JUNE1995 日本化 学療 法 学会 雑 誌 630 新 しい抗菌薬感 受性測定 法:ETestの -第2報 栄 養 要 求 性 の 厳 し いStnptococ6u5 pneumoniaeお よ びHaempmus 長 谷 川 美 幸1)・ 内 野 卯 津 樹1)・ 村 岡 金子 有用性 について influenmに 宏 江1)・ 小 林 対 す る 検 討- 寅 詰1) 明 寛2)・ 佐 々 木 次 郎2)・ 岩 田 敏3) 1)三菱化学 ピー シー エル ・化 学療 法研究 室* 2)東海大学 医学部 口腔 外科 学教室 3)国立腫 ヶ浦病 院小 児科 (平成6年9月21日 ETestはABBIODISK社(ス いstripを 受 付 ・平 成7年5月8日 ウ ェ ー一デ ン)で 利 用 し て,従 開 発 さ れ た も の で,抗 来 の デ ィ ス ク 感 受 性 の 要 領 で 簡 便 にMICを 科 感 染 症 よ り分 離 さ れ たSt猶eptoco6cus pneumoniaeお 受 理) 菌 薬 を各 濃 度 段 階 に含 む細 長 測 定 す る も の で あ る。 今 回 ・ 小 児 よ び1勉emopmus 株 お よ び 感 受 性 株 に 対 す る 各 種 抗 菌 薬 のMICをETestを influenzaeのPenicillin耐 用 い て 測 定 し,日 る 寒 天 平 板 希 釈 法 の 測 定 値 と比 較 し た 。 こ れ ら の 試 験 菌 株 に 対 す る,両 penicillinに 本化学療法学会標 準法 によ 方 法 に よ る 各 薬 剤 のMIC値 対 す る感 受 性 に 関 係 な く比 較 的 よ く一 致 し た 。 し か しPenicillinInsensitive pneumoniu(PISP)はimipenem,azithromycinお 平 板 法 よ り2倍 性 は Streptococcus よ びvancomycinのETestに よ るMICが 高 い 値 と な っ た 。 ま た 両 菌 種 の 測 定 培 地 に 加 え た 血 液 成 分 は,ETestに 寒天 よ る測 定 値 に影 響 を与 え なか っ た。 Key word8:E 我 々 は,最 近,ス Test,寒 天 平 板 希 釈 法,MIC,Spneumoniae,H.influenzae ウ ェー デ ンで 開 発 され たETestを 用い で 前 培 養 を 行 い,発 育 し た コ ロ ニ ー を 掻 き取 り減 菌 生 理 て13,,数 種 の 抗 菌 薬 の各 種 の 標 準 菌 株 お よ びStaphylococcus 食 塩 液 中 にMcFarlandNo。0.5に aureusに に 菌 液 を 侵 し,下 対 す るMICを 測 定 し従 来 法 で あ る寒 天 平 板 希 釈 法 調 製 した 。 滅 菌 綿 棒 記 に 示 し た 寒 天 培 地 に均 一 に塗 抹 し と比 較 した 。 そ の 結 果 両 方 法 に よ る 測 定 値 は よ く一 致 し,E た 。 下 記 に 示 し た 各 薬 剤 のETestを Testは ー を用 い 信 頼性 を もち臨 床検 査 の現場 で活 用が 可能 であ る と 考 え ら れ た(投 稿 中)。 今 回 は小 児 科 領 域 の感 染 症 か ら分 離 され たStrゆtococcuspneumoniaeお en2aeに よ びHaemophilusinflu- 対 す る各 抗 菌 薬 のMICを 測 定 し,寒 天平 板希 釈 法 と比 較 し た の で そ の結 果 を報 告 す る。 1.実 1.試 験 材 料 お よび 方 法 な る よ う分 注 し用 い た 。 培 養 は35℃ 止 円 径 の 目 盛 り よ りMIC で18時 間 行 い,阻 を求 め た 。ETestのMIC中 板 法,ETestと か ら1994年2月 の 間 に全 国 の 医 療 施 設 研究 室 で 一80℃ 炭 末 ス キ ム ミ ル ク 中 で 保 存 さ れ たS.Pneumoよ びH.influenzaeよ り 碑nicillin働 umoniae(PISP)10株,penicillin感 niae(PSSP)15株 毅 お よ び β-1actamase非 を無 作 為 に選 定 して 試 験 菌 株 と した 。 試 験 菌 は 主 に 中 耳 炎,髄 膜 炎,肺 産 生(β-)Hinflu- 炎,気 管支 炎 由来株 で あ る。 