HPLC Fehlersuche - Troubleshooting

HPLC Fehlersuche - Troubleshooting
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Ursache
Keine Peaks, die
Baseline ist absolut flach.
a) Lampe im Detektor ist ausgeschaltet oder
defekt.
b) Verbindungskabel zwischen Detektor und
Steuerrechner nicht angeschlossen.
c) Kein Fluss des Laufmittels.
a) Lampe am Detektor einschalten oder ersetzen.
b) Alle Kabel und Anschlüsse überprüfen.
c) Vorratsgefäß überprüfen, Pumpe/n starten.
Keine Peaks, Baseline
zeigt leichtes Rauschen.
a) Falsche Flussrichtung.
b)Keine, zu wenig, falsche Probe injiziert.
c) Falsche Sensitivität/Wellenlänge des Detektors.
a) Pumpen korrekt einstellen und starten.
b) Probe oder Probengeber überprüfen.
c) Einstellungen am Detektor prüfen.
Hohes Rauschen mit
regelmäßigen Zacken.
Stark pulsender Fluss des Laufmittels.
a) Pumpen überprüfen, event. Luftblase im Ventil
am Pumpenkopf.
b) Pulsationsdämpfer verwenden.
Hohes Rauschen mit
langer flacher Drift.
Vermutlich Temperaturschwankungen
durch Einstrahlung von außen.
a) Die HPLC Säule in Säulenthermostat verlegen.
b) HPLC System vor wechselnder
Umgebungstemperatur schützen.
Vermutlich elektromagnetische Störung.
a) Abgeschirmte Kabel verwenden.
b) Stromversorung mit galv. Trennung (USV)
verwenden.
c) Das komplette HPLC System an anderen
Stromkreis anschließen.
Luftblasen in der Durchflusszell im Detektor.
a) Durchflusszelle spülen bis Luft entfernt wurde.
b) Rückdruckrestriktor am Eingang der
Durchflusszelle verwenden.
c) Lösemittelfilter verwenden und/oder
Lösemittel entgasen.
Hohes Rauschen mit
scharfen negativen
Zacken.
Extrem starkes
Rauschen.
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Behebung
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Ursache
Behebung
Gleichmäßiges
Rauschen.
a) Der Mischer ist defekt.
b) Lampe im Detektor schadhaft.
c) Eluentenabsorption zu hoch.
a) Mischer überprüfen.
b) Lampe ersetzen.
c) Eluenten/Wellenlänge ändern
Unregelmäßiges
Rauschen.
Durchflusszelle im Detektor verschmutzt.
Flusszelle mit org. Lösemittel oder
20% HNO3 spülen.
Keine Peaks und kein
Rückdruck, kein Fluss
am Detektor.
a) Pumpe/n ist/sind ausgeschaltet.
b) Luftblase im Ventil am Pumpenkopf.
c) Leckage an Anschluss oder Ansaugschlauch
defekt.
d) Vorratsgefäß leer oder Ansaugschlauch nicht im
Laufmittel.
a) Pumpe/n überprüfen und einschalten.
b) Pumpenkopf spülen und leicht an Ventil klopfen.
c) Verbindungen überprüfen/abdichten oder
erneuern.
d) Eluent nachfüllen, Ansaugschlauch fixieren.
Keine Peaks aber
hoher Rückdruck
bzw. Alarm.
a) Ansaugschlauch oder Filter verstopft.
b) HPLC Säule oder Fritte zugesetzt.
c) Probenaufgabe Ventil oder Probenschleife
verstopft.
d) Kapillare am Anschluss equetscht/verschlossen.
a) Verstopfung beseitigen, Filter im Ultraschallbad
reinigen oder ersetzen.
b) Säule spülen und Fritte im Ultraschallbad
reinigen oder ersetzen.
c) Ventil zerlegen und reinigen, Schleife spülen
oder ersetzen.
d) Kapillare beschädigte Stelle abschneiden und
wieder anschließen.
Langsamer Druckanstieg
a) Fritte am Säuleneingang oder Säule vestopft.
b) Fritte im Mischer verstopft.
a) Vorsäule verwenden/ ersetzen, eventuell Säule
gegenspülen.
b) Fritte im Ultraschallbad reinigen oder
ersetzen.
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Ursache
Behebung
Plötzlicher Druckanstieg.
a) Schadhaftes oder schlecht schaltendes Ventil.
b) Probe ist ausgefallen
a) Ventile überprüfen und reinigen.
b) Säule bzw. System spülen
Druckschwankungen
a) Luft in der Pumpe oder in der Ansaugleitung zur
Pumpe.
b) Undichte Leitung zwischen Pumpe und Säule.
a) Lösemittel entgasen bzw. mit Helium spülen.
b) Verschaubungen der Leitungen festziehen.
