品となっており、検 査時間の短縮・迅速化が可能です。 MonoFasレジオネラ属菌 ゲノムDNA抽出キット ［冷蔵］ ［毒］ MonoFas Column for Legionella genome 入数 Cat.No. 価格 50 回分 5010-21555 38,000 100 回分 5010-21556 70,000 250 回分 5010-21557 160,000 100 本 5010-21550 30,000 注1）［冷蔵］は、冷蔵輸送品ですので、冷蔵送料¥1,000が別途必要となります。 冷蔵輸送品のため、返品・交換はご遠慮ください。 注2）［毒］は、医薬用外毒物です。 11 口腔粘膜細胞ゲノム DNA 抽出 MonoFas® 口腔粘膜細胞ゲノム DNA 抽出キットⅧ 操作方法 1 mL滅菌水チューブに口腔粘膜採集 15,000 rpm、2 min Buffer A8 180 µL Proteinase K 20 µL、70 ℃ 10 min Buffer B8 200 µL イソプロパノール 200 µL 溶解 吸着 15,000 rpm、1 min 洗浄 特長 Buffer C8 300 µL 15,000 rpm、1 min 口腔粘膜採集からから抽出までわずか20分 高純度で回収ロスが少ない 溶出 Buffer D8 ～100 µL 高純度：O.D.=1.7～2.3 15,000 rpm、1 min 回収溶液はナトリウムフリー。 微量サンプル処理能力が高い ゲノムDNA 溶出量：10～200 µL、容量：1000 µLまでのアプライが可能。 【製品仕様】 【価格表】 項目 仕様 操作時間 20 分 最大DNA結合量 50 µg 推奨溶出量 10～200 µL DNA純度（O.D.260/280） 1.7～2.3 MonoFas口腔粘膜細胞 ゲノムDNA抽出キットⅧ MonoFas口腔粘膜細胞 ゲノムDNA抽出キットⅧ （Proteinase K 付）［冷蔵］ 使用回数 Cat.No. 価格 25 回分 7820-11120 15,000 250 回分 7820-11121 75,000 25 回分 7820-11122 20,000 250 回分 7820-11123 98,000 注）［冷蔵］は、冷蔵輸送品ですので、冷蔵送料¥1,000が別途必要となります。 冷蔵輸送品のため、返品・交換はご遠慮ください。 MonoFas A社製品 Proteinase K処理 必要 必要 操作時間 20 分 ～50 分 最大DNA結合量 50 µg 15～30 µg 溶出量 10～200 µL 50～200 µL カラム容量 1,000 µL 800 µL DNA回収量 32 µg/mL(n=5) 30 µg/mL(n=5) 純度（O.D.260/280） 1.7～2.3 1.5～1.9 M 2 3 4 M ：pHY Marker 1～4 ：MonoFas 4870 bp 溶出量：100 µL 10 µLロード M 4870 bp 196 bp 12 1 1 2 3 4 5 6 M ：pHY Marker 1～6 ：PCR産物 5 µLロード マウス・ラットテイルゲノム DNA 抽出 MonoFas® マウス・ラットテイルゲノム DNA 抽出キットⅨ 操作方法 特長 溶解から抽出まで30分 テイル ～20 mg （細かく切断） Buffer A9 400 µL Proteinase K 20 µL ボルテックス混和 65 ℃ 20 min インキュベート Buffer B9 400 µL ボルテックス混和 15,000 rpm、2 min 上清 500 µL＋イソプロパノール 500 µL 溶解混合液をMonoFasカラムに移す。 エタノール沈殿、フェノール/ クロロホルム抽出不要。 有機溶媒、毒性のある試薬は含みません。 溶解 高純度で回収ロスが少ない 高純度：O.D.260/280＝1.7～2.1 回収溶液はナトリウムフリー。 吸着 微量サンプル処理能力が高い 15,000 rpm、1 min 溶出量：10～200 µL、容量：1000 µLまでのアプライが可能。 （最大20 mgの組織を処理） 洗浄1 Buffer C9 500 µL DNAの結合能力が高い 15,000 rpm、1 min 50 µgまでDNAを抽出可能です。ゲノムDNAの断片化が起こり 洗浄2 溶出 にくいです。 Buffer D9 500 µL 15,000 rpm、1 min あらゆる用途が可能 PCR増幅、SNP解析、制限酵素消化、ウイルス・細菌・真菌分析、 Buffer E9 10～200 µL 溶出 トランスジェニック、癌関連研究、ヒト遺伝学試験、法医学試験など 15,000 rpm、1 min ゲノムDNA （抽出DNAは－20 ℃で保存可能） 【価格表】 【製品仕様】 項目 仕様 操作時間 30 分 最大DNA結合量 50 µg 推奨処理量 ～20 mg カラム容量 1000 µL 溶出量 10～200 µL DNA純度（O.D.260/280） 1.7～2.1 MonoFas を用いて、テイル組織からゲノムDNAを抽出精製し、 Buffer E9 200 µLで溶出しました。 