International Standards of Testing Methods in Food Microbiology & Validated Alternative Methods Nuno Reis - bioMerieux Asia Pacific Regional Business Manager 14th November 2013 Agenda 本日の講演内容 Reference Method/Microbiological criteria 標準法(参照法)/微生物規格基準 EU, USA and Asia Pacific countries 欧州、米国、アジアパシフィック地区 簡易代替試験法 EU/USA/Asian countries 欧州、米国、アジア諸国 Acceptance/conversion from conventional methods Alternative Methods 従来試験法からの 切替と採用 International Validations インターナショナルバリデーション Validations 妥当性確認（バリデーション） EU/USA/Asian countries 欧州/米国/アジア諸国 Examples 実例 VIDAS/TEMPO Customers VIDAS/TEMPO 採用施設 2 Reference Method/Microbiological criteria 標準法（参照法）/微生物規格 Standardization標準化: methods, guides or rules elaborated by independent organisations 独立した機関で策定された手法、ガイド、 ルール(e.g., in food microbiology) Of Methods = Norms = Text of reference = Reference Methods = Standard Methods By standardization bodies標準化関連機関により策定(ISO, CEN, AOAC, AFNOR Normalisation, ...) 3 Standardization bodies and related Organizations標 準化関連機関 International Organization for Standardization 国際標準化機構 (ISO) ISO TC34/SC9 : structure in charge of Food microbiology 食品微生物関連規格の策定 European Committee for Standardization 欧州標準化委員会 (CEN) EN TC275/WG6 : structure in charge of Food microbiology 食品微生物関連規格の策定 National Committees in European states (AFNOR Normalisation, BSI, DIN, UNI, AENOR, IBN, NEN, SNV…) 欧州各国の国家機関 Endorse most ISO Standards as National Standards 殆どのISO規格が各国の国家規格として認められている。 Mandatorily endorse CEN Standards as National Standards CEN規格は自動的に各国の国家規格となる。 4 Standardization bodies and related Organizations標 準化関連機関 15 countries (European + Australia, Egypt, Thailand…) participate actively to ISO TC34/SC9 ISO TC34/SC9には15カ国が正式参加(欧州、オーストラリア、エジプ ト、タイ……） Related organizations: 関連組織 US FDA BAM, USDA MLG 米国 FDA/BAM, USDA/MLG Standard Method for Examination of dairy products (US/APHA, IDF,…) 乳製品の検査における標準法(米国/APHA, IDF,…….) 5 ISO Standard (Reference Method) for testing method ISO 規格における試験法(標準法(参照法)） Examples 例: In food microbiology食品微生物: Method of Analysis (Salmonella)サルモネラ試験法 ISO 6579:2002 “Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the detection of Salmonella spp.” In food microbiology食品微生物: Method of Analysis (Listeria)リステリア・モノサイトゲネス試験法 ISO 11290 “Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes” 6 Example of Microbiological criteria in EU EUにおける微生物規格例 Criteria for Salmonella サルモネラの場合 Absence in 25 g. 25g中陰性 Food products :食品検体 Meat : ground beef, poultry,…. Meat products ready-to-eat, Cheese, butter, Dairy products prepared with raw milk or pasteurized milk,… Milk powder and whey powder, Ice cream, Egg products, Cooked seafoods, Molluscean eated raw, Sprouts, Fruits, vegetables,… Milk powder for babies or for medical purpose. 7 Microbiological criteria in EU EUにおける微生物規格例 Criteria for Listeria monocytogenes リステリア・モノサイトゲネスの場合 Foodstuffs食品 Criterion規格 Ready to eat food intended for infants and ready to Absence in 25 g eat foods for special medical purposes. 