用 い た 薬 剤stripと Ampicillin(ABPC:濃 度 範 囲256∼0.016μg/ml) PiperaciIlin(PIPC:256∼0.016μg/ml) Clavulanicacid/amoxicillin(CVA/AMPC:256∼ 0.016μg/m1) Sulbactam/ampicillin(SBT/ABPC:256∼0 mD Imipenem(IPM:32∼0-002μg/ml) ,2.MIC測 定法 Cefpirome(CPR:256∼0.016μg/ml) 1)ETest1,2) S.pneumoniaeは Ceftriaxone(CTRX:32∼0.002μg/m1) コ ロ ン ビ ア 羊 血 液 寒 天 培 地(BBL) に,H.influen2aeは '東 京 都板 橋 区 志 村3-30-1 チ ョ コ レ ー トII寒 天 培 地(BBL) 濃度範 囲 を下 記 に示 した 。 生(β+)H,influk- enzae15株 medium(M-H. チ ョ コ レ ー ト寒 天 平 板 に して 使 用 し た 。ETestに 性S卿 en2ae10株 天平 脱 繊 血 を 用 い,S.pneumiaeは 血 液 寒 天 平 板,Hinfluemaeは 受 性S.pneumo- と 薪lactamase産 間 目盛 りに つ い て は化 学 もMuellerHinton M.,Difco)に5%馬 に お け る 小 児 科 の 感 染 症 患 者 よ り分 離 さ れ,当 niaeお 滅 菌 シ ャ ー レ に 厚 さ4mmと 療 法 学 会 標 準 法 の 数 値 に 準 じ て 判 定 し た 。 な お,寒 験菌株 1993年10月 専 用 ア プ リケ ー タ 、 平 板 上 に 置 い た 。 試 験 培 地 は 直 径90mmの Azithromycin(AZM:256∼0。016μg/ml) Vancomycin(VCM:256∼0.016μg/m1) .016μg/ VOL.43 2)寒 NO .6 栄 養 要 求 性 の 厳 しい 株 を用 い たETestに 天平板希 釈法 よ るMIC 631 MIC90で 見 た 場 合,PISP,PSSP共 従 来 法 に よ るMIC値 は,化 学 療 法 学 会 標 準 法3)に 従 い寒 天 平 板 希 釈 法 で 測 定 した。 す な わ ち 各 薬 剤 濃 度 を 含 値 は,よ く一 致 す る 傾 向 を 示 し た 。 し か し,平 むM. Testの H. M.に 試 験 菌106CFU/m1を5μ1接 35℃18時 間 培 養 後,発 をMICと した。 育 の認 め られ な か っ た最 小 濃 度 製 菓),PIPC(富 測 定 に はABPC(明 山 化 学),CVA/AMPC(ス 有 製 薬),CPR(ヘ 治 ミス ク ラ イ ン ビ ー チ ャ ム),SBT/ABPC(フ ュ),AZM(フ ァ イ ザ ー 製 薬), キ ス ト),CTRX(日 ァ イザ ー製 薬),VCM(塩 本 ロシ 野 義 製 薬)の 9薬 剤 を 用 い た。 果 1.S.pneumoniaeに PIPCお よ びVCMのE 高 い 値 と な っ た 。PSSPに よ びCPRで 対 して は 寒 天 平 板 法 よ りETestが2倍 共 に 両 法 は 比 較 的 よ く一 致 し2倍 高 PISP10株,PSSP15株 にETest/寒 し た。 な お平 均MICは2つ に対 す 布 をTable1に た 指 数 に 変 換 し算 出 し た 。PISPに を2を 底 と し 対 しETestで 天 平 板 法 と同 値 か2倍 高 い 値 とな っ た。IPM, 約2倍,他 示 の 測 定 法 か ら得 られ た値 の 母 集 団 そ の もの を比 較 す る為 に各MIC値 は寒 AZMお の 薬 剤 は 同 値 か1.6倍 布 で はIPMお よ びAZMで のMIC値 天 平 板 希 釈 法 と し て 図 示 し た 。Fig.1-a) に 示 す 通 り,PISPで は 各 薬 剤 と もETestの す べ て,VCMは10株 中9株ETestが2倍 Fig.1-b)のPSSPで 剤 は 同 値 か 上 下2倍 AZM, 高 い ETestが はETest 剤 はPISP同 値 ま た は2倍 対 す る 平 均MICをTable3に た 。 寒 天 平 板 希 釈 法,ETestと 示 し も に β-1actamase産 産 生 株 を 問 わ ず よ く一 致 す る 結 果 と な っ た 。 い ず なか っ た。 程 度 高 か っ た 。 そ れ 以 外 は1.5倍 様,同 つ い て の検 討 れ の 薬 剤 に お い て も1.5倍 値 がCPRお IPMの3薬 高 い値 を示 した。 2.H.inflluenzaeに 生,非 PIPC, 程 度 の バ ラ ツ キ を 認 め た が,CPR, VCMの3薬 H.influen2aeに 程度高 はABPC, ぼ 一 致 し た 。