Primers for the trh1 gene of Vibrio parahaemolyticus Primer Set VPS-1, VPS-2 ( 腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒遺伝子検出用 ) Code No. S002 Shipping at -20 ℃ Size: 1000 pmol each Stored at -20℃ Supplied Reagent: 10X PCR Buffer 600 μ l Lot No. ●検出遺伝子 Concentration : 19 pmol / μ l ●増幅産物 210 bp Volume : 53 μ l ●形状　滅菌水溶液 Expiry Date : ●調製　合成 DNA Detectable gene: Thermostable direct hemolysin-related hemolysin (Trh1) gene of Vibrio parahaemolyticus. Amplified Fragment: 210 bp Form: Solution in sterilized water Source: Synthetic oligonucleotide Application Example: 耐熱性溶血毒類似毒素 1 型遺伝子 (trh1) 1. Reaction mixture for PCR (total 50 μ l) TaKaRa TaqTM (5 units/ μ l) 0.25 μ l 10X PCR Buffer* 5μl dNTP Mixture** (2.5 mM each) 4μl Template*** 5μl Primer VPS-1 0.5 μ l Primer VPS-2 0.5 μ l Sterilized distilled water 34.75 μ l Total 50 μ l (Reaction mixture should be prepared on ice.) *Supplied with the Primer Set. **Supplied with TaKaRa TaqTM(Cat#. R001). ***Purified DNA or heat extracted sample shall be used as the template. Preparation of heat extracted sample ; Culture the bacteria in L-broth medium or Alkaline peptone medium at 37℃ for over night. Add 90 μ l of sterilized distilled water into 10 μ l of the culture medium, and heat at 95℃ for 5 min. Centrifuge to remove the residue of bacteria and use the supernatant as a sample. When higher sensitivity is required to detect from low population sample, centrifuge 1 ml of the culture medium at 5,000 rpm for 5 min and discard the supernatant. Suspend the precipitated bacteria in 100 μ l of sterilized distilled water. Heat at 95℃ for 5 min, centrifuge to remove the residue, and use the obtained supernatant as a sample. 2. PCR Condition 94℃ , 1 min. 60℃ , 1 min. 35 cycles 72℃ , 1 min. References: 1)Tada, J., et al. (1992) Mol. Cell. Prob. 6, 477-487 2)Nishibuchi, M. and Kaper, J. B., et al. (1990) Mol. Microbiol. 4, 87-99. 3)Nishibuchi, M., et al. (1989) Infect. Immun. 57, 2691-1697. 4)Nishibuchi, M., et al. (1992) Appl. Environ. Microbiol. 58, 2449-2457. Note This product is intended to be used for research purpose only. They are not to be used for drug or diagnostic purposes, nor are they intended for human use. They shall not to be used products as food, cosmetics, or utensils, etc. Takara products may not be resold or transfered, modified for resale or transfer, or used to manufacture commercial products without written approval from TAKARA BIO INC. If you require licenses for other use, please call at +81 77 543 7247 or contact from our website at www.takara-bio.com . ●使用例 1. 反応液組成 TaKaRa Taq TM (5 U/ μ l) 10X PCR buffer* dNTP Mixture** (2.5 mM each) Template DNA*** Primer VPS-1 Primer VPS-2 滅菌蒸留水 Total 反応液は氷冷下で調製する 0.25 μ l 5μl 4μl 5μl 0.5 μ l 0.5 μ l 34.75 μ l 50 μ l * 本 Primer Set に添付している。 **TaKaRa Taq TM （TaKaRa Code R001）に添付している。 *** 精製 DNA または熱抽出サンプルを使用。なお、熱抽出サンプルは、菌体を L-broth 培地、あるいはアルカリペプトン培地中で 37℃一晩培養した培養液 10 μ l に、滅菌水 90 μ l を加え、95℃、5 分間加熱後、遠心分離により菌体の残渣を除いた上清液を使用する。さらに感度が要求される場合は、同培養液 1 ml を遠心 (5,000 rpm, 5 分間 ) 後上清を除き、菌体を 100 μ l の滅菌水に懸濁する。これを 95℃、5 分間加熱後、遠心分離により残渣を除いた上清を使用する。 2. PCR 条件 94℃ , 1 min. 60℃ , 1 min. 72℃ , 1 min. 35 cycles ●参考文献 1)西淵光昭ら (1992) 日本臨床 50(1992 年特別号 )348-352. 2)Tada, J., et al. (1992) Mol. Cell. Prob . 6, 477-487 3)Nishibuchi, M. and Kaper, J. B., et al . (1990) Mol. Microbiol . 4, 87-99. 4)Nishibuchi, M., et al. (1989) Infect. Immun. 57, 2691-1697. 5)Nishibuchi, M., et al . (1992) Appl. Environ. Microbiol . 58, 2449-2457. ●注意・本製品は研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。・タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。本製品は、株式会社島津製作所で製造されたものです。　Manufactured by SHIMADZU CORPORATION. V2006.11 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････製品についての技術的なお問い合わせ先 TaKaRa テクニカルサポートライン Tel 077-543-6116 Fax 077-543-1977