imagination at work Dharmacon のデザイン済 guide RNA で 効率的、特異的に遺伝子をノックアウト Edit-R CRISPR-Cas9 ゲノム編集試薬 NEW ● ヒト・マウス・ラットの遺伝子をほぼ完全 に網羅したデザイン済み guide RNA ● Cas9 ヌクレアーゼを発現駆動するプロ モーターを細胞に合わせて 6 種類から選択 ● 実験系に合わせてワークフローを選択 − 化学合成品 or レンチウイルス ● いつでもすぐに Web から注文可能＊ ＊ あらかじめユーザー登録が必要です。詳しくは裏表紙をご覧ください。 CRISPR-Cas9 システムによるゲノム編集を構成する 2 つの コンポーネント、デザイン済 guide RNA および Cas9 ヌクレ アーゼ発現用製品をご用意しています。独自の配列デザイン アルゴリズムにより設計した guide RNA が効率的かつ特異 的な遺伝子ノックアウトを実現します。 取扱店 www.gelifesciences.co.jp ゲノム編集のメカニズム Cas9 ヌクレアーゼが、ターゲット配列に相補的な guide RNA（ A CRISPR RNA（crRNA）: trans-activating CRISPR RNA (tracrRNA) ハイブリッドあるいは B single guide RNA（sgRNA））と複合体を形成してゲノム DNA のターゲット配列を認識し、PAM 配列より上流 の二本鎖 DNA を切断します。切断されたゲノムは修復機構が働いて再結合しますが、切断されたゲノムの末端は高頻度で欠損あるい は変異します。したがって再結合しても DNA のフレームがシフトし、切断箇所の遺伝子がノックアウトされます。 A crRNA: tracrRNAハイブリッドを用いる方法 B single guide RNAを用いる方法 PAM Genomic DNA Genomic DNA PAM Cas9 Nuclease Cas9 Nuclease crRNA 3' 5' 3' 5' tracrRNA 5' 3' sgRNA Edit-R ゲノム編集ワークフロー＊ DNA フリーの実験を行いたい場合 プロモーターを選択したい場合 Edit-R Cas9 Nuclease Expression plasmid 4 Cas9 Edit-R predesigned crRNA 1 ＋ Edit-R tracrRNA 2 Cas9 mRNA 5 AAAA Cas9ヌクレアーゼ発現用プラス ミドおよびデザイン済みcrRNA、 tracrRNAをDharmaFECT Duo 8 を用いて細胞に共導入 （コトランスフェクション） Cas9ヌクレアーゼ発現用mRNA およびデ ザイン済 み c r R N A 、 tracrRNAをDharmaFECT Duo 8 を用いて細胞に共導入 （コトランスフェクション） FACS 法あるいは抗生物質選択によ り、Cas9 ヌクレアーゼ発現用プラス ミドの導入された細胞を濃縮 ゲノム編集の確認 ＊ 各試薬名の後に付いた番号は、4 ∼ 7 ページに記載の各製品名の番号に対応します。 2 ■ Edit-R CRISPR-Cas9 お客さまの声 国立がん研究センター 分子診断・個別化医療開発グループ ゲノム生物学研究分野 荻原 秀明 様 ターゲットごとにベクターを作る必要なし！ がん細胞において、変異頻度の高い遺伝子に着目し、合成致死遺伝子 の探索をするという仕事をしています。そこで、変異頻度の高い遺伝子 を人工的にノックアウトして、スクリーニングをかけることにしました。そ こで、今回はじめてゲノム編集の技術を採用することとなりました。 製品選定の際、他社のゲノム編集製品では、ひとつひとつベクターを、 ターゲットごとに作らなければいけないところが、価格面でも、作業量 の上でもネックになっていました。その矢先に GE ヘルスケアの営業担当 者より Dharmacon のゲノム編集製品の紹介がタイムリーにありました。 Dharmacon の Edit-R CRISPR-Cas9 プラットフォームは、ガイド RNA 発現ベクターをクローニングする必要がありません。 すぐにトランスフェクション可能な DNA および RNA コンポーネントが含まれており、トランスフェクション操作だけでノックア ウトできるところがポイントとのことでした。他社と比較すると価格もリーズナブルであるというところ、Web で簡単に設計 できると聞き、魅力的な製品であると感じ、採用しました。 おかげで、紹介いただいてから 1 か月もしないうちに実験に入ることができました。現在作成したノックアウト細胞を利用し、 実験を進めているところです。 