タンパク質精製 - ライフサイエンス分野

ライフサイエンス高速冷却遠心機テクニカルノート
タンパク質精製
高速冷却遠心機
Avanti シリーズ
- すべてのステップをこの1台で！ -
タンパク質精製は、X 線結晶構造解析、NMR、質量分析や生化学的アッセイなどの様々なアプリケーション
のために必要です。目的タンパク質を発現させたバクテリア・酵母・培養細胞や動物組織から精製する方法
が一般的となっており、それぞれのタンパク質特有の性質であるアミノ酸組成・サイズ・形状・等電点・溶
解度等の違いから精製を行います。不要なタンパク質のコンタミネーションを起こさずに、大量の機能性タ
ンパク質を精製することが重要となります。多くのタンパク質精製のプロトコールにおいて、遠心機は重要
なステップであり、ほとんどの場合は最初のステップで用いられます。
高速冷却遠心機 Avanti シリーズは、タンパク質精製のどのようなステージにおいても利用できるロータを
揃えています。容量と遠心力の異なる組み合わせを持つ幅広いロータを選択できるため、タンパク質研究ニー
ズの多くを満たすことができます。例えば、細胞のペレッティング、タンパク質沈殿、細胞内小器官やメン
ブレンの精製、密度勾配遠心、タンパク質濃縮などの、様々なプロテオミクスのアプリケーションのための
ロータを自由に選択することができます。
高発現タンパク質の典型的な精製方法
Step 1
サンプル回収と溶解
Step 2
ライセートの清澄化
Step 3
粗精製（沈殿法）
Step 4
2 次精製（クロマトグラフィー法）
Step 5
3 次精製（密度勾配遠心法）
Avanti JXN-26
Step 6
溶媒交換と濃縮
1. サンプル回収と溶解
目的タンパク質を含むサンプル（例えばバクテリア、昆虫細胞、哺乳動物細胞や
その組織など）のペレッティングによる回収は、タンパク質精製の最初のステッ
プとなります。このステップは低速であっても大容量のロータが求められます。
Avanti シリーズでは、このステップに最適な最大 6L の大容量固定角ロータ JLA8.1000 を始め、JLA-9.1000、JLA-10.500 があります。また、JCF-Z 連続遠心ロー
タは、バイオプロセスのセットアップに必要な、より大容量のペレッティングに
適応できます。
2. ライセートの清澄化
細胞のペレッティングと溶解の後、タンパク質精製の 2 つ目の重要なステップ
は、タンパク質成分と細胞由来デブリスからタンパク質を効率的に分離すること
です。高速での清澄化は、このステップで求められ、最適なロータの条件は、高
速で小容量となります。Avanti シリーズでは、このステップに必要な最大 10 万 xg
で使用可能な JA-30.50 を始め、JA-25.50、JA-25.15 といったロータがあります。
3. 粗精製（沈殿法）
硫酸アンモニウムやポリエチレングリコールのような沈殿剤よる遠心沈降ステッ
プは、粗抽出物からのバルクタンパク質の回収や１次精製法として使用されてい
ます。この沈殿剤による分離工程では、中程度のスピードと少から中程度の容量
のロータが必要です。Avanti シリーズでは、このステップに必要なスピードと容
量を兼ね備えた JA-17, JA-18, JA-20 や JLA-16.250 のようなロータがあります。
JLA-10.500 ロータ
4. 2次精製（クロマトグラフィー法）
目的タンパク質の 2 次精製は、通常、アフィニティー、イオン交換、疎水性、サ
イズセパレーションなどの様々なクロマトグラフィー原理に基づいて行われま
す。微量遠心のスピンカラムと 96-well キットにより、素早くシンプルな方法で
リコンビナントタンパク質の少量の精製が行えます。これらのカラムは、クロマ
トグラフィーの条件検討のプレスクリーニングだけでなくハイスループットな
プロテオミクスに最適です。JS-5.3 と JS-5.9 ロータは、96 well フォーマットの
Prep カラムに使用できます。
5. 密度勾配遠心
JS-5.3 ロータ
密度勾配遠心は、タンパク質の第三次精製にしばしば用いられます。JS-24.15 と
JS-24.38 ロータは、レートゾーナルや等密度遠心法に使用されます。
6. 溶媒交換と濃縮
プロテオームアッセイのため、精製したタンパク質の溶媒交換と濃縮は必須の工
