アプリケーションノート EVOS® FL Autoセルイメージングシステム EVOS FL Auto ® セルイメージングシステムによる画像タイリングおよびスティッチングイントロダクション EVOS ® FL Auto セルイメージングシステムは、非常に効率のよいワークフローを使用して、完全自動化によるマルチチャンネルの蛍光および透過光でのイメージングが可能な倒立デジタルイメージングシステムです。高度な要求に応え、かつ幅広いアプリケーションに対応するため、高解像度モザイクタイリングや複数位置のウェルスキャンをサポートし、細胞カウントやタイムラプスの実験も可能です。 EVOS ® FL Auto セルイメージングシステムでは、高解像度で複数の画像を取得し、それらを貼り合わせることにより、標本の広い面積を高解像度でマッピングできます。本機能は、組織切片や幹細胞コロニーの分析、または 96 ウェルプレートでウェル中の全細胞を観察する用途に最適です。EVOS ® FL Auto セルイメージングシステムは、モノクロームカメラとカラーカメラの両方を備えており、蛍光画像およびカラー画像を高解像度で取得できます。本アプリケーションノートでは、広範に mCherry を発現するトランスジェニックマウスの腸切片において、10 倍の対物レンズで連続した画像を取得しました。画像取得後、画像を貼り合わせ、組織切片の全体像を得ました。 Materials • mCherry Rat Monoclonal Antibody (M11217) • 4% paraformaldehyde • Peroxidase Goat Anti-rat IgG Secondary Antibody • EVOS® Light Cube, Texas Red® (AMEP4655) 方法全組織で mCherry を発現しているトランスジェニックマウスを屠殺し、摘出した腸組織を4% パラホルムアルデヒドで固定しました。mCherr y 抗体（ M11217 ）は 1：15,000 で使用し、ペルオキシダーゼと結合した抗ラット Ig 二次抗体による検出を行いました。目的の染色強度が得られるまで、組織切片をペルオキシダーゼ基質溶液中でインキュベートしました。カラーカメラおよびモノクロームカメラを使用し、EVOS® FL Autoセルイメージングシステムの Scan 機能により、画像の取得および貼り合わせを行いました。 15 図 2. 倍率 10 ×で取得した 63 枚の画像を貼り合わせ、つに統合した画像を作成し 117 ました。mCherr y の発現は蛍光（ A ）または発色ペルオキシダーゼ染色（ B）によっ 16 て検出されました。 A. 結果および考察 EVOS® FL Autoセルイメージングシステムにより、目的の指定領域において個別の画像を取得し（図1）、それらの画像を継ぎ目無く貼り合わせ、切片全体またはスキャンした領域を 1つの画像にまとめることができました（図 2）。各パネルの光学的解像度および画像品質はフル画像でも維持されています（図 3）。 B. A. A. B. 図 3. 貼り合わせた画像においても、1 0 倍の対物レンズで撮影した個々の画像は解像度を保っています。m C h e r r y の発現は蛍光（ A ）または発色ペルオキシダーゼ染色（ B ）によってmCherry の発現を検出しました。 B. 図1. 画像スキャンで取得した画像63 枚中の10 枚。mCherry の発現は蛍光（ A ）および発色ペルオキシダーゼ染色（B）によってmCherry の発現を検出しました。画像は10 倍の対物レンズで取得しました。詳細はこちら www.lifetechnologies.com/evosflauto 公式 Facebook ページ & Twitter もチェック！　facebook.com/LifeTechnologiesJapan　@LifetechJPN 最新の価格および在庫数は、弊社ホームページ右上の “製品価格と在庫の検索” でご確認いただけます。ライフテクノロジーズジャパン株式会社本社：〒108-0023　東京都港区芝浦 4-2-8 大阪：〒564-0052　大阪府吹田市広芝町 10-28 コールセンターテクニカルサポートオーダーサポートカスタムプライマーについて TEL.03-6832-9300　FAX. 03-6832-9580 TEL.06-6339-8165　FAX. 06-6339-8138 0120-650591（携帯からでもご利用いただけます） 0120-477-392　FAX：0120-477-120 TEL：03-6832-6980　FAX：03-6832-9584 TEL：03-6832-6980　FAX：03-6832-9585 サービスラボ営　業　部販売店 TEL：03-5753-3006　FAX：03-5753-3007 TEL：03-6832-9300　FAX：03-6832-9580 研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。記載の社名および製品名は、弊社または各社の商標または登録商標です。標準販売条件はこちらをご覧ください。www.lifetechnologies.com/TC The trademarks mentioned herein are the property of Life Technologies Corporation or their respective owners. © 2013, Life Technologies Japan Ltd. All rights reserved. Printed in Japan. MP077-A1312MS www.lifetechnologies.com