通常の方法ではトランスフェクションが難しい場合 Edit-R predesigned crRNA 1 Cas9 ＋ Edit-R tracrRNA 2 Edit-R Lentiviral Cas9 Nuclease 6 Cas9 ヌクレアーゼ 発現用レンチウイルス 粒子を細胞に感染 デザイン済み crRNA、tracrRNA を DharmaFECT 1 ∼ 4 7 を用いて細胞に トランスフェクション 抗生物質（blasticidin）選択によ り、Lentiviral Cas9 Nuclease の 導入された細胞を濃縮 sgRNA Edit-R predesigned Lentiviral sgRNA 3 デザイン済み sgRNA 発現用レンチウイルス 粒子を細胞に感染 抗生物質（puromycin）選択により、 Lentiviral sgRNA の導入された細胞 を濃縮 および表現型の解析 Edit-R CRISPR-Cas9 ■ 3 guide RNA 1③ Edit-R predesigned crRNA（化学合成） ヒト・マウス・ラットの遺伝子をほぼ完全に網羅したデザイン済み crRNA（化学合成品）です。弊社独自の配列デザインアルゴリズム＊1 に より、遺伝子ノックアウト効率と特異性の高い crRNA が遺伝子ごとに最大 5 個デザインされています。Edit-R tracrRNA と組合せて使用 します。 ■ご注文情報 製品名 Edit-R Synthetic Human/Mouse/Rat crRNA ＊1 包装 コード番号 5 nmol 10 nmol CR-XXXXXX-XX-0005 CR-XXXXXX-XX-0010 価格（円） 32,000 41,000 20 nmol CR-XXXXXX-XX-0020 53,000 本アルゴリズムは、単なる二本鎖 DNA 切断ではなく機能的な遺伝子ノックアウトを引き起こす guide RNA 配列を設計するために開発されました。また、本アルゴリズムのア ライメントツールはミスマッチやギャップを確実に検出・除去するため、 オフターゲットを最小限に抑制します。 2③ Edit-R tracrRNA（化学合成） 公開されているS. pyogenes の tracrRNA 配列＊2 を元にした配列を合成後に HPLC で精製した化学合成品です。Edit-R predesigned crRNA と組合せて使用します。複数のほ乳動物細胞において効率的なゲノム編集を実現することを確認しています。 ■ご注文情報 製品名 Edit-R CRISPR-Cas9 Synthetic tracrRNA ＊2 包装 コード番号 価格（円） 5 nmol 20 nmol U-002000-05 U-002000-20 36,000 93,000 50 nmol U-002000-50 161,000 M. Jinek, K. Chylinski, et al. A Programmable Dual-RNA-Guided DNA Endonuclease in Adaptive Bacterial Immunity. Science. 337(6096), 816-821 (2012). 3③ Edit-R predesigned Lentiviral sgRNA（レンチウィルス） ヒト・マウス・ラットの遺伝子をほぼ完全に網羅したデザイン済 み sgRNA 発現用レンチウイルス粒子です。弊社独自の配列デ ザインアルゴリズム＊3 により、遺伝子ノックアウト効率と特異性 の高い sgRNA が遺伝子ごとに最大 10 個デザインされていま す。初代培養細胞や神経細胞といったトランスフェクションの 困難な細胞を用いてゲノム編集を行う場合に最適です。 U6 5' LTR Ψ mCMV RRE sgRNA ベクター中の要素 説明 5' LTR 5' long terminal repeat Psi パッケージングシグナル配列 Rev response element Ψ RRE （完全長ウイルスゲノムのパッケージング効率を向上） U6 sgRNA mCMV Human RNA polymerase III U6 promoter single guide RNA Mouse cytomegalovirus immediate early promoter Puromycin 耐性遺伝子 PuroR PuroR WPRE Edit-R predesigned Lentiviral sgRNA の構造 3' SIN LTR （遺伝子形質導入細胞の選択マーカー） Woodchuck hepatitis posttranscriptional regulatory element（導入遺伝子の発現を促進） 3' 末端の自己不活性化（self inactivating） long terminal repeat WPRE 3' SIN LTR ■ご注文情報 製品名 Edit-R Human/Mouse/Rat Lentiviral sgRNA Set of 3 Edit-R Human/Mouse/Rat Lentiviral sgRNA＊4 ＊3 ＊4 包装 100 µl, 107 TU/ml 200 µl, 107 TU/ml 100 µl, 107 TU/ml 200 µl, 107 TU/ml コード番号 VSG ★ 1014X-XXXXXXXXX VSG ★ 1014X-XXXXXXXXX VSG ★ 101XX-EGXXXXX VSG ★ 101XX-EGXXXXX ★ Human=H、Mouse=M、Rat=R 価格（円） 135,000 171,000 341,000 359,000 本アルゴリズムは、単なる二本鎖 DNA 切断ではなく機能的な遺伝子ノックアウトを引き起こす guide RNA 配列を設計するために開発されました。