動物の組織や培養細胞からの RNA 抽出キット ISOSPIN Cell & Tissue RNA 製品概要 本品は、スピンカラムを用いて動物培養細胞や動物組織から 高純度RNAを抽出するためのキットです。カオトロピックイオン 存在下でRNAがシリカへ吸着する原理を応用し、フェノールや クロロホルムなどを使用しません。 本キットでは、夾雑物を遠心分離により除去する方法とシリカ ゲル膜上でのDNaseⅠ処理を採用しており、約１時間で高純度 のRNAを抽出・精製できます。 高純度RNA 遠 心 分 離 によ る 夾 雑 物 の 除 去 と シリカ メ ンブ レン 上 で の DN as e Ⅰ 処 理 によ り高 純 度 な R NA 抽出が 可能です。 毒性 有機溶媒 フェノール・クロロホルム不要 フ ェ ノ ー ル や ク ロ ロ ホ ル ム な どの 毒 性 有機溶媒 は使用しません。 フィルターによる前処理不要 試料のホモジナイズやろ過を目的としたフィルター 処理を必要としません。本キットは遠心分離により 夾雑物を沈殿にして除去します。 ◀ 左写真 ： 遠心分離（プロトコール★）後の沈殿 RNase free 構成品 DNaseⅠ添付 DN as e Ⅰ （ R N as e f r e e ） が キ ッ トに含 まれてい る た め 、 別 途 購 入 の 必 要 は ありま せ ん 。 プロトコール ISOSPIN Cell & Tissue RNA (50回用) 構成品 容量 PT Extraction Buffer (組織用) 30 ml × 1本 C Extraction Buffer (細胞用) 30 ml × 1本 PT Binding Buffer 40 ml × 1本 PT Wash1 Buffer 40 ml × 1本 PT Wash2 Buffer 40 ml × 1本 DNase I (RNase free) 2,000 units × 1本 10×DNase I Buffer 1 ml × 1本 ddWater (RNase free) 1 ml × 8本 Spin Column 50 本 × 1袋 動物培養細胞 （≦3×106 cells） 動物組織 （≦10 mg) ( ) サンプルを溶解 動物培養細胞： C Extraction Buffer 動物組織： PT Extraction Buffer 遠心分離（夾雑物の除去）★ 上清を回収 メンブレンにRNAを吸着 洗浄 Spin Columnの特長 750μl 添加しても余裕の容積 本品に採用されているスピンカラムは、自社開発 により従来品よりもカラム容量を拡大（最大900μl） しており、O-リングの内側に傾斜を設けているため 試料液がカラムに残ることもありません。 また、こだわった設計によりカラムが大きく持ちやす く、さらにカラム上部を持ってもコレクションチューブ が落ち難くなっています。 シリカメンブレン上でのDNaseⅠ処理 洗浄 RNAの溶出 製品の詳細情報はこちら ▶ ISOSPIN Cell & Tissue RNA http://www.nippongene.com/siyaku/ 実 験 例 マウス各種組織からのR NA抽出 10 mgのマウス各種組織（脳、肝臓、腎臓、精巣）からISOSPIN Cell & Tissue RNAとA社製品を用いてRNA抽出を行った。抽出したRNAは、吸光度測定、 電気泳動、リアルタイムPCRで比較を行った。 1 RNA収量の比較 2 RNAの電気泳動による比較 本品とA社製品で抽出したRNAの吸光度測定を行い、収量 および純度を比較した（表1）。 吸光度で定量したRNA量を基に、アプライするRNA量をそろえて電気泳動し バンドの濃さを比較した(図1)。 マウス組織 収量 （μg/mg） 純度 （A260 /A230） 本品 脳 A社 肝臓 A社 本品 A社 本品 腎臓 精巣 A社 本品 A社 本品 脳 0.91 0.16 肝臓 3.59 1.59 腎臓 3.07 0.44 Brain 0.25μg 精巣 1.47 0.41 Liver RNAアプライ量： 0.5μg 脳 1.94 1.01 Kidney 0.5μg 肝臓 2.22 1.87 Testis 0.5μg 1% Agarose S/TAE 腎臓 2.25 1.59 精巣 2.25 1.80 表1. 吸光度測定によるRNA収量・純度の比較 図1. アガロースゲル電気泳動結果 [ 結果 ] 本品で抽出したRNAの方が収量が多く、A260/230比 が1.8以上と高純度であった。 [ 結果 ] 本品では、18S、28S rRNAのバンドが明瞭に確認できた。A社製品 ではバンドが薄く、吸光度(OD260 nm)に影響する不純物残留の可能性が 考えられた。 3 リアルタイムPCRによるRNAの品質評価 吸光度によって定量したRNA 250 ngを鋳型に、GeneAce Reverse Transcriptase（Code No.316-08151）とoligo dTを用いて逆転写を行った。合成 されたcDNAの1/20量を鋳型にGeneAce SYBR ®qPCR MixαLow ROX（Code No.316-07693）を用いてリアルタイムPCRを行い、Ct値（一定の増幅 産物量になるサイクル数）の比較を行った(図2)。 脳 本品 肝臓 [ 結果 ] 本品で抽出したRNAの方がCt値が低く、増幅効率が高かった。 このことから、本品の方が高純度のRNAを抽出できたことが 示唆された。 腎臓 精巣 脳 A社 肝臓 腎臓 精巣 25 26 27 28 29 30 31 32 (Ct値) 図2. リアルタイムPCRによるCt値の比較 【キット内容】 Code No. 製品名 用途 容量 希望納入価格（税別） 314-08211 ISOSPIN Cell & Tissue RNA 動物組織や培養細胞からのRNA抽出キット 50 回用 ￥27,000 【関連製品 - ISOSPINシリーズ-】 310-08171 ISOSPIN Plant RNA 植物組織からのRNA抽出キット 50 回用 ￥32,500 312-08131 ISOSPIN Blood & Plasma DNA 全血、血清、血漿からのDNA抽出キット 50 回用 ￥20,000 318-07991 ISOSPIN Plasmid 大腸菌からのPlasmid DNA抽出キット 100 回用 ￥18,000 311-07981 ISOSPIN Agarose Gel アガロースゲルからの核酸抽出キット 100 回用 ￥19,000 315-08001 ISOSPIN PCR Product PCR産物の精製キット 100 回用 ￥18,000 319-08141 Collection Tube 消耗品 100 回用 ￥8,000
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