乳幼児向け調 25g中 陰性 理済食品、特殊医療用調理済み食品 Ready to eat food able to support the growth of L. monocytogenes, other than those intended for infants and for special medical purpose 乳幼児および特殊医 療用以外で、製品中でリステリアモノサイトゲネスが増殖する 調理済み食品 Absence in 25 g And <100 ufc/g during shelf life 25g中 陰性および消費 期限まで<100 Ready to eat foods unable to support the growth of L. < 1 0 0 ufc/g during monocytogenes, other than those intended for infants shelf life and for special medical purposes (*) 乳幼児および特殊 消費期限まで<100 医療用以外で、製品中でリステリアモノサイトゲネスが増殖し ない調理済み食品 (*) : products unable to support the growth of L mono : acid products (ph <4.4), dehydrated products (aw <0.92) or products with shelf life <5 days. リステリア・モノサイトゲネスが増殖しない製品: 酸性食品(pH <4.4), 乾燥品Z(aw<0.92)もしくは消費期限が5 日未満のもの 8 Microbiological criteria in EU EUにおける微生物規格例 Criteria for pathogens食中毒菌の規格 Cronobacter sakazakii : Absence in 30 x 10 g for « dried infant formula and dried dietary foods for special medical purposes intended for infant below 6 months of age ». Enterotoxins of Staphylococci : Absence in 25 g for cheeses, powder milk, whey powder when the result in coagulase positive Staphylococci is > 10 5 cfu/g. 9 Standardization: Regulatory (US) 標準化：規制(米国) USDA/FSIS米国農務省/FSIS Microbiology Laboratory Guidebook (MLG) United States Department of Agriculture / Food Safety and Inspection Service Methods for Meat, Poultry and egg products 食肉,食鳥,卵製 品の試験法 FDA/CFSAN 米国食品医薬品局 Bacteriological Analytical Method (BAM) US Department of Health and Human service Food and Drug Administration / Center for Food Safety and Applied Nutrition Methods for other food products 他の食品の試験法 10 Reference Method in USA 米国での標準法（参照法） BAM: Bacteriological Analytical Manual FDA’s preferred laboratory procedures for microbiological analyses of foods and cosmetics. FDAによる食品および化粧品の 微生物検査のための試験手順 General Guidelines / Procedures Food Sampling and Preparation of Sample Homogenate検体 のサンプリングおよび調製 Microscopic Examination of Foods, and Care and Use of the Microscope食品の顕微鏡による検査および顕微鏡のケアと使用 Aerobic Plate Count 一般生菌 Investigation of Food Implicated in Illness 疾病における食品調 査 11 Reference Method in USA 米国での標準法（参照法） Methods for Specific Pathogen 病原微生物の試験法 Enumeration of E.coli and Coliform Bacteria Salmonella Shigella Campylobacter Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis Vibrio Detection of Entertoxigenic Vibrio cholerae in Foods by the Polymerase Chain Reaction Listeria monocytogenes Staphylococcus aureus Bacillus cereus Yeasts, Molds, and Mycotoxins … Methods for Microbial Toxins 微生物毒素の試験法 Staphylococcal Entertoxins: Micro-slide Double Diffusion and ELISA-based Methods … Additional Methods その他試験法 Microbiological Methods for Cosmetics … 12 Example of Microbiological criteria in the US 米国での微生物規格例 Information are spread in different regulatory organization : 複数の規制機関で規定 USDA / MLG for poultry, eggs and meat food 食鳥、卵、食肉製品 ⇒USDA/MLG e.g : limit of detection for the method MLG 4.04 Salmonella : less than 1 CFU/g in a 25 g sample 例：MLG4.04 サルモネラ：検体25g中1CFU未 満 FDA / BAM for all for others products 他の食品 ⇒FDA/BAM e.g : Zero tolerance policy of no detectable L mono in 2X 25g analytical portions of food or beverage 例：リステリア・モノサイトゲネス： 食品、飲料における2×25g 採取部分における非検出 Compendium : e.g : Compendium of fish and Fishery Product Process, Hazard control 例：魚介・水産品製造工程、ハザード制御 e.g : Aerobic Plate Count (ACT) Dried and frozen whole egg maximum of 50000 