PSSPに よ びVCMが1.8倍 値 が同 じ 程 度 高 か っ た 。 特 に,IPM,AZMは の 値 が2倍 程 度 高 い 値 を示 した が,そ の 他 の測 定 値 はほ 対 し て はETestの の 差 異 をFig.1 値 とな っ た。 お よ びPSSP15株 る 各 種 抗 菌 薬 の 平 均MICとMIC分 を超 え る不 一 致 を認 め る例 は ま っ た くな か っ た 。 10株 つ い て の検 討 S.pneumoniaePISP10株 か っ た 。MIC分 射 す るIPM,AZMお 値 が2倍 値 も し く は2倍 II.結 よ びVCMは 同 様PISPに 均MIC か っ た 以 外 は す べ て よ く一 致 し た 。 平 均MIC,MICg。 寒 天 平 板 希 釈 法 に よ るMICの IPM(萬 種 し, に両法 に よる測 定 本 菌 に 射 す るMICg。 以 上 差 が 生 じ る例 は認 め られ 値 は β-lactamase非 産 生 株 の1 程 度 の 範 囲 内 で,ほ ぼ 一 致 す る結 果 とな っ た。 それ に と 例 を 除 き す べ て 一 致 し た 。 不 一 致 例 は β-1actamase非 も な いMIC分 産 生 株 のPIPCの 布 に も大 差 は生 じな か っ た 。Table2の Table 1. Geometric mean MIC of antimicrobial drugs for Streptococcus 値 が 寒 天 平 板 希 釈 法 で0.031μg/ml, pneumoniae strains (μg/m1) PISP: penicillin-insensitive Streptococcus pneumoniae , PSSP: penicillin-susceptible Streptococcus pneumoniae ( ): MIC range Table 2. MICE, of antimicrobial drugs for Streptococcus pneumoniae strains (μg/m1) PISP: penicillin-insensitive Streptococcus pneumoniae, PSSP: penicillin-susceptible Streptococcus pneumoniae Fig. JUNE 日本化 学療 法 学会 雑 誌 632 a) penicillin-insensitive Streptococcus pneumoniae (10) b) penicillin-susceptible Os: same Streptococcus pneumoniae (15) a) ƒÀ-lactamase-producing Haemophilus b) ƒÀ-lactamase-non-producing 0*: 1. Comparison of E Test MICs with agar dilution MICs: No. of E Test MICs within indicated concn (log 2) of agar dilution MICs. 1995 influenzae Haemophilus (10) infhanzae (15) same Fig. 2. Comparison of E Test MICs with agar dilution MICs: No. of E Test MICs within indicated concn (log 2) of agar dilution MICs. Table 3. Geometric mean MIC of antimicrobial drugs for Haemophilus influenzat strains (μg/ml) β+: (): β- lactamase-producing Haemophilus influenzae,ƒÀ-:ƒÀ-lactamase-non-producing Haemophilus influenzae MIC range Table 4. MIC90 of antimicrobial drugs for Haemophilus influenzae strains (μg/ml) β+: E ƒÀ-lactamase-producing Haemophilus Testで0.063μg/mlとE influenzae Testが2倍 , ƒÀ-:ƒÀ-lactamase-non-producing 高 い値 を示 し β-lactamase産 PIPCお ETestが CTRXは15株 た(Table4)。 生H.influenzae10株 よ びIPMはE Testが 2倍 高 い 値 と な っ た 。 