第14回 HLAQCワークショップ 抗体部門 WAKFlow HLA抗体(MR) ICFA法 東京都赤十字血液センター 関根 みゆき 表 1 参加施設と試薬ロット 使用試薬 Lot ラボコード class I class II 22S05 K001 J002 22S09 J002 K001 22S14 K001 K001 22S16 J002 J002 22S17 K001 J002 22S21 K001 NT 22S24 J002 W0808D 22S30 J002 K001 22S40 J002 NT 第13回 HLAQCワークショップ class Ⅰ（9施設）、class Ⅱ（8施設） 表 2 血清処理試薬使用の有無 HLAクラス I 22S05 2201 2202 2203 2204 2201 2202 2203 2204 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ NT NT ○ 22S09 22S14 HLAクラス II ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ 22S16 22S17 ○ 22S21 ○ 22S24 ○ ○ NT NT ○ 22S30 ○ ○ ○ ○ NT ○ ○ ○ 22S40 ○ ○ ○ ○ NT NT NT NT 図 1 バックグラウンドビーズと陽性コントロールビーズの反応性 （WAKFlow HLA抗体クラスⅠ（MR））：陰性対照血清 バックグラウンドビーズ 陽性コントロールビーズ 4000 25000 20000 3000 15000 2000 10000 1000 5000 0 0 バックグラウンドビーズ 陽性コントロールビーズ 送付されたすべてのCSVファイルを解 析に使用した。 施設コード+使用試薬ロットで表示 -Preは血清処理試薬使用 図 2 バックグラウンドビーズと陽性コントロールビーズの反応性 （WAKFlow HLA抗体クラスⅠ（MR））：SH2201 バックグラウンドビーズ 陽性コントロールビーズ 1200 15000 1000 800 10000 600 400 5000 200 0 0 バックグラウンドビーズ 施設コード+使用試薬ロットで表示 -Preは血清処理試薬使用 陽性コントロールビーズ 図 3 各ビーズの反応性（WAKFlow HLA抗体クラスⅠ（MR））：SH2201 ロットごとの平均値 a. バックグラウンドビーズ(BB)と陽性コントロールビーズ(PB)の反応性 d. Index 計算式 X HLA- (N HLA- N BB) * Index = X BB N BB X BB BB PB b. 各HLAビーズのRaw data c.各HLAビーズのIndex XHLA : 検体XのHLAビーズの蛍光強度 XBB : 検体Xのバックグラウンドビーズの蛍光強度 NHLA : 陰性対照血清のHLAビーズの蛍光強度 NBB : 陰性対照血清のバックグラウンドビーズの蛍光強度 図 4 WAKFlow HLA抗体（MR）の結果のScore化 Score0 Index値／cutoff値＝ 0 Score1 0 ＜ Index値／cutoff値＜ 0.8 Score2 0.8 ≦ Index値／cutoff値＜ 1.0 Score4 1.0 ≦ Index値／cutoff値＜ 1.5 Score6 1.5 ≦ Index値／cutoff値＜ 2.5 Score8 2.5≦ Index値／cutoff値 図 5 セログラフ（WAKFlow HLA抗体クラスⅠ（MR））:SH2201 x 100 (データ数 = 324 ) 0 A24 A33 B51 B52 B35 B75 B62 B71 B13 B27 B37 B47 B59 B56 B38 B44 B58 101 SH2201 1 2 3 図 6 セログラフ（WAKFlow HLA抗体クラスⅠ（MR））:SH2202 a. 血清処理試薬使用 x 100 (データ数 = 324 ) 0 1 2 3 B62 B75 B35 B38 102 SH2202 b. 