CRISPR/Cas9 の実験に！ Cas9ゲノム編集 関連製品 高品質のCas9タンパク質（野生型Cas9） タンパク質 Ｃａｓ9 Ｎｕｃ ｌ ｅａｓｅ protein NLS 本品は、Streptococcus 由来のCas9 ヌクレアーゼを、組換え大腸菌で発現・ pyogenes 精製したタンパク質です。核移行シグナル（NLS）を有しており、合成したガイドRNAと 組み合わせることでゲノム編集に利用することができます。 高純度・高品質 特 長 in vivo 実験でも高効率 核移行シグナル（NLS）が付加され 低エンドトキシン （1 EU/μg 未満） バルク供給可能 内 容 図 1. CRISPR/Cas9 の模式図 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 300 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 50％ Glycerol 酵素形状 純 度 1 EU/μg 未満 （ゲル化比濁法による内存エンドトキシン試験） 構成品 Cas9 Nuclease protein NLS, 10×H Buffer（1 ml×1本） 本品を用いたノックインマウスの作出 実験例 ガイド RNA と相補的に結合した任意 の配列を二本鎖切断し、 DNA 損傷 修復機構を利用して遺伝子変異を 引き起こします。 遺伝子組換え大腸菌 起 源 データ提供： 株式会社 特殊免疫研究所 マウス Smpd3 遺伝子を標的として、本品とgRNAおよびノックインドナーDNAを混合し、C57BL/6Jマウス受精卵の前核と細胞質にマイクロインジェクション した。マウス２細胞期胚を仮親に移植し、誕生した仔マウスについて遺伝子ノックインの有無を確認した。 表1 Cas9 Nuclease protein NLSを用いたCRISPR/Cas9システムによる遺伝子変異動物作製結果 実験条件 受精卵注入 産仔作出結果 注入物 注入場所 注入胚数 移植胚数 総胎児数 ノックアウト匹数(％)*1 ノックイン匹数(％)*1 Cas9タンパク質 gRNA ssODN 細胞質 + 前核 123 114 11 6/11 (54.5％) 6/11 (54.5％) [注入溶液] Cas9タンパク質(本品, 最終濃度30 ng/µl) / gRNA（1本鎖RNA, 最終濃度50 ng/µl）/ ssODN（100 base, 最終濃度100 ng/µl） [注入方法] 細胞質と前核の2step-injection [マウス系統] C57BL/6J Jcl [ssODN] loxPを含む一本鎖オリゴヌクレオチド PCR-RFLP Surveyor assay M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Wt (A）ノックアウト個体候補 ：変異体候補マウス M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Wt (B）ノックイン個体候補 ：ノックイン候補マウス Wt： 野生型マウス *1 総胎児数あたり ノックアウト個体候補（A）及びノックイン個体候補（B）の確認 （検出方法：Surveyor assay および PCR-RFLP） (A）Surveyorアッセイによる変異導入の確認。変異導入されたサンプル では、Cel-Ⅰヌクレアーゼにより切断されたPCR産物が観察された（➡）。 (B）PCR-RFLPによる変異導入の確認。ドナーDNAに予め制限酵素 （BamHⅠ）サイトを作製し、PCR後、BamHⅠで消化した（➡）。 M： マーカー <結果> 誕生した11匹の仔マウスのうち、6匹のマウスにおいて遺伝子ノックインが確認された。 Code No. 容量 （濃度） 希望納入価格（税抜） 313-08421 Cas9 Nuclease protein NLS 製品名 50 μg （1 µｇ/µｌ） ￥60,000 317-08441 Cas9 Nuclease protein NLS (high conc.) 75 μg （3 µｇ/µｌ） ￥75,000 Cas9ゲノム編集 関連製品 タンパク質 高精度なゲノム編集に（ニッカーゼ改変型Cas9） Ｃａｓ9 Nickase protein NLS 本品は、Streptococcus pyogenes 由来のCas9 ヌクレアーゼに変異(D10A）を導入し、組換え 大腸菌で発現・精製したタンパク質です。ニッカーゼ改変型Cas9はDNAの一本鎖のみを 切断しニックを入れる活性をもちます。ゲノム編集の際には同時に2種類のガイドRNAを 必要とし、オフターゲット効果を抑制することができます。 特 長 DNAの一本鎖のみを切断 2種類のガイドRNAで オフターゲット効果を抑制 核移行シグナル（NLS） を付加 内 容 起 源 酵素形状 構成品 タンパク質 図 2. ニッカーゼ改変型 Cas9 Nickase 型 Cas9 は DNA の一本鎖 のみを切断しニックを入れるため、 欠損や挿入が起こらずオフターゲット 効果を抑制します。 遺伝子組換え大腸菌 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 300 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 50％ Glycerol Cas9 Nickase protein NLS Code No. 製品名 容量 （濃度） 希望納入価格（税抜） 319-08521 Cas9 Nickase protein NLS 75 μg （3 µｇ/µｌ） ￥75,000 転写抑制研究に（不活性型Cas9） dＣａｓ9 protein NLS 本品は、Streptococcus 由来のCas9 ヌクレアーゼに変異(D10A,H840A）を導入し、 pyogenes 組換え大腸菌で発現・精製したタンパク質です。DNA切断活性をもちません。ガイドRNA を介して標的配列に結合することができ、転写抑制等の研究への応用が期待されます。 特 長 DNA切断活性をもたない ガイドRNAにより標的配列を認識し結合 核移行シグナル（NLS） を付加 内 容 起 源 酵素形状 構成品 抗 体 図 3. dCas9 による転写抑制機構 ガイド RNA を介して転写開始部位の 下流に dCas9 が結合すると転写伸長 を阻害し転写を抑制します。 遺伝子組換え大腸菌 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 300 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 50％ Glycerol dCas9 protein NLS Code No. 製品名 容量 （濃度） 希望納入価格（税抜） 316-08531 dCas9 protein NLS 75 μg （3 µｇ/µｌ） ￥75,000 CRISPR/Cas9実験のモニタリングに（Ｃａｓ9モノクローナル抗体） Anti-Cas9 Monoclonal Antibody 本品は、Streptococcus pyogenes 由来のCas9タンパク質に対するマウスモノクローナル抗体です。ウェスタンブロッティングにおいて 弊社製品のCas9タンパク質シリーズ（野生型Cas9、改変型Nickase、不活性型Cas9）で良好な結果が得られることを確認しており、 CRISPR/Cas9実験のモニタリング等に使用することができます。 内 容 特 長 組換えCas9 タンパク質に対するマウスモノクローナル抗体 ウェスタンブロッティングにおいて高感度に検出可能 免疫動物 マウス 抗 原 Cas9 Nuclease protein NLS タイプ モノクローナル 精 製 アフィニティー, イオン交換 形 状 1×PBS, 50% Glycerol Code No. 製品名 容量 （濃度） 希望納入価格（税抜） 310-08431 Anti-Cas9 Monoclonal Antibody 50 μg （1 µｇ/µｌ） ￥55,000
© Copyright 2024 ExpyDoc