ACP/g 例：一般生菌 乾燥および冷凍全卵 最大 50000ACP/g Example of Microbiological criteria in the US 米国での微生物規格例 Information are spread in different regulatory organization : 複数の規制機関で規定 Codex alimentarius committee e.g : determined criteria for pathogenic microorganisms or powdered Infant Formulae, formula for special medical purposes and human milk fortifiers , E sakasaki 0/10 g and Salmonella 0/25g 例：病原微生 物および乳幼児粉乳、特殊医療用ミルクおよびミルク添加剤 ⇒ E. sakazakii 0/10 g、サルモネラ 0/25g e.g : determined criteria for process hygiene 例：工程衛生管理のため の規格 : - Mesophilic aerobic bacteria 中温性好気生菌: m= 500/g and M=5000/g - Enterobacteriaceae腸内細菌科菌群0 /10g Reference Method/Microbiological criteria in Thailand タイにおける標準法(参照法)/微生物規格基準 The norms applied in Thailand can be classified into 2 types: タイで適用されている用語は2タイプに類別される。 1. Local consumption or imported food will follow the National Food Standards regulated by Ministry of Public Health. However, Thai National food standards and detection methods have applied from International Standards e.g. Codex , BAM US FDA and ISO methods国内消費または輸入食品 はタイ厚生省の国家食品規格に従うが、この国家規格および検出試験法は国 際規格から適用されたものである（Codex, FDA/BAM, ISO） 2. Exported food will follow the responsible government organization: 輸出食品は管轄の政府機関に従っている。 1. 2. Seafood are under supervision of Fish Inspection and Quality Control, Department of Fishery.水産物：漁業局の水産検疫および品質管理所 Poultry are under supervision of Bureau of Quality Control of Livestock Products, Livestock Department. 食鳥：畜産局の畜産物品質管 理所 3. Fruit and Vegetable are under supervision of National Bureau of Agricultural and food standards 野菜および果物：国家農産品・食品規格事 務局 15 Thai National Food Microbiology Standards by Ministry of Public Health タイの微生物規格 16 Trends in Thailand タイでのトレンド In the past the AOAC and BAM methods were the widely accepted methods. For example, the National Food Standards regulated by Ministry of Public Health mentioned the AOAC Number in each methods 過去はAOACおよびBAM 法が広く用いられていた。例えば、タイ厚生省の規格には各試験法に はAOACの試験法番号が記載されていた。 Recently, ISO methods has become well-known and used as reference methods as they are more practical than BAM or AOAC methods and their European customers’ require ISO validated methods. しかし近年ではISO法が普及し、標準法(参照 法)として使用されてきている。これはISO法がBAMもしくはAOAC法 よりも実用的であり、また、ヨーロッパの顧客がISO承認法による検査 を要望するため。 17 Microbial Standards in Southeast Asia 東南アジア諸国の微生物規格例 乳製品 18 Microbial Standards in Southeast Asia 東南アジア諸国の微生物規格例 食肉/肉含有製品 19 Reference Method/Microbiological criteria in Asian/ASPAC countries アジア/ASPAC諸国での標準法(参照法)と微生物規格 China 中国 GB Standards SN Standards GuÓ Biaõ 国 标 National Standards 20 GB/T 4789-Microbiological examination of Food Hygiene食品衛生の微生物検査（中国） GB/T 4789 is the national standards for Microbiological examination of Food Hygiene食品衛生の微生物検査ではGB/T 4789が国家標準 First appeared in 1984 1984年初版 Modified in 1994, 2003 1994年、2003年改定 Widely used in all Chinese food microbiological laboratories including CIQ, CDC, QIB, food company etc. CIQ, CDC, QIBを含 む試験機関で広く用いられている Version 2003 lags behind the International Standards (US FDA BAM, ISO, etc.) 2003年版は国際標準からは遅れている SN-method is introduced by the CIQ system and take some functions of GB Standards… SN-methodはCIQにより導入されい くつかのGBの機能を含む 21 Reference Method in Australia