血清処理試薬未使用 x 10 (データ数 = 180 ) 0 B62 B75 B35 B38 101 SH2202 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 図 7 セログラフ（WAKFlow HLA抗体クラスⅠ（MR））:SH2202 a. Lot. J002（血清処理試薬使用） x 10 (データ数 = 180 ) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 B62 表 3 LABScreen Single Antigen 結果 :SH2202 抗原 B75 B35 B62 LS-SA *(BNV)** B*15:01 15,553 B*15:02 15,779 B*15:11 8,098 B*35:01 3,996 B38 102 SH2202 B75 b. Lot. K001（血清処理試薬使用） x 10 (データ数 = 144 ) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 B35 B62 B75 B35 B38 102 SH2202 * LS-SA (LABScreen Single Antigen) **BNV (baseline normalized value) 図 8 セログラフ（WAKFlow HLA抗体クラスⅠ（MR））:SH2203 x 100 (データ数 = 324 ) 0 1 2 3 A31 A30 B38 103 SH2203 表 4 LABScreen Single Antigen 結果:SH2203 抗原 LS-SA *(BNV)** A*30:01 14,094 A*30:02 9,194 A*31:01 13,878 A30 A31 WAK-MR*** LCT AHG-LCT LIFT ICFA 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陽性 陰性 陰性 陰性 陰性 *LS-SA (LABScreen Single Antigen) **BNV (baseline normalized value) ***WAK-MR(WAKFlow HLA抗体クラスⅠ(MR)) 図 9 セログラフ（WAKFlow HLA抗体クラスⅠ（MR））:SH2204 a. HLA-B座抗原指定で作成 x 100 (データ数 = 324 ) 0 1 2 3 表 5 LABScreen Single Antigen 結果 :SH2204 B44 抗原 B13 LS-SA *(BNV)** B75 Cw2 B61 C*02:02 14,686 C*03:02 12,012 C*03:04 14,314 Cw9 C*03:03 14,147 Cw6 C*06:02 14,244 Cw15 C*15:02 11,837 Cw4 C*04:01 4,701 Cw12 C*12:03 4,109 104 SH2204 Cw10 b. LABScreen Single Antigen で検出された HLA-C座の抗体特異性を基に作成 (データ数 = 324 ) 0 1 2 x 100 3 Cw*10 Cw*9 Cw*14 Cw*6 Cw*4 Cw*15 Cw*2 Cw*12 104 SH2204 * LS-SA (LABScreen Single Antigen) **BNV (baseline normalized value) 図 10 セログラフ（WAKFlow HLA抗体クラスⅡ（MR））:SH2202 a. HLA-DR座抗原指定 (データ数 = 224 ) 0 x 100 1 2 DR3 DR11 DR12 DR13 DR14 DR1403 DR4.2 DR9 DR8.2 102 SH2202 b. HLA-DQ座抗原指定 (データ数 = 224 ) x 100 0 DQ7 DQ8 DQ9 DQ2 DQ4 102 SH2202 1 2 表 6 ICFA法参加施設と測定パネル数 SH2201 SH2202 SH2203 SH2204 22S02 4(12) NT NT NT 22S05 7 17 16 16 22S09 5 NT NT NT 22S14 3 3 3 3 22S16 4 4 4 4 22S17 8 NT NT NT 22S21 17 22 18 19 22S30 8 9 7 7 第13回 HLAQCワークショップ 5施設（クロスマッチのみ3施設） （ ）内：自家調整試薬使用 （ ）内以外、WAKFlow HLA抗体クラスⅠ（ICFA）使用 赤字：クロスマッチのみ参加 図 11 ICFA法の結果のScore化 (cut off = 2) Score0 Index値／cutoff値＝ 0 Score1 0 ＜ Index値／cutoff値＜ 0.8 Score2 0.8 ≦ Index値／cutoff値＜ 1.0 Score4 1.0 ≦ Index値／cutoff値＜ 1.5 Score6 1.5 ≦ Index値／cutoff値＜ 2.5 Score8 2.5≦ Index値／cutoff値 図 12 セログラフ（ICFA法）:SH2201 x 10 (データ数 = 56 ) 0 A24 A33 B51 B52 B62 B15 B75 B71 B35 B13 B27 B37 B59 B54 B56 B58 B44 101 SH2201 1 2 3 4 5 図 13 セログラフ（ICFA法）:SH2202 