一般的研究用試薬 in vitro に推奨されます。 Protector RNase Inhibitor 製品番号 製品番号 3335399 2000 units 3335402 10000 units バージョン 2005 年 12 月 保存温度 -15∼-25℃ 製品構成 バイアル Protector RNase Inhibitor （40 ユニット/μl） 組成 ・50μl（2000 ユニット包装） ・5×50μl（10000 ユニット包装） 保存バッファー：20 mM Hepes-KOH, 50 mM KCl, 8 mM dithiothreitol, 50% glycerol (v/v), pH approx. 7.6（4℃） 保存と安定性 未開封のキットは、-15∼-25℃で保存した場合、ラベルに記載の期限まで安定です。 アプリケーション Protector RNase Inhibitor は様々な RNase を不活化します。 ・RNase A ・RNase B ・RNase T2 Protector RNase Inhibitor は、RNase が問題となる様々なアプリケーションにおいて未然 に RNase による分解を防ぎます。 ・cDNA 合成反応や in vitro 転写/翻訳反応中の mRNA を保護 ・in vitro ウイルス複製中のウイルス RNA の保護 ・RNA 抽出精製中の RNA の保護 ・RNase プロテクションアッセイ ・RNase-free 抗体の調製 Protector RNase Inhibitor は、RNA を調製・分析する為の一般的な酵素反応を妨害しませ ん。 アプリケーション 製品 RT-PCR Transcriptor 1st Strand cDNA Synthesis Kit Taq DNA Polymerase FastStart Taq DNA Polymerase Expand High Fidelity PCR System Titan One Tube RT-PCR System cDNA 合成 Transcriptor 1st Strand cDNA Synthesis Kit リアルタイム定量 PCR LightCycler 試薬/キット in vitro 転写/翻訳 T3/T7/SP6 RNA Polymerase 使用方法 使用濃度 下表のとおり、適切な濃度に調整します。 1 ステップ RT-PCR 5∼10 ユニット 2 ステップ RT-PCR 25∼50 ユニット in vitro 転写 20 ユニット RNase コンタミネーションの可能性がある場合、高い濃度で Protector RNase Inhibitor を使用することもできます。Protector RNase Inhibitor が目的の反応を阻害する事はあ りません（上述の 16 倍の濃度で Protector RNase Inhibitor を使用しても RT-PCR を阻害 しない事が検証されています）。 追加情報 由来 ラット肺：E. coli に組み替えて発現させています。 保存バッファー 20 mM Hepes-KOH, 50 mM KCl, 8 mM dithiothreitol, 50% glycerol (v/v), pH approx. 7.6（4℃） 不活化 簡単な変性条件（65℃に加熱）で Protector RNase Inhibitor は不活化します。 製品特徴 活性容量 分子量 精製度（SDS-PAGE） バイオバーデン DNA 含有率 活性 pH 範囲 等電点 活性温度範囲 リファレンス 1 Blackburn, P. (1979) Ribonuclease inhibitor from human placenta: rapid purification and assay. J. Biol. Chem. 254, 12484-12493. 2 Protector RNase Inhibitor Enhance Protection of RNA Against Degradation (2002) Biochemica 4, 29. 3 Finnegan et al (2004). Detection and strain differentiation of European bat lyssaviruses using in situ hybridisation. Journal of Virological Methods 121, 223?229. 4 Swayze et al. (2004) Modulation of dopamine mediated phosphorylation of AMPA receptors by PSD-95 andAKAP79/150. Neuropharmacology 47 764?778. 品質管理 各 Protector RNase Inhibitor は、Titan One Tube RT-PCR Kit と LightCycler DPD Kit* で機能検証を行っています。Protector RNase Inhibitor は下記の活性のコンタミネーシ ョンについて検証されています。 検証用バッファー：50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 0.1 mM EDTA, 7 mM βMercaptoethanol; pH 7.5（37℃） エンドヌクレアーゼ λDNA の Eco RI/HindⅢ断片の 1μg を Protector RNase Inhibitor と共に 50μl の検証用 バッファー中で 37℃で 1 時間インキュベートします。バンドパターンは変わりません。 ニッキング活性 1μg のスーパーコイル pBR322 DNA を Protector RNase Inhibitor と共に 50μl の検証用 バッファー中で 37℃で 1 時間インキュベートします。スーパーコイル DNA に緩みはありま せん。 リボヌクレアーゼ（1） 1μg の MS2 RNA を Protector RNase Inhibitor と共に 50μl の検証用バッファー中で 37℃ で 1 時間インキュベートします。MS2 RNA に分解は見られません。 リボヌクレアーゼ（2） 1μgのMS2 RNAをProtector RNase Inhibitorと共に50μlの検証用バッファー中で37℃で1 時間インキュベートし、その後65℃で10分間インキュベートします。MS2 RNAに分解は見ら れません。 関連製品 製品名 Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit First Strand cDNA Synthesis Kit cDNA Synthesis System C. therm Polymerase One-Step RT-PCR Systeme Titan One Tube RT-PCR Kit Titan One Tube RT-PCR System Transcriptor Reverse Transcriptase Reverse Transcriptase M-MuLV Expand Reverse Transcriptase Reverse Transcriptase AMV in vitro 転写 SP6 RNA Polymerase T7 RNA Polymerase T3 RNA Polymerase 40 ユニット/μl 約 50 kDa 95%以上（単一バンドが可視化される） 50 cfu/ml 以下 100 pg/mg 以下 pH 5.0∼pH 9.0 pH 4.5 +25∼+55℃（60℃でも部分的活性はあります） ユニット分析 Protector RNase Inhibitor の 1 ユニットは、5 ng の RNase A 活性の 50%を阻害するのに 必要なタンパク質量として定義されます。活性は Blackbum[1]に従って、cyclic cytidine-2':3'-monophosphoric acid の加水分解の阻害能として測定されます。分析条件 下で、200 ユニットの Protector RNase Inhibitor は、1μg の RNase A 活性の 50%を阻害 します。 SP6/T7 Transcription Kit DIG RNA Labeling Kit その他 RNase RNase, DNase-free RNase A RNase H RNase T1 r 包装単位 50 回反応 製品番号 4379012 30 回反応 10 回反応 50 回反応 250 回反応 50 回反応 25 回反応 100 回反応 250 ユニット 500 ユニット 2000 ユニット （4×500 ユニット） 500 ユニット 1000 ユニット 5000 ユニット 500 ユニット 1000 ユニット 1483188 1117831 2016338 20116346 1939823 1888382 1855476 3531317 3531295 3531287 1000 ユニット 5000 ユニット 1000 ユニット 5000 ユニット 1000 ユニット 5000 ユニット 1 キット 2×10 回反応分 810274 1487671 881767 881775 1031163 1031171 999644 1175025 100 mg 500 mg 500μg 25 mg 100 mg 25 ユニット 100 ユニット 100000 ユニット 500000 ユニット 109126 109134 1119915 109142 109169 786349 786357 109193 109207 ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社 〒105-0014 東京都港区芝 2 丁目 6 番 1 号 www.roche-applied-science.com TEL. No.：03-5443-5287 FAX. No.：03-5443-7098 E-Mail：[email protected] 本製品能書（英語版）は下記 URL よりご覧頂けます。 http://www.roche-applied-science.com/pack-insert/3335399a.pdf 1062603 1785826 1785834 1495062 109118
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