M 1 2 3 4 5 6 7 8 MonoFasマウス・ラットテイル ゲノムDNA抽出キットⅨ MonoFasマウス・ラットテイル ゲノムDNA抽出キットⅨ （Proteinase K 付）［冷蔵］ 使用回数 Cat.No. 価格 25 回分 7820-11130 17,000 250 回分 7820-11131 75,000 25 回分 7820-11132 22,000 250 回分 7820-11133 102,000 注）［冷蔵］は、冷蔵輸送品ですので、冷蔵送料¥1,000が別途必要となります。 冷蔵輸送品のため、返品・交換はご遠慮ください。 左記で抽出精製したゲノムDNAを用いて内在性遺伝子配列（190 bp） をPCR増幅しました。 M 1 2 3 4 5 6 4870 bp 190 bp M ：pHY Marker 1,3,5,7 ：マウステイル 2,4,6,8 ：ラットテイル 10 µLロード M ：pHY Marker 1～3 ：マウステイル PCR反応液 4～6 ：ラットテイル PCR反応液 5 µLロード 13 糞便中（腸内バクテリア、腸内上皮細胞） DNA 抽出 MonoFas® 糞便 DNA 抽出キットⅩ 特長 操作方法 糞便からわずか10分でDNAを簡単に抽出 糞便1 g、遠心チューブに採取 滅菌水20 mL添加、激しく混合 室温で30～60分静置（懸濁液） エタノール沈殿、フェノール/ クロロホルム抽出不要。有機溶媒、 毒性のある試薬は含みませんので、DNAの断片化が起こりにく 懸濁液 1 mL く、作業者や環境に対して悪影響を及ぼしません。 高純度で回収ロスが少ない 溶解 高純度： O.D.260/280＝1.7～2.1 15,000 rpm、2 min、上清廃棄 Buffer A10 300 µL 激しく混合 Buffer B10 300 µL 攪拌 回収溶液はナトリウムフリー。 15,000 rpm、1 min わずか10 µLで濃縮溶出が可能 不純物が少ないため、PCR増幅に影響するRNase Aなど酵素類 上清 500 µL Buffer C10 500 µL 攪拌 スピンカラムにアプライ を使用せずに抽出可能で、抽出DNAをそのままリアルタイムPCR 法等の増幅反応に使用できます。 吸着 微量サンプル処理能力が高い 13,000 rpm、1 min 様々な感染糞便試料に用いることができ、幅広い溶出量（10～ 洗浄 200 µL）のため、サンプル量に合わせた溶出ができます。 Buffer D10 500 µL ビーズ破砕を行わずに抽出可能 13,000 rpm、1 min ビーズ破砕（ジルコニアビーズ）を行わずにDNA抽出が可能です。 あらゆる用途が可能 溶出 Buffer E10 10～200 µL 13,000 rpm、1 min リアルタイムPCR増幅、ウイルス・細菌・真菌分析、感染疾病、 癌診断関連研究、ヒト遺伝学試験など ゲノムDNA 【製品仕様】 項目 仕様 操作時間 10 分 最大DNA結合量 50 µg 推奨処理量 ～300 mg 【価格表】 カラム容量 1000 µL 使用回数 Cat.No. 価格 溶出量 10～200 µL 25 回分 7820-11140 20,000 DNA純度（O.D.260/280） 1.7～2.1 250 回分 7820-11141 180,000 MonoFas 糞便DNA抽出キットⅩ MonoFas を用いてゲノムDNAを抽出精製し、Buffer E10 50 µLで 溶出しました。 M 1 2 3 4 左記で抽出精製したゲノムDNAを用いて内在性遺伝子配列を PCR増幅しました。 5 【ヒト糞便グラム陽性菌】 M 1 2 3 4 5 【ヒト糞便グラム陽性菌】 2000 bp M ：pHY Marker 1～5：ヒト糞便グラム陰性菌 ゲノムDNA M ：pHY Marker 1～5：PCR産物 M 【ヒト糞便上皮細胞】 M ：pHY Marker 1～5 ：ヒト糞便上皮細胞 ゲノムDNA 14 1 2 3 4 5 M 1 2 3 4 5 【ヒト糞便上皮細胞】 M ：pHY Marker 1～5 ：PCR産物 196 bp 加工食品 DNA 抽出 MonoFas® 加工食品 DNA 抽出キットⅪ 操作方法 加工食品粉末 ～1.0 g 前処理 特長 Buffer A11 4.0 mL Proteinase K 20 µL 攪拌 65 ℃ 10 min インキュベート Buffer B11 600 µL 激しく攪拌 加工食品からわずか15分でDNAを抽出 15,000 rpm 、2 min エタノール沈殿、フェノール/ クロロホルム抽出不要。有機溶媒、 毒性のある試薬は含みませんので、DNAの断片化が起こりにく 溶解 く、作業者や環境に対して悪影響を及ぼしません。 高純度DNA抽出 吸着 高純度： O.D.260/280＝1.7～2.1 上清 1000 µL Buffer C11 450 µL 攪拌 全量をスピンカラムに2～3回に分けて アプライ 回収溶液はナトリウムフリー。 