また、本アルゴリズムのア ライメントツールはミスマッチやギャップを確実に検出・除去するため、 オフターゲットを最小限に抑制します。 お好みのデザイン済み sgRNA 発現用レンチウイルス粒子を 3 つセットでご提供する製品です。 CRISPR RNA Configurator お客さま自身で crRNA あるいは sgRNA を設計・注文いただくウェブツールです。目的のデザイン済み crRNA もしくは sgRNA 製品が ない場合にご利用ください。本ウェブツールを使用せずにお客さま自身で配列設計した crRNA あるいは sgRNA 発現用レンチウイルス をご注文いただくこともできます。詳しくは Web サイトまで。 4 ■ Edit-R CRISPR-Cas9 ゲノム編集スクリーニングライブラリー Edit-R crRNA Library（化学合成） ヒト・マウス用の Edit-R predesigned crRNA を、遺伝子ファミリーやパスウェイごとに分類して 96 ウェルプレートに分注した製品です。 ハイスループットかつ迅速な遺伝子ノックアウト実験を実現します。遺伝子あたり 4 種類のデザイン済み crRNA を含むため、複数のデー タポイントを用いて実験結果の評価を行うことができます。 ※ ご希望の Edit-R predesigned crRNA をプレートに分注した cherry-pick library もご提供しています （詳しくは弊社 Web サイトまで） ■ご注文情報 Edit-R - Phosphatases Edit-R - Ion channels Edit-R - G Protein-Coupled Receptors Edit-R - Proteases Edit-R - Ubiquitin Enzymes Edit-R - Protein Kinases Edit-R - Nuclear Receptors Edit-R - Tyrosine Kinases Edit-R - Deubiquitinating Enzymes Edit-R - Cytokine Receptors Edit-R - Membrane Trafficking Edit-R - Cell Cycle Regulation Edit-R - DNA Damage Response Edit-R - Apoptosis Edit-R - Epigenetics Edit-R - Transcription Factors Human # genes コード番号 (approximate) 247 GC-003700-05 345 GC-003800-05 378 GC-003600-05 473 GC-005100-05 650 GC-006200-05 700 GC-003500-05 52 GC-003400-05 85 GC-003100-05 98 GC-004700-05 116 GC-004000-05 140 GC-000500-05 169 GC-003200-05 240 GC-006000-05 446 GC-003900-05 463 GC-006100-05 1529 GC-005800-05 Mouse # genes コード番号 (approximate) 273 GC-013700-05 340 GC-013800-05 515 GC-013600-05 540 GC-015100-05 591 GC-016200-05 715 GC-013500-05 46 GC-013400-05 85 GC-013100-05 68 GC-014700-05 158 GC-014000-05 113 GC-015500-05 105 GC-013200-05 ー ー ー ー ー ー 1440 GC-015800-05 包装 価格 （円） 0.5 nmol library 0.5 nmol library 0.5 nmol library 0.5 nmol library 0.5 nmol library 0.5 nmol library 0.5 nmol library 0.5 nmol library 0.5 nmol library 0.5 nmol library 0.5 nmol library 0.5 nmol library 0.5 nmol library 0.5 nmol library 0.5 nmol library 0.5 nmol library 問合せ 問合せ 問合せ 問合せ 問合せ 問合せ 問合せ 問合せ 問合せ 問合せ 問合せ 問合せ 問合せ 問合せ 問合せ 問合せ Edit-R Pooled Lentiviral sgRNA Library（レンチウイルスプールドライブラリー） ヒト・マウス・ラット用の Edit-R predesigned Lentiviral sgRNA を、遺伝子ファミリーやパスウェイごとに分類してプールした製品です。 