オーストラリアにおける標準法（参照法） Standards Australia and ISO - methods FSANZ – food standards and limits AQIS – import/export FSIS/USDA – import /export AOAC - validation AFNOR – validation NATA - accreditation 22 Reference Method in Australia オーストラリアにおける標準法（参照法） 例 リステリア・モノサイトゲネスの菌数測定法 発酵挽肉の大腸菌試験法 Microbiological criteria in Australia オーストラリアにおける微生物規格 24 Microbiological criteria in Australia オーストラリアにおける微生物規格 25 Alternative Methods in EU/USA/Asia 欧米/アジアにおける簡易代替試験法 Consequences about Analysis Methods 試験法の概念 2 kinds of Methods are recognized: Reference methods and Alternative validated methods 標準法(参照法)と妥当性確 認された簡易代替法が認められている Europe 欧州 : Reference methods 標準法（参照法）= ISO Alternative methods must be validated according to ISO 16140 and certified 簡易代替試験法はISO 16140に基づき妥当性確 認され承認を受けていなければならない USA 米国: Reference methods 標準法（参照法） = BAM and MLG Alternative methods must be validated by AOAC 簡易代替試験 法はAOACによる妥当性確認を受けていなければならない 26 Alternative Methods in EU/USA/Asia 欧米/アジアにおける簡易代替試験法 AFNOR (Association Francaise de Normalisation) AOAC (Association of Official Analytical Chemists) International EMMAS Assessment (UK) Health Protection Branch of Canada DIN Committee (Germany) Chinese Government (SN & GB) … 27 Reason why they can use Alternative Methods 簡易代替試験法が使用可能な理由 Definition定義: Commercial methods adapted to the requirements of an industrial production工業的製造の要求事項に適応した市販キット Simpler (facility of execution and/or automation), faster (greater speed of analysis and/or answer) and/or additional analytical characteristics (limit of detection, specificity), and/or more economic than the traditional reference methods 簡易（使用が容易および/または自動化されたもの）、迅速 （試験のスピードが速い、および/または結果判定が早い） 28 Reason why they can use Alternative Methods 簡易代替試験法が使用可能な理由 Acceptability of alternative methods 簡易代替法の使用: 3 different approaches depending on countries 国により3つのア ポローチに分かれる: No specific requirement 特別な申請は不要 Specific registration申請が必要なケース(e.g., India, Russia, Brazil, Mexico …) Third party validation and bodies in charge 独立した第三 者機関による妥当性確認のシステム: USA and others (AOAC International / AOAC RI) Canada (MFHBP Santé Canada) Europe: AFNOR, Microval, NordVal (ISO 16140に基づく妥当性確 認) 29 Alternative Methods in Europe 欧州における簡易代替試験法 According to the European Regulation (EC 2073/2005), an Alternative Method must be: 欧州の微生物規格(EC2073/2005)における簡易代替試験法の必須 条件: 1. Certified by third party (Certification body) 第三者機関（認証機関）による承認 2. Validated according to ISO 16140 guidelines ISO 16140に基づく妥当性確認 3. Validated in comparison with an international reference method 国際標準法（参照法）との比較による妥当性確認 30 Validation of Alternative Methods 簡易代替試験法の妥当性確認 Objective目的: To demonstrate the equivalence between the alternative method and the reference method 簡易代替試験法と 標準法（参照法）の同等性を実証する According to International rules (ISO 16140) 国際規格(ISO 16140) に基づく妥当性確認: AFNOR Certification (Validation) Microval NordVal According to other rules その他: AOAC Health Canada 31 Reason why they can use Alternative Methods 簡易代替試験法が使用可能な理由 The procedure is based on three core principles 3つの中核となる原理に基づいた手順: 1. Perform the validation as described e.g., in EN ISO 16140 EN ISO 16140のような規格に基づいて妥当性確認が遂行される 2. Manufacturer shall apply a quality system