Vol．５ No．１愛媛大学医学部機器センターニユース平成５年７月編集・発行愛媛大学医学部附属実験実習機器センター上げます。センター長在任期間に賜りました皆様の絶大の御支援と御理解、御協力に心から御礼申し上げ一言御挨拶申し上げました。有難うございました。センター長を辞するにあたって生理学第一片岡喜由前センター長上原康生教授（現熊本大学）の後任として２年９ケ月の期間大過なく努めさせていただき、この度（平成５年４月１日より）植田規史教授にバトンタッチすることになりました。現場のことは吉村助教授、野田係長、清水技師長以下技官の皆さんに任せきりで、私の役剖は乾杯屋の勤めを果たすだけでしたが、これはとりも直さず技官の各位がすでに立派な専門家であったこと、吉村助教授をはじめとする全体の和がゆるぎなく保たれたこと、歴代のセンター長の大変な御努力で運営の基本とマニュアルが確立されていたこと、動物実験施設とが車の両輸となり学位製造機関として順調に回転していたことを示すものです。事実、センター長会議に出席いたしましても、その充実ぶりが他校と比較して抜群であることが確認され、心強く感じたことでした。しかし、私の力不足から在任中に一名の定員不補充を余儀なくされましたし、機器の老朽化も目立っており、厳しい側面がいくつかあることも事実です。今後は植田センター長の新しいアイデアと活力で、センターが更に大きく発展されるよう切に祈念するものです。私自身はＲＩ施設の主任者として引き続きセンターとの関わりは続きますので、よろしくお願い申しく研究紹介＞ヒスタミン遊離機精の解明薬理学前山一隆１８７７年にFreiberg大学の医学生であったPaul Ehrlichが肥満細胞を発見して以来、肥満細胞はヒスタミンの貯蔵細胞として、その存在意義をふくめて多くの研究がなされてきた。その代表的な化学的メディエーターであるヒスタミンは、多くの生理活性物質のなかでも研究の歴史が古く、特にヒスタミンによるモルモツトの回腸の収縮は、薬理実験の王道（古典？）として学生実習には必ずといっていいほど取り入れられている。ヒスタミンの歴史のなかで Epoch makingは、H1、H2受容体の発見であり、最近はH3受容体の発見もありオータコイドとしてだけではなくヒスタミン・ニューロンとしてその生理作用が研究されている。ちなみにH1、H2受容体は近年相次いでクローニングされた。ヒスタミンはその代謝回転速度の違いにより、肥満細胞性ヒスタミンと非肥満細胞性ヒスタミンの二つに大別される。前者の肥満細胞性ヒスタミンとは、肥満細 1 胞の顆粒に含まれており、I g E 感作後、抗原刺激により遊離され、気管支喘息等のアレルギー疾患をもたらすため、やっかいものとしてとらえられてきた。アレルギー疾患に対して、多種の抗ヒスタミン薬、抗アレルギー薬が開発され臨床の場で多用されているが、立ちかえってその薬理作用を調べるときに、肝心の遊離機構本体が多くの仮定で成り立っていることに気づかれるであろう。肥満細胞や好塩基球ではI g E 受容体凝集後、他の細胞と同様、細胞内情報伝達物質の変化が生じ、ヒスタミン遊離を引き起こす。とりわけフォスフォリパーゼC の活性化により、イノシトールリン脂質の加水分解が生じ、その生成物であるイノシトール l 、4 、5 一三リン酸が細胞内C a 貯蔵部位からCaを動員し、もう一方の分解産物であるジアシルグリセロールがプロテインキナーゼCを活性化する。これらの研究は1980年代にT s i e n 等によるC a 蛍光ブローベの開発、Berridge等によるイノシトールリン酸の分離定量、フォルボルエステルを用いたプロテインキナーゼＣの活性化といった手法の確立により進んだものであり、現在では、フォスフォリパーゼＣやプロテインキナーゼＣのアイソザイムといった、さらに細かな点まで明らかになっている。刺激分泌を制御する情報伝達系としては、これまでいろいろな説がでては消え現在に至っている。ヒスタミン遊離に細胞内Ca濃度の上昇が必須条件となるが、それを司るものとして膜リン脂質のメチル化説、サイクリックA M P 説、そしてイノシトールリン酸説と、その流行に合わせて提唱されてきた。結局、細胞内情報伝達は単純なものではなく、多くの物質の変化がないまぜになって調節しあっているという、つかみどころのない結果に終わっている。ただ振出しにもどったかといえばそうではなく、細胞の多様性があきらかになったまでで着実に解明はすすんでいると考えている。細胞内Ca濃度の変化を調べる上で、Tsien等が開発した種々の蛍光プローベの寄与は大きく、quin2，fura‐2と改良が加えられてきた。私自身、潅流システムで単層培養したラット好塩基球性白血病細胞を用いて、抗原刺激後の細胞内Ca濃度の変化と遊離するヒスタミンの同時測定を行ってきた。