Edit-R Lentiviral Cas9 Nuclease と組合せて使用します。本ライブラリー製品を細胞に感染させて遺伝子を網羅的にノックアウトし、目的 の表現型（特定の選択条件下で生存可能あるいは増殖速度が変化するなどを指標に用いる）を細胞に与える sgRNA 配列をスクリーニン グします。illumina シークエンサーにのみ対応した製品です。 ■ご注文情報 Edit-R Human Lentiviral sgRNA Pooled Screening Libraries 製品名 コード番号 Whole Genome Druggable Genome Protein Kinases GPCRs Phosphatases Ion Channels Proteases Ubiquitin Conjugation DNA Damage Response Epigenetics STE Kinases Cytokine Receptors MAP Kinases Membrane Trafficking Serine Proteases Deubiquitinating Enzymes Calcium Calmod Kinases Cell Cycle Regulation Tyrosine Kinases Nuclear Receptors Apoptosis VSGH11113 VSGH11112 VSGH11105 VSGH11106 VSGH11107 VSGH11108 VSGH11109 VSGH11110 VSGH11114 VSGH11115 VSGH11116 VSGH11117 VSGH11118 VSGH11119 VSGH11120 VSGH11121 VSGH11122 VSGH11123 VSGH11124 VSGH11125 VSGH11126 価格（円） 問合せ 問合せ 2,610,000 1,890,000 1,890,000 1,890,000 1,890,000 1,890,000 1,890,000 1,890,000 1,890,000 1,890,000 1,890,000 1,890,000 1,890,000 1,890,000 1,890,000 1,890,000 1,890,000 1,890,000 1,890,000 ※ ヒト、 マウス、 ラットの各種ライブラリーがございます。詳しくは弊社バイオダイレクトラインまでお問合せください。 ※ 各ライブラリーのクローン数・遺伝子数については弊社バイオダイレクトラインまでお問合せください。 Edit-R CRISPR-Cas9 ■ 5 Cas9 ヌクレアーゼ発現用プラスミド 4③ Edit-R Cas9 Nuclease Expression plasmid （mKate2）搭載タイプおよびPuromycin耐性遺伝子搭載タイプをご用意してお Cas9ヌクレアーゼ発現用プラスミドです。蛍光マーカー り、両者とも、Cas9ヌクレアーゼを発現駆動するプロモーターを、使用する細胞に合わせて6種類から選択可能です。Blasticidin耐性遺 伝子搭載タイプのプラスミドもあります （ヒトCMVプロモーターがCas9ヌクレアーゼの発現を駆動）。 SMARTchoice promoters SMARTchoice promoters hCMV mCMV hEF1α mEF1α PGK CAG mKate2 T2A Cas9 pA AmpRmKate2 SMARTchoice promoters AmpR PuroR hCMV mCMV hEF1α mEF1α PGK CAG T2A PuroR pA ssion Plasmid T2A Cas9 説明 Human cytomegalovirus immediate early promoter Mouse cytomegalovirus immediate early promoter Human elongation factor 1 alpha promoter pA Mouse phosphoglycerate kinase promoter Human cytomegalovirus, CAGR) Expression Plasmid Cas9 (Puro chicken β -actin hybrid promoter Cas9 (mKate2) Expression Plasmid Cas9 hCMV ベクター中の要素 mCMV hEF1α hCMV mEF1α PGK mCMV CAG hEF1 α PuroRPGKT2A Cas9 Cas9 pA AmpR pA 遺伝子形質導入と発現の確認マーカー （mKate2 遺伝子） Puromycin 耐性遺伝子 （遺伝子形質導入細胞の選択マーカー） 2a self-cleaving peptide（自己切断活性を持つ短いペ プチド。