Druckverlust
a) Kein Fluss der mobilen Phase.
b) Undichte Flüssigkeitsleitung zwischen Pumpe
und Säule.
a) System auf lockere Verschraubungen und
Vorratbehälter des Eluenten prüfen.
b) Leckage systematisch suchen und beseitigen.
Hoher Druckanstieg
a) Verschmutzung am Säuleneingang, Ausfall von
Puffersalzen.
b) Viskosität der mobilen Phase ist zu hoch.
C) Die Partikel des Säulenmaterials sind zu klein.
a) Säule ausbauen und mit starkem Lösemittel
rückspülen sowie verstopfte Filterelemente und
Vorsäule ersetzen. Passt das Laufmittel zur
Pufferkonzentration?
b) Lösemittel ändern oder Temperatur der Säule
erhöhen .
c) HPLC Säule mit größeren Partikeln verwenden (z.
Bsp. anstatt 5 µm 8 µm).
Tailing, an Basis
unscharfe Peaks,
oft mit verschobener
Retentionszeit.
Überladung der HPLC Säule.
Aufgabekonzentration verringern oder Säule mit
höherer Kapazität verwenden.
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Ursache
Behebung
Fronting, ohne
Verschiebung der
Retentionszeit.
a) Totvolumen zwischen Injektor und Säule
b) HPLC Säule schadhaft.
a) Injektor /Tubing auf Totvolumen prüfen.
b) HPLC Säule ersetzen.
Breite, flache Peaks
mit
Dach.
Zu großes Injektionsvolumen.
Kleineres Injektionsvolumen bzw. kleinere
Probensschleife am Injektionsventil verwenden.
Doubling, alle Peaks
haben zwei Maxima.
a) Kanalbildung in der Säule.
b) Injektor defekt.
a) HPLC Säule ersetzen.
b) Injektor prüfen und reparieren.
Verschiebung der
Retentionszeiten in
eine Richtung.
a) Leck der Pumpendichtung.
b) Überladung der Säule.
c) Säule nicht equilibriert.
a) Pumpendichtungen ersetzen.
b) Geringere Probenkonzentration aufgeben.
c) 2 bis 3 Säulenvolumina equilibrieren.
a) Temperaturschwankungen der Säule.
Willkürliche Verschiebung der Retentionszeiten.
Peaks sind deutlich
kleiner als erwartet.
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b) Ventil am Pumpenkopf bzw.
Proportionierventil defekt.
a) Zu niedriges Injektionsvolumen.
b) Eluent mit höherer Adsorption.
c) Verschmutzt Durchflusszelle im Detektor.
a) Säulenthermostar verwenden.
b) Ventile überprüfen/ersetzen.
a) Injektionsvolumen überprüfen.
b) Geeigneten (HPLC-grade) Eluenten
verwenden.
c) Durchflusszelle im Detektor spülen.
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Ursache
Behebung
Reproduzierbare
Geisterpeaks.
a) Verschmutztes Injektionsventil.
b) Peak aus vorhergehendem Lauf.
c) Injektion mit Luft.
a) Injektionsventil spülen.
b) Vorhergehenden Lauf länger laufen lassen.
c) Injektionsvolumen prüfen.
Willkürliche
Geisterpeaks.
a) Probenlösemittel ist verschmutzt.
b) Luft in Durchflusszelle im Detektor.
c) HPLC Säule ist verschmutzt.
a) Probe neu ansetzen.
b) Durchflusszelle spülen, Rückdruckrestriktor
verwenden.
c) HPLC Säule spülen oder ersetzen.
Am Fitting tritt Medium
aus.
Tubing am Ende der Ferrule ist zu lang.
a) PEEK Tubing, auf richtige Länge kürzen und
wieder montieren.
b) Edelstahl Tubing, Tubing inklusive Ferrule
abtrennen, Grat entfernen und mit neuer Ferrule
montieren.
Am ersten Peak bildet
sich eine leichte
Vorschulter.
Totvolumen am Tubingende, Raum zwischen
Tubingende und dem Anschlussteil, Tubing ist zu
kurz.
a) PEEK Tubing, auf max. Länge in die gelöste
Verschaubung schieben und wieder festziehen.
b) Edelstahl Tubing, Tubing inklusive Ferrule
abtrennen, Grat entfernen und mit neuer Ferrule
montieren.
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