最初は細胞集団の細胞内Ca濃度の変化を知ることで満足していたのが、蛍光頭微鏡と画像処理を用いて、単一細胞における Ca濃度の変化を追わなければ満足しなくなった。機器センターでも細胞内Ca濃度測定装置をそろえておられると聞く。確かに技術の進歩とともに、より高感度の機械を操ると古い機械はすぐにものたりなくなるのは、パソコンをみれば明らかである。が、細胞内Ca濃度の役割や動員の機構を知るには、単に新しい機械があればいいというわけではない。要はいかに使いこなすかであろう。とはいっても最先端の機器、たとえば共焦点レーザー顕微鏡があれば使わない手はない。機器センターに大いに期待する点である。肥満細胞等の非興奮性細胞において、Ca 流入機構は末解決であり、電位依存性Ca チャネルとは異なるCaチャネルが存在するか否かが大問題である。薬理学教室に在籍するものとしてCa流入抑制薬なるものがあれば、第二のCaチャネルブロッカーとして大いに宣伝できるわけであるが、現時点ではくもをつかむような状況である。まず、 Ca流入を抑制する薬のスクリーニングを基 2 にCaチャネルのアフィニティ・リガンドを得ることが先決であり、生理学、薬理学、生化学、分子生物学といったすべての観点からのアプローチが必要になるだろう。是非、多くの先生方に教えていただきながら Ca流入機構を解明したいと願っています。また、これが”ヒスタミン遊離機構の解明”という表題のゴールに一歩近づくことになると考えている。の差があるため、統一的な見解をうるのは容易ではなく、各大学回有の事情をふまえながらできる所から改菩していくことが肝要と思われます。センター長会議の機能の一つとして技官の情報交換を計ることが懸案でしたが、今回初めて技官の研究成果をボスター発表する場が設けられ、計１１題が集まりさかんな質疑応答がなされました。本学からは清水技師長、増田主任が発表しました。今後これが定着していくことが期待されます。なお、次のセンター長会議は、今秋、香川医科大学で開催される予定です。第１０回センター長会議に出席して前センター長片岡喜由上記のセンター長会議が平成４年１１月６日、当番校、大分医科大学で開催されました。午前中は、センター長会議１０周年を記念して「医学・薬学の研究及び教育における機器センターの役割」と題するパネルディスカッションが行われました。パネラーとして阪大の田川教授が招かれ、今後の機器センターのあり方について討議されましたが、同日早朝のフェリーで出発したので残念ながら最後の部分しか聴くことがでさませんでした。印象ですが、総論としては納得できても、参加各大学のセンターの規模が大小まちまちである現状では各論としては、馴染み難い部分も多いのではないかと感じました。午後からは、センター長及び助教授の専門部会と技官の専門部会が開かれ、主に技官の待遇改菩、機器センターの運営のあり方などについて意見の交換が行われました。この会議が回を重ねるたびに、問題点も明確にされてさたように思われますが、センターの大学間の規模、機構、目的意識などにかなりく機器の紹介＞ウルトラミクロトーム形態部門首藤政親この度、形態部門に電子顕微鏡用のウルトラミクロトームが設置されましたので、紹介します。電子顕微鏡用ウルトラミクロトームは、透過型電子顕微鏡用試料作製の行程で、電子線が試料を透過するようにするために、試料を薄切（厚さ数十n m に）する必要があり、その薄切を行うための機械です。このウルトラミクロトームに要求される性能は、①操作性の良いこと、②切れ味の良い、厚さむらのない切片が安定して得られることです。電顕標本作製において、薄切は最も時間を要する行程であり操作性の良いことは能率をあげる上で重要なことです。また、切片が悪いと良い電顕写真が得られないため、ウルトラミクロトームは電顕標本作製上非常に重要な機械です。購入されたウルトラミクロトームの機種は、ライヘルト社のU L T R A C U T S 型です。このULTRACUTSは、電子顕微鏡用のウルトラミクロトームとして内外で高く評 3 価されており、普及率の高い理由としては、機械の高精度による信頼性の高さと、操作性の良さによるものです。以下にこの機種の主な仕様を記述します。く仕様＞白動切削試料送り：全送り貴200mm 微動 0∼95nm（5nm目盛、電顕用超薄切）粗動 0．01∼2．5mm （0．