covering the production line of the product for which the certification is sought (ex ISO 9001, ISO 13485) メーカーは認証（ISO 9001, ISO 13485等）を必要とする品質システム を適用 3. Regular verification of the quality of the certified methods, which is made after the certification is granted (regular audit, updated documentation with any modification) 承認を受けた試験法の品質を定期的に検証（定期的な査察、変更が あった場合の必要書類のアップデート） 32 Reason why they can use Alternative Methods 簡易代替試験法が使用可能な理由 ISO 16140: 2003 “(Microbiology of food and animal feeding stuffs - Protocol for the Validation of alternative methods)” ISO 16140(2003): 簡易代替試験法の妥当性確認のためのプロトコ ール Published in May 2003 2003年に発行 Followed by AFNOR Validation Certification since 2004 2004年以降AFNORによる妥当性確認と認証 Followed by Microval since 2006 2006年以降Microvalでも実施 Under revision 現在改定作業中 33 International Validations: AFNOR Validation インターナショナルバリデーションAFNORでの妥当性確認 AFNOR CERTIFICATION validation AFNORでの妥当性確認（認 証システム）: Managed by a Technical Board of approximately 20 people 約20名の専門家委員会で運営される Consisting of representatives of all the parties concerned 全 ての関連機関の代表から構成 Divided into the following groups 以下のグループに類別: users 使用者(public and private laboratories 公的および民間の試験機 関) technical organisations技術組織(laboratory accreditation organisation 試験所認証機関, technical centre of industries concerned関連産業の技 術機関, health safety agency健康安全,…) authorities 関連当局(agriculture, health, environment, …depending on application) kit manufacturers worldwide キットメーカー 34 International Validations: AFNOR Validation インターナショナルバリデーション：AFNORでの妥当性確認 AFNOR VALIDATION mark : First on the European and world market ISO 16140に基づき欧州および世界市場で最初にスタート More than 60 methods validated according to the EN ISO 16140 protocol at the end of 2007 60以上の試験法をISO 16140に基づき妥当性確認（2007年末） For both qualitative and quantitative methods 定性試験法および定量試験法 Methods validated according to a protocol prior to EN ISO 16140 are currently being studied to bring them into line with the new protocol ISO 16140発行以前にAFNORで妥当性確認された試験法について は、このプロトコールに基づくようにスタディー中 35 International Validations: AOAC International インターナショナルバリデーション：AOACインターナショナルでの妥当性 確認 AOAC Official Method validation ensures that AOAC approved microbiology methods are equivalent to the “Gold Standard” reference methods AOACオフィシャルメソッドバリデ ーションにより“ゴールデンスタンダード”である標準法（参照法）との 同等性 AOAC International AOACインターナショナル Review, validation and publication of analytical methods 試験 法のレビュー、妥当性確認、発行 AOAC Research Institute AOAC RI Subsidiary of AOAC INTERNATIONAL AOACインターナショ ナルの支部機関 Provides an independent third-party review of test kit performance claims 独立した第三者機関へ試験キットの性能要 求を提供 36 International Validations: AOAC International インターナショナルバリデーション：AOACインターナショナルでの妥当性 確認 AOAC Validation Programs バリデーションプログラム AOAC International - Official Methods of Analysis – オフィシャルメソッドアナリシス（ OMA) - 1.5-2 yrs from validation to approval 承認まで1.5-2年程度を要 する AOAC Research Institute AOAC RI - Performance Tested Methods – PTM - 0.5 yrs from validation to approval 承認まで0.5年程度を要する Harmonized Program ハーモナイズプログラム - PTM → OMA – 1-1.5 yrs PTM⇒OMAを一連で承認を受けるプログ ラム 1-1.5年程度 37 International Validations: AOAC International インターナショナルバリデーション：AOACインターナショナルでの妥当性 確認 Official Methods of Analysis (OMA) オフィシャルメソッドオブアナリシス (OMA) Provides confidence to product users 使用者での信頼 Recognized worldwide ワールドワイドでの認知 Written in government regulations, product specifications, product Acceptance 政府機関での規制への記載他 Adopted by other national and international standards Organizations 国家、国際機関での適用 Third party “multi-lab” validation 複数の第三者機関での妥当性確認 Performance Tested Methods (PTM) PTM-Approval has gained wide acceptance in the US, Europe, and globally. 