プロトコル：（詳細は通知本文ご参照） 厚生労働省 通知食安発 0816 第 2 号 総アフラトキシンの試験法 厚生労働省医薬食品局食品安全部基準審査課 AflatestWB(VICAM 社製)、UVCRBox(明新ジャパン製)、PHRED(Aura Industriest 社製)使用できると記載あり 香辛料(唐辛子、パプリカ等)や加工食品 香辛料、カカオ豆や加工食品 多機能カラムでは精製が不十分な試料 多機能カラムでは精製が不十分な試料 試料５０ｇを用意 試料５０ｇを用意 ← 塩化ナトリウム５ｇ ← メタノール：水（４：１） ← *上澄が２層に分離する食品おいては ２００ｍL ２００ｍL ブレンド５分または振動 ← ← アセトニトリル：水(９：１) アセトニトリル：水：メタノール(６：４：１) → 濾過（Whatman No.4）または遠心分離 → ろ液 10.0ｍＬを取る ろ液 10.0ｍＬを取る （上澄液） （上澄液） 水で希釈 ２∼４％（W/V）Tween20 で希釈 ← 全量５０ｍＬとするよく混合後 → ガラスフィルターで濾過 希釈試料１０．０ｍＬをカラムに 希釈試料１０．０ｍＬをカラムに 注入する（試料０．５ｇ相当） 注入する（試料０．５ｇ相当） ＡｆｌａＴｅｓｔＷＢ（ＶＩＣＡＭ社） ＡｆｌａＴｅｓｔＷＢ（ＶＩＣＡＭ社） １−２滴／秒で流出 １−２滴／秒で流出 洗 浄 洗 浄 10mL の水で洗浄３回 抗体強化型 10mL 以上の PBS-0.01％(W/V)Tween20 及び 10mL の水で洗浄３回 溶 出 溶 ← アセトニトリル１ｍＬ後、 出 → （５分間放置する） PR 法を選定の場合は、 再度アセトニトリル１ｍＬ×２回 ← 窒素気流を用いて行う 溶媒を除去 AflatestWB-SR ホワイトペッパー ブラックペッパー ガラムマサラ スターアニス ターメリック ナツメグ カカオ豆 ココア等 非常に良い結果が 認められています。 事前に UVCR BOX 又は PHRED を HPLC と接続 → し、回収した溶出液（１：１）に水を加え、混合しま 溶媒を除去 す。この混合液の 20∼100μL を HPLC に注入し ます。 ＴＦＡ法、ＰＲ法など の方法を選んで測定 ＨＰＬＣによる分析 またはＬＣＭＳによる分析 溶出後、再度アセトニトリル及び窒素気流の手 間が不要です。 * ＶＩＣＡＭ社がＰＲ法をお薦めしています。 この方法により、 １、 アフラトキシンのロスが最低限に抑え メタノール：水抽出 ２、 有毒溶媒も使用しない 水希釈、水洗浄：ナッツ類、ハスの実、ハトムギ、乾燥イチジク、生コーヒー豆 ３、 経費及び時間が節約できる 水希釈、ＰＢＳ−0.01％（Ｗ/Ｖ）と Tween20 及び水洗浄：トウガラシ、パプリカ ４、 誘導体化の手順を行うことがない 2％（Ｗ/Ｖ）と Tween20 希釈、ＰＢＳ−0.01％（Ｗ/Ｖ）と Tween20 及び水洗浄：ターメリック 2％（Ｗ/Ｖ）と Tween20 希釈、ＰＢＳ−0.01％（Ｗ/Ｖ）と Tween20 及び水洗浄：コーショウ アセトニトリル：メタノール：水抽出 ＰＢＳ−0.01％（Ｗ/Ｖ）Tween20 希釈、ＰＢＳ−0.01％（Ｗ/Ｖ）と Tween20 及び水洗浄：カカオ豆、チョコレート 2％（Ｗ/Ｖ）と Tween20 希釈、ＰＢＳ−0.01％（Ｗ/Ｖ）と Tween20 及び水洗浄：綿実、ゴマ 4％（Ｗ/Ｖ）と Tween20 希釈、ＰＢＳ−0.01％（Ｗ/Ｖ）と Tween20 及び水洗浄：ナツメグ * 食安発 0816 第 2 号Ⅱの妥当性評価の方法についてはＶＩＣＡＭ社のインストラクション・マニュアルでご確認ください。 * 香辛料等での低回収率の改善をお求めになる方にはアフラテストＷＢ−ＳＲをお薦め致します。
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