30P-am205 膵 β 細胞インスリン分泌調節におけるタイプ I ジアシルグリセロールキナーゼの役割 ◯金子　雪子 1 ，小林　洋輔 1 ，元木　啓介 1 ，白井　康仁 2 ，坂根　郁夫 3 ，石川　智久 1 2 3 （ 1 静岡県大院薬，神戸大バイオシグナル研セ，千葉大院理）【目的】膵 β 細胞において、ジアシルグリセロール (DG) は PKC 活性化などを介し、インスリン分泌に影響を与えることが知られている。さらに DG のリン酸化体であるホスファチジン酸（PA）も膵 β 細胞における生理活性脂質として知られている。これら DG や PA を量的に制御しているジアシルグリセロールキナーゼ（DGK）は、細胞内局所的な DG 枯渇/PA 増大シグナリングを介し、膵 β 細胞において機能している可能性が考えられる。しかし、DGK の膵 β 細胞における発現や機能については一切わかっていない。そこで本研究では、 typeⅠDGK(DGKα,β,γ)に着目し、膵 β 細胞における役割を明らかにすることを目的とした。【方法】マウス膵島、および膵 β 細胞株である MIN6 細胞において、 RT-PCR 法および Western blotting 法により、DGK の発現を検討した。また、免疫染色法により、DGK の細胞内局在を観察した。さらに MIN6 細胞に GFP 融合 DGK を強制発現させ、各種刺激による DGK の細胞内局在の変化をライブイメージングにより解析した。細胞内 Ca2+濃度([Ca2+]i)は、Ca 蛍光指示薬として FuraPE3 を用い経時的に測定した。MIN6 細胞から放出されたインスリンは RIA により定量した。【結果・考察】マウス膵島、MIN6 細胞において typeⅠDGK である DGK α, γ の発現が認められた。さらに、MIN6 細胞において、高濃度 KCl 溶液処置により、 DGKγ が細胞質から細胞膜近傍へと移行することが明らかとなった。さらに type ＩDGK の特異的阻害薬である R59949 10 μM の処置により、高濃度グルコースおよび高濃度 KCl 応答性インスリン分泌は有意に抑制され、グルコース誘発 [Ca2+]i 上昇反応も抑制された。以上の結果から、膵 β 細胞において typeＩDGK が細胞内脂質バランスを制御し、インスリン分泌を調節している可能性が示された。