01mm目盛、光顕用準薄切）ナイフステージ：（自動送り）前後方向 10mm 左右方向 25mm ナイフホルダー：手動移動ナイフブロック：ワンタッチ取付回転角3 6 0 度、逃げ角- 2 ∼＋1 5 度以上試料へッド：円弧動士22度又は-3∼ ＋47度軸回転 360度切削スピード：0.05∼100mm／sec、連続可変（LED表示）1，2， 50mm／sec、クリックストップ付戻しスピード：10,20,30mm／sec 3段切替切削ゾーン：0.1∼14mm連続可変（スタート及びエンドボタンにより設定）照明システム：蛍光灯照明、試料透過照明、バックライト照明の3 種の組み合わせにより7種の照明可能セクションカウンター：切削切片数及び総切削量をデジタル表示システム、セクションカウンター等の設定及びパネル表示警報装置：リターンストローク、前後送りエンドポイント時及びアーム送り残量20mm 以内で警告実際にULTRACUTSは、従来のものと比ベて、機械の自動化が進み初心者でも使いやすくなっており、また、照明システムの改善により、試料アブローチが容易になった点など、随所にユーザー側の要望が取り入れられ操作性が良くなっています。以上簡単に説明しましたが、使用を希望される方は電顕室首藤（TEL2202）まで御連絡下さい。 DNA合成装置および解析装置について分析部門亀田健治昨年、DNA合成装置および解析装置（いずれもファルマシア製）が機器センターに設置され、順調に運営されています。DNA合成装置につきましては、PCRプライマー、プローブ、シークェンス用蛍光プライマーなど、この一年問の合成実績は1 5 0 個以上にのぽります。また、利用講座は、内科学第一、内科学第二、内科学第三、病理学第一、生化学第二、教育学部などが利用してコントロールユニット：切削スピード、切片厚さ、カッティングゾーン、戻りスピード、リセット、照明 4 おります。そこで、設置されて一年ということで、DNA合成装置および解析装置の利用方法などを含めて紹介したいと思います。＜DNA合成装置＞合成は、プリン塩基をフェノキシアセチル基で保護修飾したP A C - アミダイド試薬により行っております。なお、アセトニトリルはメルク社のDNA合成用試薬を用いておりますが、それ以外の試薬はファルマシアの純正試薬を用いております。合成後は、合成DNAをサポートからアンモニアで溶出し、N A P - 1 0 カラム（ディスポのゲル濾過カラム）で精製した後、凍結乾燥してお渡ししております。また、合成DNAに260nm の吸収データと合成DNAの純度検定のためのHPLCパターンも添付しております。 PCRプライマー等に使用する場合は、この程度の精製で問題はありませんが、PCRを定量的に行う場合やシークェンス用蛍光プライマー、あるいは、プローブ等に使用する場合は、さらにHPLCによる精製が必要となります。合成依頼は、所定の合成依頼書（機器センターにあります）に必要事項を記入し機器センター事務室（TEL2207）またはDNA合成解析装置室（TEL2201）まで提出して下さい。また、合成依頼は随時受け付けておりますが、試薬の都合上、 20mer平均で10個以上の合成依頼がきた時点で合成を開始いたします。なお、お渡しできるのは合成開始から約1週問後となります。詳細は担当者（永利、亀田）に御相談下さい。＜DNA解析装置＞現在、シークェンスのためのシークェンス反応はファルマシア製のキットを用いて行っております。キットはAuto Read Sequencing KitとAuto‐Cycle Sequencing Kit の2種類発売されており、それぞれ100回分が１キットになっております。ただし、希望者には内箱50回分を実費でお分けしております。２つのキットは、それぞれ持徴がありサンプルにより使い分けが必要となりますので、詳細は担当者に御相談下さい。しかし、いずれにしてもテンブレートの精製度および量が解析の善し悪しに関係します。なお、テンプレートの量はAuto Read Sequencingではシングルストランドで1∼ 2mg，ダブルストランドでは5∼10mg，また、Auto Cycle Sequencingでは0．05∼4mg が必要となります。ゲル溶液とゲル板等の消耗品については、機器センターで用意しておりますが、他の利用者とのトラブルを避けるため高価ではありますが、ゲル板等の部品は利用講座で購入されることをお勧めします。また、ゲル溶液等の準備のため、利用される方は、利用２日前までに予約して下さい。ネットワーク談義インターネットを利用した遺伝子の検索 RI部門田中盛重ただちに、遅滞なく、すみやかに分室においても、図書館で行っているのと同じ様に、各種の文献検索ができます。近い内に、学術情報センターのID申請受付があります。将来に備えて、ぜひIDを取得しておいて下さい。インターネツトを利用して、海外のコンピューターにアクセスして文献を調べることは、すでに一般化しているのですが、分室では現在行っていません。理由は、データベースの使用料が必要だからです（とは言っても、国際回線の電話料金が要らない分だけ安くはつきます 5 が）。今回紹介するのは、文献ではありませんが、静岡県三島市にある国立遺伝学研究所（遺伝研）が提供している遺伝子情報のデータベース（DDBJ）を使用したホモロジーの検索例です。