x 10 (データ数 = 55 ) 0 1 2 3 4 5 B62 B15 B75 101 SH2202 表 7 LABScreen Single Antigen 結果:SH2202 抗原 B62 LS-SA *(BNV)** B*15:01 15,553 B*15:02 15,779 B*15:11 8,098 B75 * LS-SA (LABScreen Single Antigen) **BNV (baseline normalized value) 表 8 HLA-A30,31抗原を保有するパネルの反応性（ICFA法）:SH2203 HLA Type Median 施設 コード A1 A2 B1 B2 5 2 31 35 61 9 81 100 9,538 1.0 1 - 5 14 2 11 30 31 13 7 48 62 6 4 7 21 33 30 48 10,010 14,363 1.1 1.0 1 1 - 16 31 61 55 1 10 33 37 14,369 1.1 1 - 16 31 33 62 44 1 14 30 39 14,200 1.1 1 - 16 21 2 31 31 62 51 61 10 14 14 43 14 58 17 15,906 10,210 1.2 1.2 1 1 - 21 1 31 37 61 6 10 10 13 11,052 0.8 1 - 21 2 31 35 51 3 11 15 9,874 1.2 1 - 21 21 24 24 31 31 51 54 52 67 10 1 7 8 20 10 28 10,093 11,660 0.9 1.0 1 1 - 21 26 31 62 71 4 8 8 15 9,631 0.8 1 - 30 1 31 60 61 10 37 45 16,187 1.2 1 - 30 30 2 24 31 31 35 52 46 75 1 9 9 12 34 47 48 44 16,271 17,708 1.1 1.5 1 1 - Cw1 Cw2 HLA BB PB Index Score Judge 表 9 LABScreen Single Antigen 結果:SH2203 抗原 LS-SA *(BNV)** A*30:01 14,094 A*30:02 9,194 A30 A31 A*31:01 13,878 WAK-MR*** LCT AHG-LCT LIFT ICFA 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陽性 陰性 陰性 陰性 陰性 *LS-SA (LABScreen Single Antigen) **BNV (baseline normalized value) ***WAK-MR(WAKFlow HLA抗体クラスⅠ(MR)) 図 14 セログラフ（ICFA法）:SH2204 表 11 LABScreen Single Antigen 結果 :SH2204 x 10 (データ数 = 49 ) 0 1 2 3 4 抗原 LS-SA *(BNV)** Cw9 Cw2 Cw10 Cw3 C*02:02 14,686 C*03:02 12,012 C*03:04 14,314 Cw9 C*03:03 14,147 Cw6 C*06:02 14,244 Cw15 C*15:02 11,837 Cw4 C*04:01 4,701 Cw12 C*12:03 4,109 Cw14 C*14:02 0 Cw10 Cw4 Cw6 Cw14 Cw15 101 SH2204 表 10 HLA-Cw14抗原を保有するパネルの反応性（ICFA法）:SH2204 HLA Type 施設 コード A1 A2 B1 21 21 21 16 16 16 21 30 2 33 33 2 24 31 2 24 31 51 44 44 62 15 62 44 44 31 33 33 33 33 B2 61 44 44 46 46 Median Cw1 Cw2 14 14 14 10 4 1 1 1 14 14 14 14 14 HLA 22 25 42 445 172 259 43 102 BB 38 30 38 199 70 76 161 81 PB 9,575 9,083 9,594 14,813 14,676 14,952 9,576 17,159 Index Score Judge 0.9 1.3 1.4 2.7 2.3 3.8 1.1 1.7 1 1 1 4 4 6 1 2 + + + - * LS-SA (LABScreen Single Antigen) **BNV (baseline normalized value)
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