mKate2/Puromycin 耐性遺伝子産 物 および Cas9 ヌクレアーゼタンパク質の同時発現を実現） S. pyogenes Cas9 ヌクレアーゼ遺伝子 ウシ成長ホルモン（BGH）ポリアデニル化シグナル アンピシリン耐性遺伝子 Cas9 (Puro ) Expression Plasmid R AmpR Edit-R SMARTCas9 Expression Plasmid の構造 ■ご注文情報 製品名 Edit-R SMARTCas9 Expression Plasmid - mKate2 蛍光マーカー搭載タイプ Edit-R SMARTCas9 Expression Plasmid - Puromycin 耐性遺伝子搭載タイプ Edit-R CRISPR-Cas9 Nuclease Expression Plasmid - Blasticidin 耐性遺伝子搭載タイプ 包装 120 µg 120 µg 120 µg コード番号 U-004X00-120 ＊ U-005X00-120 ＊ U-001000-120 価格（円） 37,000 37,000 37,000 ＊ 選択したプロモーターにより、X には、hCMV=1 mCMV=2 hEF1a=3 mEF1a=4 PGK=5 CAG=5 のいずれかの数字が入ります。 Cas9 ヌクレアーゼ mRNA 5③ Edit-R Cas9 Nuclease mRNA Cas9ヌクレアーゼの一過的な発現用に高度に精製したCas9ヌクレアーゼmRNAです。5'キャップおよび3'ポリA 鎖を持つ安定な分子 です。Edit-R predesigned crRNAおよびEdit-R tracrRNAと共に細胞へ共導入することにより、完全にDNAフリーの系でゲノム編集 実験が可能です。 また、Cas9ヌクレアーゼの一過的な発現はオフターゲットを低減します。 ■ご注文情報 製品名 Edit-R Cas9 Nuclease mRNA 6 ■ Edit-R CRISPR-Cas9 包装 コード番号 価格（円） 20 µg CAS11195 72,000 Cas9 ヌクレアーゼ発現用レンチウイルス 6③ Edit-R Lentiviral Cas9 Nuclease Cas9ヌクレアーゼ発現用レンチウイルス粒子です。Cas9ヌクレアーゼを発現駆動するプロモーターを、使用する細胞に合わせて6種類から選 SMARTchoice promoters 択可能です。初代培養細胞や神経細胞といったトランスフェクションの困難な細胞を用いてゲノム編集を行う場合に最適です。 RRE SV40 ori 説明 5' LTR 5' long terminal repeat Psi パッケージングシグナル配列 Rev response element RRE BlastR T2A Cas9 WPRE Edit-R Lentiviral Cas9 Nuclease AmpR ベクター中の要素 Ψ pUC ori 3' SIN LTR 5' LTR Ψ hCMV mCMV hEF1α mEF1α PGK CAG hCMV mCMV hEF1 α PGK CAG BlastR SV40 pA T2A Edit-R Lentiviral Cas9 Nuclease Plasmid DNA の構造 Cas9 WPRE 3' SIN LTR SV40 pA pUC ori SV40 ori AmpR （完全長ウイルスゲノムのパッケージング効率を向上） Human cytomegalovirus immediate early promoter Mouse cytomegalovirus immediate early promoter Human elongation factor 1 alpha promoter Mouse phosphoglycerate kinase promoter Human cytomegalovirus, chickenβ-actin hybrid promoter Blasticidin耐性遺伝子（遺伝子形質導入細胞の選択マーカー） 2a self-cleaving peptide（ 自己切断活性を持つ短いペプ チド。mKate2/Puromycin 耐性遺伝子産物およびCas9ヌ クレアーゼタンパク質の同時発現を実現） S. pyogenes Cas9 ヌクレアーゼ遺伝子 Woodchuck hepatitis posttranscriptional regulatory element（導入遺伝子の発現を促進） 3' 末端の自己不活性化（self inactivating）long terminal repeat Simian virus 40 ポリアデニル化シグナル pUC 複製起点 Simian virus 40 複製起点 アンピシリン耐性遺伝子 ■ご注文情報 製品名 Edit-R Lentiviral Blast-Cas9 Nuclease Particles Edit-R Lentiviral Blast-Cas9 Nuclease Plasmid DNA＊2 包装 7 50 µl, 10 TU/ml 10 µg コード番号 価格（円） ＊1 VCAS1012X CAS101XX ＊3 108,000 54,000 ＊ 1 選択したプロモーターにより、X には、hCMV=4 mCMV=5 hEF1a=6 mEF1a=7 PGK=8 CAG=9 のいずれかの数字が入ります。 ＊ 2 Edit-R Lentiviral Blast-Cas9 Nuclease Particles の作成（パッケージング）の元となったプラスミド DNA です。Trans-Lentiviral ORF Packaging Kit with Calcium Phosphate（10 反応分）（コード番号：TLP5916）などのパッケージングキットと組合せてご使用ください。 ＊ 3 選択したプロモーターにより、XX には、hCMV=36 mCMV=37 hEF1a=38 mEF1a=39 PGK=40 CAG=41 のいずれかの数字が入ります。 トランスフェクション試薬 7③ DharmaFECT 1 ∼ 4 / 8 ③ DharmaFECT Duo DharmaFECT 1∼4は、細胞にあわせて最適条件で使い分ける4種類の低分子RNA用トランスフェクション試薬です。DharmaFECT 1が 最も汎用性のある処方のトランスフェクション試薬ですが、DharmaFECT 2∼4の使用により、細胞株によっては最も高い導入効率を得 ることができます。DharmaFECT Duoは、低分子RNAとプラスミドDNAを同時に効率よく細胞へ共導入するためのトランスフェクション 試薬です。 ■ご注文情報 製品名 DharmaFECT 1 Transfection Reagent DharmaFECT 2 Transfection Reagent DharmaFECT 3 Transfection Reagent DharmaFECT 4 Transfection Reagent DharmaFECT Set of 4 Transfection Reagents＊4 DharmaFECT Duo Transfection Reagent 包装 コード番号 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml × 4 0.2 ml T-2001-01 T-2002-01 T-2003-01 T-2004-01 T-2005-01 T-2010-01 価格（円） 17,000 17,000 17,000 17,000 65,000 17,000 ＊4 DharmaFECT 1∼4をセットにした製品です。 Edit-R CRISPR-Cas9 ■ 7 ご購入には Dharmacon ユーザー登録が必要です STEP 1 ①登録用紙に入力 STEP 2 代理店営業マンに渡すだけ！ 登録用紙はこちらからダウンロードいただけます。 www.gelifesciences.co.jp ▲ ▲ ▲ ユーザー登録 検索 QRコードも ご利用ください！ ユーザー登録が済んでいれば dharmacon.gelifesciences.com からすぐに注文可能 製品検索・注文のご案内 弊社 Dharmacon 専用 Web サイト dharmacon.gelifesciences.com へアクセスしてください。 Step 1 ターゲット遺伝子情報を入力してください。 ターゲット遺伝子の Genbank accession number、 gene symbol、gene ID のいずれかを、ウェブペー ジの上部にある検索窓（赤枠）に入力して検索 ボタンをクリックしてください。 Step 2 製品群ごとに検索結果をまとめてお知らせ します。 画面は「BRCA1」と入力して検索した結果が表示 された状態です。製品ならびに関連する学術情報 が「遺伝子」のフィールドに表示されます。crRNA/ sgRNA のリンク（赤枠）から各製品リストのページ に移動してください。移動先ページで、各種デザ さら イン済み crRNA/sgRNA の + をクリックすると、 に詳細な製品リストが表示されます。ご希望の製 品をショッピングカートに入れて注文してください。 Dharmacon 日本語 Web サイトはこちら ▲ ▲ ▲ www.gelifesciences.co.jp/dharmacon 8 掲載されている価格は 2015 年 11 月現在の希望小売価格です（消費税は含まれておりません）。 希望小売価格は単なる参考価格であり、弊社販売代理店が自主的に設定する販売価格を何ら拘 束するものではありません。掲載されている製品は試験研究用以外には使用しないでくださ い。掲載されている内容は予告なく変更される場合がありますのであらかじめご了承くださ い。掲載されている社名や製品名は、各社の商標または登録商標です。お問合せに際してお客 さまよりいただいた情報は、お客さまへの回答、弊社サービスの向上、弊社からのご連絡のため に利用させていただく場合があります。 71-3783-01
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