利用に先だって準備するものは、まず本学情報処理センターからワークステーションのアカウント（利用許可）をもらいます。次に、遺伝研のコンピューターのアカウントをもらいます。（前者は年間６千円、後者は今のところ無料）次に、必要な設備ですが大きく分けて３つの方法があります。 ①６階の分室のパソコンを利用する ②教室のパソコンを接続する ③自宅からモデムを使って本学のワークステーションにアクセスする（③の変形として、「直接DDBJにアクセスする」というのもありますが、電話料金がすさまじいことになります。）一応どれでも可能ですが、使用感にはかなり差があります。というのは、速度がそれぞれ①38．4K、②9．6K、③2．4Kですので、乗用車の乗り心地に例えますと、高級外車、国産小型車、廃車寸前の軽乗用車という感じがします。ただ、②③の場合は、一般のパソコン通信のソフトを使用するので、操作そのものは、たいへん簡単です。 ②を例に、操作の手順を簡単に紹介すると dpcmcs（7）％dpcmcs（7）teehimegw Trying‐・・（133.71.2.10） Connectedto ehimegw（133.71.2.10）． Escape character is no setting Suspend character is’^T’ SunOS UNIX（ehimegw）←センターワーク Lastlogin：Tue Mar913：28：43from dpcm 6 ehimegw％telnet133.39.16.65 Trying133.39.16.65…・ Connected to133.39.16.65．←DDBJに接続 Escapecharacter is， UTS TISP telnetd niguts login：motanaka Password： Terminaltype（vt100）： 0Inquiries shou1d be sent to→ddbi＠ddbj （1993.03.04） niguts％findget ddbj Welcometofindget ver．1.5（03／3l／1992）こうして、D D B J に接続でさたわけですが、ホモロジーを調べたい配列を所定の書式でファイルをしておさます。これにはいろいろなやり方がありますが省略します。作ったファイルをs181r．asとします。以下、ホモロジーの検索には、fastaを使用します。（他にも優秀な検索プログラムがあります） flat niguts% FLAT version1．3（06／90）by S． Miyazawa（smiyazaw％smlab.eg‐gunma‐ u.ac.jp＠rkna50.riken.niguts‐flat％days‐job fasta s181r.as＠gen＞d60＆ 3628 niguts-flat％could not open s60.as s181r.as：protein sequence not found これは、「s 1 8 1 r . a s に良く似ている遺伝子の配列を、GENBANKのデータベースから探してきて、d 1 8 1 r というファイルに書き込みなさい。その作業は、1 日仕事でいいステーションに接続 login：mtanaka Password： 6 ですよ。」という命令ですが、見慣れないのはdays‐jobと＆でしょう。この作業は、コンピューターにとっても、かなり重労働で時間を要します。詳しい説明は省きますが、UNIXの世界では、MS‐DOS場合と異なり、一度に複数の処理ができます。その優先順位を、days‐jobが表しています。この順位には、minutes‐job，hours‐job， days‐jobなどがあります。もちろん、全く何もつけないとそのまま処理に入ります。また、最後の＆を省くと、目の前で作業をしろということになりますが、回線の切断ができなくなります。先の３つのランクは、役所用語の「ただちに」「遅滞なく」「すみやかに」という、優先順位を示す副詞に似ています。私が、「何もなし」や「m i n u t e s ‐j o b （ただちに）」を避けて hours‐jobにしたのは、結果が翌朝までに出ればよいものなのを、やたらと急がせてコンピューターの負荷が大きくし他の利用者に迷惑をかけることを回避するためです。「3681」は、処理番号で、何かの事情で処理を停止するとさには、k i l l コマンドで、この処理番号を指定すると止まります。