15,000 rpm 、1 min Amylaseフリー 洗浄 Buffer D11 500 µL PCR増幅に影響するAmylaseやRNase Aなど酵素類を使用せず 15,000 rpm 、1 min に抽出可能で、抽出したDNAをそのまま増幅反応に使用できます。 溶出 微量溶出 Buffer E11 55 µL シリカモノリスは表面積が大きく微量試料中のDNAも保持でき、 15,000 rpm 、1 min わずか10 µLでDNAを回収できます。 加工食品DNA あらゆる用途が可能 遺伝子組換え加工食品の検査、食品遺伝学試験など 【価格表】 【製品仕様】 項目 仕様 使用回数 Cat.No. 価格 操作時間 15 分 50 回分 7510-11150 45,000 最大DNA結合量 50 µg 100 回分 7510-11151 75,000 推奨試料処理量 ～1 g カラム容量 1000 µL 推奨溶出量 55 µL DNA純度（O.D.260/280） 1.7～2.1 MonoFas 加工食品DNA抽出キットⅪ 左記の抽出精製したDNAを用いて、コメ判断用の内在性遺伝子を PCR増幅しました。 M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 MonoFas を用いて、コメ粉末からDNAを抽出精製し、 Buffer E11 55 µLで溶出しました。 M 1 2 3 4 5 6 5 µLロード 10 µLロード M : pHY Marker 1~2 : MonoFas (Amylase, ProK, RNase A 処理) 3~4 : MonoFas (Amylase, ProK 処理) 5~6 : MonoFas (ProK 処理) M : pHY Marker 1 : MonoFas (Amylase, ProK, RNase A 処理) 2 : MonoFas (Amylase, ProK 処理) 3 : MonoFas (ProK 処理) 4 : 他社製品 (Amylase, ProK, RNase A 処理) 5~7 : 1~3のエタノール沈殿 8~9 : 検体コシヒカリ (Amylase, ProK 処理) 10 : 検体コシヒカリ (ProK 処理) 11 : Positive Control DNA 12 : Negative Control (滅菌水) 15 植物 DNA 抽出 MonoFas® 植物 DNA 抽出キットⅫ 特長 操作方法 液体窒素中で粉砕した植物葉 ～0.2 g 植物葉からわずか10分でDNAを抽出 毒性のある試薬や有機溶媒を使用しないため、 DNAの断片化が Buffer A12 500 µL ホモジナイザーで激しく攪拌 Buffer B12 150 µL 激しく攪拌 前処理 起こりにくく、作業者や環境に対して安全です。 高純度DNA抽出 高純度： O.D.260/280＝1.7～2.1、回収溶液はナトリウムフリー。 PCR増幅に影響する酵素類を使用せずに抽出可能で、抽出した 15,000 rpm、3 min DNAをそのまま増幅反応に使用できます。 溶解 微量溶出 上清 400 µL Buffer C12 400 µL 攪拌 全量をスピンカラムにアプライ モノリスディスクの容積が小さいため、わずか10 µLでDNAを回収 できます。少量溶出においても最大50 µgのDNAを抽出できます。 吸着 あらゆる用途が可能 15,000 rpm、1 min 植物の遺伝子組換え、PCR増幅用テンプレートDNAの抽出、 洗浄 遺伝子検査、感染検査関連研究、食品遺伝学試験など Buffer D12 500 µL 15,000 rpm、1 min 溶出 【製品仕様】 項目 操作時間 10 分 50 µg 推奨試料処理量 ～200 mg カラム容量 1000 µL 推奨溶出量 10～200 µL DNA純度（O.D.260/280） 1 15,000 rpm、1 min 仕様 最大DNA結合量 M 2 3 1.7～2.1 植物葉緑体DNA 【価格表】 MonoFas 植物DNA抽出キットⅫ 4 M 植物からDNAを抽出精製し、 Buffer E12 50 µLで溶出しました。 4870 bp 2016 bp 4870 bp 2016 bp Buffer E12 10～200 µL M : pHY Marker 1 : トマト葉 2 : じゃがいも葉 600 bp 3 : なす葉 4 : 葉菜 1 2 3 使用回数 Cat.No. 50 回分 7510-11160 25,000 250 回分 7510-11161 105,000 4 価格 左記で抽出精製したDNAを用い て植物葉の内在遺伝子(600 bp) をPCR増幅しました。 M : pHY Marker 1 : トマト葉 2 : じゃがいも葉 3 : なす葉 4 : 葉菜 MonoFasは、ジーエルサイエンス株式会社の日本における登録商標です。 AA941-20150501PDF
© Copyright 2024 ExpyDoc
