タンパク質／酵素 フナコシニュース 2014 年 9 月 1 日号（No.572） funakoshi news ■ RTS E. coli HY Kit E. coli 用 T7 プロモーター発現系で制御されたプラスミドまたは PCR タンパク質／酵素 産物を用いてタンパク質を効率的に合成できます。E. coli 発現系に対 タンパク質発現 応した T7 プロモーター，リボソーム結合部位，T7 ターミネーターを RTS 無細胞系タンパク質合成キット 含む直鎖状 DNA または環状プラスミドをテンプレートとして使用でき ます。 ［製品ページ番号：4031］ ■ RTS E. coli Disulfide Kit E. coli または小麦胚芽ライセートを用いた無細胞系のタンパク 質合成キットです。迅速かつ高効率にタンパク質が合成できま す。in vitro でタンパク質を合成するため，宿主に対して毒性 を持つタンパク質の合成が可能です。 反応液中で転写・翻訳とジスルフィド結合形成が行えるキットです。機 能活性を有するタンパク質合成の収量を最大限に高めるために最適化さ れた E. coli ライセート，GroE シャペロンやレドックスバッファーなど が含まれています。E. coli 発現系に対応した環状プラスミドをテンプ レートとして使用できます。 ■ DnaK / GroE Supplement（可溶化用サプリメント） 共通の特長 発現させたタンパク質が不溶化，またはミスフォールドした場合に，こ ● ● 10 ● E. coli または小麦胚芽ライセートにテンプレートと必要な試薬を混 れを改善させるために添加する各種シャペロン分子サプリメントです。 合してインキュベートするだけで，タンパク質が合成できます。 RTS の E. coli 系キット用に最適化されたプロトコールが用意されてい キ ッ ト に 含 ま れ る CECF（Continuous Exchange Cell Free るので，これらのキットと簡単に組み合わせることができます。目的タ Protein Synthesis）Reaction Device は透析膜を利用した画期的 ンパク質のサイズ制限なく使用可能な DnaK Supplement と，20 ∼ なシステム（RTS 100 E. coli HY Kit を除く）によりタンパク質合成 60 kDa のサイズで使用可能な GroE Supplement があります。 の過程で生産される合成阻害物質を除去できるため，効率的な長時 ■ RTS Wheat Germ CECF Kit 間の反応が可能となり，タンパク質の収量が格段に向上します。 小麦胚芽無細胞タンパク質合成システムに対応した構造を持つ環状プラ テンプレート DNA に 6 × His タグなどのエピトープタグ配列を挿 スミド，直鎖状 DNA または mRNA を用いてタンパク質を効率的に合 入することにより，ウェスタンブロッティングによる発現の確認や 成できます。真核生物由来 cDNA の発現に適しており，E. coli ライセー 精製が可能です。 トを用いた無細胞発現系において十分なタンパク質発現が得られなかっ Batch た試料に用いることで，収量や可溶性の改善を期待できます。 CECF ①テンプレート DNA 1 2 4 6 8 24 1 2 4 6 8 24 hrs ②ライセート中での T7 RNA ポリメラーゼによる転写 ③翻訳 ④目的タンパク質 CECF の使用により，タンパク質合成が 継続して行われ，収量が格段に向上して いる（右）。 無細胞タンパク質合成システムの原理 ［メーカー：FPR］ ： 本 紙 に 掲 載 さ れ て い る製品はすべて研究用です お問い合わせ先 試薬 - ６８４ １ - ６２０ - ６８４ １ - ７７５ ＴＥＬ ０３ ５ ＦＡＸ ０３ ５ 品 名 RTS 100 E. coli HY Kit RTS 500 E. coli HY Kit, Proteo Master ＊ 2 RTS 9000 E. coli HY Kit ＊ 2 RTS 100 E. coli Disulfide Kit ＊ 2 RTS 500 E. coli Disulfide Kit ＊ 2 RTS 100 Wheat Germ CECF Kit ＊ 2 RTS 500 Wheat Germ CECF Kit ＊ 2 使用可能な テンプレート L, P L, P P P P P L, P, R L, P, R 反応液の 容量 50 μl 50 μl 1 ml 10 ml 50 μl 1 ml 50 μl 1 ml 期待収量＊ 1 （1 反応当たり） ∼ 20 μg ∼ 20 μg ∼ 6 mg ∼ 50 mg ∼ 80 μg ∼ 2 mg ∼数 10 μg ∼数 100 μg 反応時間 反応数 ∼ 6 時間 ∼ 6 時間 ∼ 24 時間 4 ∼ 24 時間 ∼ 24 時間 ∼ 24 時間 ∼ 24 時間 ∼ 24 時間 24 96 5 1 24 5 24 5 保 存 −80℃ −80℃ 商品コード 包 装 2401100 2401110 2401500 2401900 2401120 2401520 2402100 2402500 1 kit 1 kit 1 kit 1 kit 1 kit 1 kit 1 kit 1 kit 価格（￥） 83,000 226,000 226,000 429,000 101,000 320,000 127,000 372,000 ＊ 1 テンプレート DNA の由来や配列の影響により，タンパク質合成量が期待収量に満たない場合があります。 ＊ 2 Eppendorf Thermomixer comfort が必要です。詳細は当社テクニカルサポート（試薬担当）までお問い合わせ下さい。 ■ RTS Kit 用テンプレート作製キット 品 名 RTS 100 E. coli LinTempGenSet, His-tag (96 reactions) RTS pIVEX His-tag, 2nd Gen. Vector Set RTS Wheat Germ LinTempGenSet, His-tag (96 reactions) RTS pIVEX Wheat Germ His6-tag Vector Set ［メーカー：FPR］ 説 明 RTS 100 E. coli HY Kit（#2401100, #2401110）用の直鎖状 DNA テンプレートを PCR により構築 するキット。N 末端または C 末端に 6 × His タグを付加できる。 E. coli 無細胞合成系に適したプラスミドベクターのセット。N 末端または C 末端に 6×His タグを含む タンパク質を発現できる。 RTS 100/500 Wheat Germ CECF Kit（#2402100, #2402500）用の直鎖状 DNA テンプレートを PCR により構築するキット。N 末端または C 末端に 6×His タグを付加できる。 小麦胚芽ライセートを用いた無細胞合成系に適したプラスミドベクターのセット。N 末端または C 末端 に 6 × His タグを含むタンパク質を発現できる。 商品コード 包 装 2401000 1 kit 41,000 2401010 1 set 36,000 2402000 1 kit 41,000 2402010 1 set 36,000 2401020 5 × 180 μl 41,000 2401030 5 × 125 μl 41,000 2400060 10 ml 23,000 ■ 可溶化用サプリメント／精製用レジン RTS DnaK Supplement シャペロン分子である DnaK, DnaJ, GroE を含む E. coli ライセート溶液。タンパク質の凝集を防ぎ，ミ RTS GroE Supplement E. coli 内シャペロン分子のひとつである GroE（GroEL および GroES）を含む溶液。GroE は細胞内タ スフォールドしたタンパク質のリフォールディングを行う。 ンパク質のおよそ 10 ∼ 30％のフォールディングに関与していると考えられる。目的タンパク質のサイ 価格（￥） ［メーカー：FPR］ ズが 20 ∼ 60 kDa の場合に使用可能。 PerfectPro Ni-NTA Superflow 140901s_p10_k_i.indd 10 FPLC でも使用可能な 6 × His タグ融合タンパク質精製用のニッケルレジン。高い結合能（5 ∼ 50 mg 6 × His-tagged protein/ml resin）を有し，1 ステップで精製できる。 2014/08/18 13:55:16
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