欧米他多くの国でPTMの 承認を受けた試験法が増えている - Monitored by the Research Institute Third Party validation 第三者機関での妥当性確認 Independent “single” Lab Validation 独立した第三者機関 1施設での妥当性確認 Certification Mark 承認ロゴ Annual Review 1年ごとにレビュー 38 Products validated for ISO (AFNOR) ISO承認(AFNOR)試験法の関連製品 TEMPO: ISO/AFNOR VIDAS: ISO/AFNOR Chromogenic media酵素其質培地: ISO/AFNOR Products validated for AOAC Approval AOAC承認試験法の関連製品 TEMPO: RI/OMA VITEK 2 Compact: RI/OMA VIDAS: RI/OMA Chromogenic media酵素其質培地: RI bioMérieux International Approvals 承認試験法（ビオメリュー製品関連） VIDAS関連 ISO承認（AFNOR) bioMérieux International Approvals 承認試験法（ビオメリュー製品関連） VIDAS関連 ISO承認（AFNOR) bioMérieux International Approvals 承認試験法（ビオメリュー製品関連） VIDAS関連 AOAC承認 bioMérieux International Approvals 承認試験法（ビオメリュー製品関連） VIDAS関連 AOAC承認 bioMérieux International Approvals 承認試験法（ビオメリュー製品関連） 酵素其質培地関連 ISO承認(AFNOR) bioMérieux International Approvals 承認試験法（ビオメリュー製品関連） TEMPO関連 ISO承認(AFNOR) bioMérieux International Approvals 承認試験法（ビオメリュー製品関連） TEMPO関連 AOAC承認 bioMérieux International Approvals 承認試験法（ビオメリュー製品関連） TEMPO関連 AOAC承認 bioMérieux International Approvals 承認試験法（ビオメリュー製品関連） AOAC VITEK 2 Validations for Identification parameters: Harmonized RI/OMA - VITEK 2 GN - Identification of Gram-Negative organisms AOAC OMA approved - VITEK 2 GP - Identification of Gram-Positive organisms AOAC OMA approved - VITEK 2 BCL - Identification of Bacillus organisms AOAC RI approved VITEK 2 コンパクト関連 AOAC承認 GB/T 22429-Focus on VIDAS method VIDAS を用いた試験法 GN/T 22429への収載 Rapid Screening for Salmonella, Escherichia coli O157 and Listeria monocytogenes in foods-Enzyme-linked immunoassay method サルモネラ、大腸菌 O157、リステリア・モノサイトゲネス Through Fast –Track Program FDA BAM Standard Methods - bioMerieux VIDAS SET2 (Staph enterotoxin) 51 FDA BAM Standard Methods - bioMerieux AES BACARA culture media (Bacillus cereus) 52 Example of labs using VIDAS/TEMPO VIDAS/TEMPO 導入施設 一例 VIDAS (>4,250) US FDA USDA Nestle Foods Nestle Purina Abbott Nutrition Bristol Myers Cargill Guittard Chocolate Blue Diamond Growers Gerber Tyson Foods Mead Johnson Nutritionals Unilever Bestfoods MARS Snackfoods … VIDAS (con’t) McCormick Spices General Mills/Pillsbury Conagra Foods Heinz Eurofins Pepsico Kraft Foods TEMPO (>750) US FDA USDA Unilever Bestfoods Costo Wholesale Conagra Foods Pfizer Nutrition Unilever Bestfoods Tyson… Conclusion まとめ Reference Methods: Standardization 標準化された主な標準法（参照法） ISO, US FDA BAM Microbiological criteria 微生物規格 Pathogens: zero tolerance 病原微生物：ゼロ管理の考えが主 流 Enumeration: specification limits 菌数管理（指標菌など） Alternative Validated Methods: 妥当性確認された簡易代 替試験法 ISO 16140 AOAC Reason: simpler, faster, LOD, specificity, more economic 妥当性確認された簡易代替試験法が使用される理由：簡便、 迅速、感度、特異性に優れ、経済面でもメリットあり
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