エス・クロン(S-Clone) クローニングメデューム CM-B

** 2012 年 4 月改訂（下線部原料の由来変更）
* 2011 年 4 月改訂（製造販売元の社名変更）
生体外用研究試薬
2010 年 4 月作成
○ 使用例
1. HATセレクション
ミエローマ細胞1に対し、脾細胞5の割合で融合した場合の
HATセレクション、クローニング用無血清培地
エス・クロン(S-Clone)
クローニングメデューム CM-B
一例を示す。
1)
本培地にHAまたはHATを加える。
HATセレクション用培地として用いるときは、ヒポキサンチン、
アミノプテリンを下記の濃度で加える。
ヒポキサンチン100μmol/L（13.6mg/L）
〔開発の経緯及び特徴〕
アミノプテリン0.4μmol/L（0.176mg/L）
エス・クロン（S‐Clone）クローニングメデュームCM‐Bは、マウス
本培地には、チミジンがあらかじめ加えられているので、更
に加える必要はないが、市販のHAT濃縮液を規定量加えて
ハイブリドーマのHATセレクション、クローニング用として開発された
も性能に差はない。
画期的な高性能の専用培地である。
2)
1. FBS（ウシ胎児血清）を全く使用しないHATセレクションとクロ
ーニングを可能にした。しかも、抗体産生ハイブリドーマの
になるよう本培地に懸濁させる。
3)
2）で調整した細胞浮遊液を培養プレートにまき込む。
4)
まき込み後、1週間位は1～3日毎に培地交換を行う。
96ウェルマイクロプレートの場合：0.05～0.1mL/ウェル
出現率、増殖性能とも従来法（RPMI1640＋FBS）を上回る。
（主要文献）
その後は可視コロニーが現れるまで、3～7日毎に培地の
2. これまで黙視されていた抗体非産生ハイブリドーマの増殖を
追加または交換を行なう。
優先的に支持するという、FBSの負の影響がないために、増殖
の弱い抗体産生ハイブリドーマの淘汰、消滅を激減させること
融合後の細胞を、脾細胞換算1×106 Cells/mLの細胞密度
（培地交換は半分を吸引除去し、その分を追加してもよい。）
5)
可視コロニーを確認後、抗体スクリーニングを行う。
となり、目的のハイブリドーマに遭遇する確率が飛躍的に高く
なった。
3. 増殖性の弱いハイブリドーマに対しても強力にコロニー形成を
促す。
4. 従来法よりも低密度でHATセレクションが可能である。
（1×10 5 ～2×10 4 Cells／ウェル：96ウェルマイクロプレート
使用時）
5. フィーダーセル（支持細胞）を用いずにクローニングが可能で
ある。
6. 目的のハイブリドーマがこれまでより短期間に入手できるので、
時間や経費を大幅に節約することができる。
〔本質〕
1. 基礎培地
クローニング
1）抗体陽性ウェルのハイブリドーマを本培地で100Cells/mL、
10Cells/mL、5Cells/mLの3段階の密度に調整する。
2） 96ウェルマイクロプレートを横方向に使用し、1）で調整した
各密度の細胞浮遊液をウェルに0.1mLずつ加えていく。
（図参照）
イ上から1段、2段の計24ウェルを、10Cells/0.1mL/ウェル
の条件
ロ上から3 段、4 段、5 段の計36ウェルを、1Cells/0.1mL/
ウェルの条件
ハ上から6 段、7 段、8 段の計36ウェルを0.5Cells/
0.1mL/ウェルの条件でまき込む。
3）可視コロニーが確認された後、直ちにスクリーニングを行う。
（注：クローニングでは、培地の追加、交換は行わないこと。
わずかに改変したRPMI1640、ダルベッコMEM、ハムF-12の
また、コロニーの細胞数が少ない場合も、スクリーニングを行
混合成分からなる液体培地。
うこと。）
2. ○
毒添加剤
**
2.
ホルモン成長因子（大腸菌または酵母組換体インスリン、トランス
フェリン、亜セレン酸ナトリウム、エタノールアミン、2‐メルカプトエ
タノール、ハイブリドーマ増殖因子）を含むヘペス緩衝液。
3. ウシアルブミン10％溶液
4）必要により、同様の方法で2次スクリーニングを行う。
5）必要に応じて、上記クローニングの操作を繰り返す。
（図）ハイブリドーマのクローニングの一例
まき込み条件
ウシ血清アルブミンを 10％含む溶液。
10 cells／0.1mL／ウエル
〔使用方法〕
○ 培地の調製法
基礎培地1ビン（500mL）に添加剤1ビン（10mL）とウシアルブ
ミン10％溶液1ビン（5mL）を無菌的に加える。
1 cells／0.1mL／ウエル
0.5 cells／0.1mL／ウエル
〔使用上又は取扱い上の注意〕
1.
〔主要文献請求先〕
本製品を使用すると融合後のコロニー形成（増殖）が速いの
エーディア株式会社信頼性保証部
で2×10 6 Cells/mL以上の細胞密度ではまき込まない。
〒101‐0032 東京都千代田区岩本町1‐10‐6
（高密度でまいた場合、培地成分の消費が著しいため、コロ
TEL: 03-3851-1672
FAX: 03-3864-5644
ニー形成が抑制されることがある。）
2.
3.
4.
添加剤は、2‐メルカプトエタノール0.0009％を含む毒物で
〔商品情報お問い合わせ先〕
ある。
エーディア株式会社カスタマーサポートセンター
添加剤は、濃縮液のため冷蔵保存中に沈殿を生じることが
〒101‐0032 東京都千代田区岩本町 1‐10‐6
あるので、よく攪拌して基礎培地に添加する。
TEL: 0120-921-207
FAX: 03-3864-5644
添加剤を加えた後の培地の濾過は避ける。細胞の種類に
よっては増殖が低下する。
5.
本製品には、抗菌剤及び抗カビ剤は含まれていない。必要
ならば、適宜抗菌剤、抗カビ剤を添加して使用する。
抗菌・抗カビ剤の使用例
抗菌剤：ゲンタマイシン（50μg/mL）
抗カビ剤：アンホテリシンB（0.25μg/mL）
6.
調製後の培地は、2～10℃保存で3カ月の安定性を認めて
いるが、できるだけ早く使用すること。
7.
廃棄する場合には、許可を受けた専門の産業廃棄物処理
業者に処理を委託すること。
（注）ご使用に際しては、「エス・クロンクローニングメデューム
CM‐B」の製品安全データシート（MSDS）もご参照ください。
下記のホームページよりダウンロードできます。
［URL：http://www.eidia.co.jp］
〔貯法及び有効期間〕
・2～10℃保存、冷凍を避ける。
・有効期間は、製造後1年6カ月（使用期限を外箱に表示）
〔包装内容〕
SS8000 エス・クロンクローニングメデュームCM‐B
・基礎培地
500mL×1
・添加剤
10mL×1
・ウシアルブミン10％溶液
5mL×1
〔主要文献〕
エスクロン資料集
〔参考文献〕
① Köhler, G. and Milstein, C., : Nature, 256, 495（1975）
② 単クローン抗体－ハイブリドーマとELISA－講談社
製造販売元
*
③ 細胞成長因子－Growth Factors－朝倉書店
④ 細胞成長因子partⅡ 朝倉書店
製造元
⑤ 動物細胞利用実用化マニュアルリアライズ社
コージンバイオ株式会社
埼玉県坂戸市千代田 5-1-3

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