第１回 臓器移植 臨床・検査共同フォーラム A.6「LABScreen Single Antigen,C1qScreen」 東京女子医科大学 中央検査部 移植関連検査室 石塚 敏 利益相反の有無：無 ※この講演に関連し、開示すべきCOI関係にある企業などはありません。 C1qScreen (補体結合性のある抗HLA抗体検出試薬) • LAB Screen Mixed • LAB Screen PRA • LAB Screen Single Antigen, Supplement 原理 LABScreen Single-IgG C1qScreen （補体結合性抗HLA抗体） F(ab')2 anti-human IgG-PE 抗HLA抗体 HLA抗原 補体結合性抗HLA抗体 C1q溶液 HLA抗原 ポリスチレンビーズ ポリスチレンビーズ (直径5.6μm) (直径5.6μm) IgG1・IgG2・IgG3・IgG4抗体 anti-C1q antibody-PE IgG1・IgG3・IgM抗体 健常者の末梢血液中のIgG サブクラス 健常者の末梢血液中の割合(%) 補体活性化能 IgG1 ：65%程度 ＋＋＋ IgG2 ：25%程度 ＋ IgG3 ： 7% 程度 ＋＋＋ IgG4 ： 3% 程度 － LABScreen Single-IgG Recipient Serum20μℓ + HLA-ClassⅠまたはⅡ LABScreen Single beads 5μℓ C1qScreen （補体結合性抗HLA抗体） Recipient Serum40μℓ, 56℃30分間インキュベーション 室温,30分間インキュベーション Recipient Serum5μℓ + C1q溶液5μℓ HLA-ClassⅠまたはⅡ LABScreen Single beads 5μℓ 20,000G,2分間遠心,3回洗浄 室温,20分間インキュベーション PE-conjugated Goat anti-human IgG 100μℓ PE-conjugated anti-C1q antibody5μℓ 室温,暗所30分間インキュベーション 室温,暗所20分間インキュベーション 20,000G,2分間遠心,2回洗浄 20,000G,2分間遠心,1回洗浄 Luminex analysis Luminex analysis LABScreen Single-IgGとC1qScreenの基礎的検討 LABScreen Single-IgG Normalized MFI C1qScreen CDC-XM CDC-XM Normalized MFI Twarm(%) Bwarm(%) 性別 年齢 FCXM-IgG 男 53 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + B61 B7 B60 A33 A2 DR14 DR13 DR8 A26 B61 DR8 DQ6 DQ4 DQ8 DQ9 DQ4 DQ6 DR9 DR4 DR12 DR13 DQ7 DQ6 DQ4 13706 12700 12166 11275 12846 13901 9346 8157 8752 7277 12987 3354 8528 9461 10157 12921 8450 7702 4843 4312 5653 5855 3234 2855 2505 20740 1745 1906 20636 13520 13678 7082 - - 100 100 100 20 10 100 100 50 20 - + DQ8 2812 - - - 男 51 男 女 48 61 男 女 女 68 36 47 女 58 男 女 女 47 47 46 性別 年齢 FCXM-IgG 女 女 女 61 44 54 女 48 男 19 女 女 62 36 女 64 男 46 男 51 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + LABScreen Single-IgG Normalized MFI B44 B61 B48 B44 B51 B52 B62 A2 DR8 B54 B61 B62 B44 B13 DR9 DR12 DR1 B61 B35 B44 B39 B35 DR9 DR1 DR15 A33 DR12 5147 8871 5467 5242 14258 13767 12915 6644 11939 5085 16059 11881 16386 11538 20018 15180 17229 13636 12813 9065 7356 6538 10731 10452 9579 8204 9795 C1qScreen CDC-XM CDC-XM Normalized MFI Twarm(%) Bwarm(%) 7331 771 4515 4839 4209 2227 12805 12805 17792 14699 18547 7415 3391 9579 15047 16889 100 100 50 100 100 100 - 100 20 20 80 100 100 100 100 80 100 100 100 100 100 100 100 20 ヒトリンパ球を使用する検査 FCXM-IgG ≒ FITC-conjugated Goat anti-human IgG CDC-XM ウサギ補体 精製HLA分子を使用する検査 LABScreen Single-IgG PE-conjugated Goat anti-human IgG ≒ LABScreen Single-C1qScreen PE-conjugated anti-C1q antibody 今回実施したQCデーター LABScreen single-IgG B*51:01 Normalized MFI 573.26 LABScreen single-C1qScreen FlowPRA Screening-IgG LABScreen single-IgG DRB1*04:04 Normalized MFI 9210.68 DRB1*04:01 Normalized MFI 8807.54 DRB1*04:02 Normalized MFI 8537.71 DRB1*04:05 Normalized MFI 7491.87 DRB1*04:03 Normalized MFI 7161.73 LABScreen single-C1qScreen CDC-XM陰性
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