他3薬 と も に ほ と ん ど 一 致 し た(Fig.2)。 Test,寒 産 生15株 に お い て はABPC,PIPC,IPMが β-lacta- mase産 生 株 同 様E 程 度高 い Testが 同 値 も し く は2倍 結 果 と な っ た 。 し か し,SBT/ABPC,CVA/AMPCは 低 いか 同値 で あった。 す べ て一 致 し た。 III.考 天平板 法 β-lactamase非 influenzae 寒 天 平 板 法 に比 べ2倍 に 対 し,ABPC, 寒 天 平 板 法 に比 べ 同 値 か 剤 はE Haemophilus 察 我 々 は標 準 菌 株 お よび 臨 床 分 離S.aureusに 定 抗菌 薬 のMICをE 対 す る特 Testを 用 い て測 定 し,そ の測 定 値 の 信 頼 性 を検 討 し正 確 性,再 現性 の面 か ら問 題 が な い こ と を確 認 した(投 稿 中)。 今 回 は引 き続 き栄 養 要 求 性 お よ び培 養 条件 の 厳 しいS.pneumoniaeお よびH.influ- enza8の 臨 床 分 離 株 につ い て検 討 した 。 これ ら の 菌種 は VOL.43 NO.6 栄 養 要 求 性 の厳 し い 株 を 用 い たETestに 比 較 的 小 児 科 感 染 症 領 域 か ら多 く分 離 さ れ,特 に両 菌 種 633 よ るMIC く一 致 す る こ と を 確 認 し た 。 ま た 従 来 の デ ィ ス ク 法 と に よ る髄 膜 炎 は,細 菌 感 染 症 の 中 で も重 篤 で 一 刻 も早 い 同 じ手 間 でMIC値 的 確 な 化 学 療 法 が 望 まれ る。 また,わ が 国 に お い て もペ ニ シ リ ン低 感 受 性S,pneumoniae(PISP)の 増 加 は深 小 児 科 領 域 の 臨床 の 現 場 に大 い に 役 立 つ もの と考 え られ が 迅速 か つ 正 砲 に得 られ るE る。 刻 で あ り治 療 に 用 い る抗 菌 薬 の 選 択 も大 き く変 わ っ て く 文 る.こ の よ うな 患 者 の 多 くを 治療 す る大 規 模 な 病 院 の 中 1) の 要 領 で簡 易 にMICが Testは デ ィス ク感 受 性 求 め られ る こ と か ら中 央 検 査 室 レベ ル に も導 入 しや す く,臨 床 の 現 場 で正 確 な 薬 剤 感 受 性 情 報 が 得 られ る.こ れ らの 菌 種 に お け るE 2) Testの 有 用 性 は欧 米 諸 国 の 多 くの研 究 者 に よ っ て報 告 され て い る。Jorgensen J H4)ら はH.inflmnzae る β-lactam薬 のMICをE 50株 に射 す TestとASM II agarを 用 い た寒 天 平 板 希 釈 法 と比 較 し,92%以 し,Ngui-Yen 3) 上 の一 致 率 を示 を用 い て 感 受性 にか かわ らず94%の 致 を 認 め て い る.我 で み る 限 り,E 日本 化 学 療 法 学 会MIC測 阻 止 濃 度(MIC)測 rapy29: J H2)ら はpenicillin感 受 性 別S.pneu- moniae30株 4) 高 い一 PISPはE だ 個 々 の 値 を見 た 場 合,薬 剤 によって 5) E A5)ら はbroth , 1991 Macias E A, Mason E 0 Jr., Ocera H Y, Larocco M T: Comparison of E Test with Standard Broth Microdilution for Determining Antibiotic Susceptibilities of penicillin-Resistant strains of Streptococcus pneumoniae. J. Clin. Microbiol 32: 430-432, 1994 Testの 値 が 寒 天 平 板 法 よ り2倍 程 度 高 くな る傾 向 に あ っ た。Macias 1981 philus influenzae and Streptococcus pneumoniae by using the E-Test. J. Clin. Microbiol. 29:109 寒 天 平 板 法 と ほ とん ど同 様 な 値 ∼114 を 示 し た.た 76∼79, 定 法 改 定 委 員 会: 最 小 発 育 定 法 再 改 定 に つ い て 。