ともあれ、翌朝には結果が得られており、（途中経過は、自宅からアクセスして見ておきます）結果の入ったファイルを、転送のためのプロトコールを利用し、愛大＞as181r：396nt vs＠genhbrary searching gbpri.seq1ibrary 21485185nt in 19856sequences 0 nt in 0 sequences initn init1 ＜4 586 586：============ 97660483residuesin72994sequences mean initn score：37.3（8.35） score：37.2（8.06） 4368scores better than49saved，ktup：6， fact： 6 scantime： 0：05：19 Thebestscoresare： initn init l opt HUMATPGG Human gastric（H＋＋K＋） ATPase gen 57．0％identity in121nt overlap 90 100 110 120 as181rAGCTGGAGCCCCCGAATGCCCCAC TCTAGCGGCCTCTGCTTTGCGGGCC 8100 8110 8120 8130 （膨大なものですので、はしょっています）このように、ごく簡単な操作で、貴重な情報が得られます。ぜひ、試みて下さい。詳細など知りたい方は、分室まで連絡下さい。次回は、前述の「高級乗用車の乗り心地」の環境を全ユーザーに提供する医学部構内LANの構想についてお話いたします。このニュースをご覧になった皆様、 EMAILをお待ちしています。 JUNETmtanaka＠dpc.ehime -u.ac.jp NIFTY-SERVEMAF01530 PC-VAN WSF92841 の情報処理センターのワークステーションまで運びます。 -rw-r--r--1mtanaka 413Mar1812：01as181r -rw-r--r--1mtanaka 23152Mar1909：46d181r 以下、出力すればよいのですが、件数が多いと大変な量になります。パソコンのプリンターで打ち出していると、文字どおり日が暮れますので、現在は、ホスト用の出力装置を用いて、打ち出しています。 7 お知らせ平成５年度運営委員、部門長および専門委員の紹介 ○平成5年度運営委員は次の先生方です。委員長：植田規史（病理学第一）副委員長：西田弘（奇生虫学）委員：浜本研（放射線医学）木村茂（外科学第二）柴田大法（整形外科学）吉村裕之（機器センター）升野博志（医化学第二）恩地森一（内科学第三）出崎順三（解剖学第二） ○平成５年度の部門長および専門委員は次の先生方です。（○印は新部門長およぴ新専門委員です）ＲＩ部門部門長：○箕越靖彦（医化学第一）専門委員：中村洋一（生理学第一）志水泰武（医化学第一）升野博志（医化学第二） ○村尾眞一（病理学第一）加納誠（細菌学） ○村山信浩（衛生学）新開省二（公衆衛生学）長谷川均（内科学第一） ○大蔵隆文（内科学第二）中西公王（内科学第三）佐野輝（神経精神医学）後藤義則（小児科学）阿部康人（外科学第二）畠山隆雄（脳神経外科学）北川博之（産婦人科学）櫃本康夫（臨床検査医学）形態部門部門長：長門俊一（歯科口腔外科）専門委員：藤原隆（動物実験施設）竹内京子（解剖学第一）沖貞明（整形外科学）新盛英世（皮膚科学）分析部門部門長：○佐伯修一（臨床検査医学）専門委員：岩井将（医化学第一） ○鈴木洋司（医化学第二）玉井伴範（内科学第一） ○井上義一（内科学第二） ○村上司（内科学第三）森本武彦（小児科学） 8 ＭＥ部門部門長：三谷章（生理学第一）専門委員：立石憲彦（生理学第二） ○近藤弘一（公衆衛生学）村瀬研也（放射線医学）組織培養部門部門長：鳥居本美（寄生虫学）専門委員：黒河佳香（衛生学）織田英昭（泌尿器科学）戒能幸一（小児科学）資料作成部門部門長：○出崎順三（解剖学第二）専門委員：○柳瀬尚人（生理学第一）近藤万里（病理学第二）編集後記本格的な梅雨が続き、医学部外装工事と相まって、じめじめした生活環境となっております。３年間余り、機器センターの運営に御尽力賜りました片岡教授が任期を満了され、植田教授が新センター長として併任されることになりました。片岡先生には、大型機器の更新に大変な御骨折りをいただき、赤字経営の危機に頻しながらも大幅な利用料金の改訂を回避できましたこと、センター教職員一同感謝致しております。引き続き、ＲＩ安全管理主任者としてＲＩ施設の安全管理に御指導頂さますようお願い申し上げます。さて、政府の経済政策により研究教育のための補正予算が実施され、当医学部におきましても、特別設備費や大学院重点整備費などの大型予算が交付されようとしております。これに伴い、機器センターにもいくつかの最新鋭機器が導入される予定です。医学部も設立２０周年を目前に控え、今後の医学部の発展を目指した総合的な研究機器の設置計画が必要な時期かと思われます。若手研究者を含めた医学部構想を立案し、一層の飛躍を図るべき時かと存じます。このセンターニュースにおきましても、皆様方の御意見を積極的に取り上げたく考えております。（機器センター・吉村） 9