程です。溶媒交換や濃縮に使用可能なフィルターベースのカラムが種々あります。
JS-4.0、JS-4.3、JS-5.3 さまざまなサイズに対応するアダプタを持っているため、
濃縮工程に最適です。
6,000
1. サンプル回収
Note: 最高速度と容量は、アダプタ・
遠心ボトル・遠心機モデルに基づい
JLA-8.1000（6 x 1L）
て変化する場合があります。正確な
JLA-9.1000 (4 x 1L)
3,000
JLA-10.500
(6 x 500mL)
情報は、該当するロータまたは遠心
機本体のマニュアルを参照してくだ
3. 粗精製（沈殿法）
さい。
JA-17 (14 x 50mL)
JA-18 (10 x 100mL)
最大容量（mL）
JA-20 (8 x 50mL)
JA-14.50 (16 x 50mL conical)
600
JLA-16.250 (6 x 250mL)
2. ライセートの清澄化
JA-30.50 (8 x 50mL)
400
JA-25.50 (8 x 50mL)
JA-25.15 (24 x 15mL)
4. 2次精製（クロマト
グラフィー法）
5. 密度勾配遠心
JS-5.3
JS-24.15 (6 x 15mL)
JS-24.38 (6 x 38.5mL)
JS-5.9
40
JA-18.1 (24 x 1.8mL)
6.6K
42K
最大遠心力（xg）
109K
最高回転数
（rpm）
最大遠心力
（xg）
最大容量
（mL）
製品番号
JLA-8.1000
8,000
15,970
6,000
363688
￥2,050,000
JLA-9.1000
9,000
16,800
4,000
366754
￥1,300,000
JLA-10.500
10,000
18,600
3,000
369681
￥1,200,000
JCF-Z
20,000
39,900
240 ∼ 1,250
JA-30.50 a
30,000
108,860
400
363421
￥1,630,000
JA-25.50 a
25,000
75,600
400
363055
￥450,000
JA-25.15 a
25,000
74,200
360
363054
￥530,000
JA-17
17,000
39,700
700
369691
￥550,000
JA-18
18,000
47,900
1,000
369679
￥650,000
JA-20
20,000
48,400
400
334831
￥350,000
JA-14.50 a
14,000
35,000
800
B19955
￥615,000
JLA-16.250 a
16,000
38,400
1,500
363934
￥830,000
6,870 / 6,130
2,000 / プレート x24 枚
368690
￥980,000
プレート x10 枚
製品名
価格
（税別）
1. サンプル回収
* 弊社営業までお問い合わせください。
2. ライセートの清澄化
3. 粗精製・濃縮
4. 2 次精製（クロマトグラフィー法）
JS-5.3
JS-5.9
5,300
5,900
6,570
369331
￥1,000,000
18,000
42,100
36
347824
￥650,000
JS-24.15 b
24,000
110,500
90
362396
￥1,550,000
JS-24.38 b
24,000
103,900
231
360743
￥1,550,000
JS-4.0
4,000
4,050
339086
￥850,000
JS-4.3
4,300
JS-5.3
5,300
JA-18.1
5. 3 次精製（密度勾配遠心法）
6. 溶媒交換と濃縮
4,220
6,870 / 6,130
4,000 / プレート x12 枚
3,000 / プレート x12 枚
362734
￥480,000
2,000 / プレート x24 枚
368690
￥980,000
a バイオセーフティ仕様もあります。
b Avanti
HP-30I 使用時は 24,000rpm、Avanti JXN-26 / J-26S では 10,000rpm となります。
＊価格はすべて税別です。価格および仕様は予告なく変更する場合があります。
2014.9（B）

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