Chemothe- Jorgensen J H. Howell A W, Maher L A: Quantitative antimicrobial susceptibility testing of Haemo- 々 の 結 果 か ら も平 均MIC,MIC90 Testは 献 Baker C N, Stocker S A, Culver D H, Thornsberry C: Comparison of the E Test to Agar Dilution , Broth Microdilution, and Agar Diusion Susceptibility Testing Techniques by Using a Special challenge set of Bacteria . J. Clin. Microbiol 29: 533-538, 1991 Ngui-Yen J H , Brycl E A, Porter C, Smith J A: Evaluation of the E Test by Using Selected Gram- Positive Bacteria. J. Clin. Microbiol 30: 2150- 2152, 1992 央 検 査 室 で の薬 剤感 受 性 の測 定 はデ ィ ス ク感 受性 が 用 い られ て い る の が 現 状 で あ る.E Testは dilutionと の比 較 で,同 様 に 耐 性 株 は よ り耐 性 側 に シ フ トす る こ と を指 摘 し て い る。 しか し今 回,試 験 菌 と して 用 い た 栄 養 要 求 性 の 厳 しい 菌 に対 して も全 般 的 に は寒 天 平 板 法 とよ Evaluation of the E Test: a new quantitative antimicrobial susceptibility test 2) Application for Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae strains Miyuki Hasegawa", Utsuki Uchino'), Hiroe Muraokal), Intetsu Kobayashi1), Akihiro Kaneko'', Jiro Sasaki') and Satoshi Iwate 1)Chemotherapy Division ,Mitsubishi-Kagaku Bio-Clmical Laboratories. Shimura 3-30-1,Itabashi-ku,Tokyo 174,Japan 2)Department of Oral Surgery ,School of Medicine Tokai Unlversity 3)Department of Pediatrics ,Kasumigaura National Hospital The E Test pneumoniae MICs were obtained and or of both determined blood fastidious to with methods for by MIC determination those were in by agreement, agar dilution The such as E S. Test pneumoniae different isolated determined agar regardless strains method. appears and the of The antimicrobial from the However, penicillin-insensitive the of strains producibility. components. bacteria the influenzae their ƒÀ-lactamase vancomycin those applied Haemophilus compared by strains was and S. E dilution of the E Test to be H. influenzae. a MICs reliable for infections. method. MICs of were were The MIC method of imipenem, one not the E Test values the test azithromycin dilution affected for Streptococcus The penicillin-susceptibility pneumoniae Test drugs pediatric higher by the determination than addition of
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