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Background
E' noto il ruolo protettivo delle HDL nel processo
aterosclerotico.
OSSIDAZIONE DELLE HDL IN
SOGGETTI CON DIABETE DI TIPO 2
E IN SOGGETTI CON INFARTO
MIOCARDICO IN GIOVANE ETA’
Silvia Burlina
Dipartimento di Medicina – DIMED
Università di Padova
Scopo dello studio
Valutare i livelli di MetO nelle apo A-I
di HDL di pazienti con infarto
miocardico (IM) prima dei 45 anni, di
pazienti diabetici di tipo 2, e di
soggetti sani.
L'apolipoproteina A-I (apo A-I), che rappresenta il 70% del
contenuto proteico delle HDL, gioca un ruolo cruciale nel
meccanismo inverso del colesterolo. (Francis GA et al, Acta,
2010)
Una serie di prodotti reattivi intermedi, come la
mieloperossidasi, sono in grado di ossidare determinati
residui di metionina dell'apo A-I (Met86, Met112 e Met148) a
metionina sulfossido (MetO). Tali modifiche determinano
una riduzione dell'apo A-I nella capacità di efflusso transmembrana del colesterolo mediato dal trasportatore A1
(ABCA1). (Panzebock U et al, J Biol Chem, 2005; Weissbach H et al ,
Acta, 2005)
Metodi (1)
Isolamento con ultracentrifugazioni sieriche
sequenziali (Beckman Instruments, Palo Alto,
California, U.S.A)
Dialisi e concentrazione con filtro Amicon
Ultra cel 10 K (Millipore Corporation, Billerica
U.S.A.)
Digestione mediante l’enzima tripsina
In revisione a International Journal of Cardiology
Metodi (2)
MS: mass spectrometry
MALDI: Matrix Assisted Laser Desorption Ionization
Laser
Piastra
Spettro MALDI dei peptidi ottenuti
dalla digestione delle HDL
Controlli
1.Il campione (A) è posizionato su
hn
una matrice (M) e disidratato su
una piastra MALDI.
2. Un fascio laser ionizza le molecole
della matrice.
AH+
Pazienti diabetici di tipo 2
3.L’interazione
provoca
una
ionizzazione delle molecole della
matrice generando un campo di
molecole del campione ionizzate
positivamente:
MH+ + A
Pazienti con IM < 45 anni
M + AH+.
+20 kV
In revisione a International Journal of Cardiology
In revisione a International Journal of Cardiology
Visione espansa (m/z 1283-1299) dello
spettro MALDI relativo ai peptidi contenenti
Met112
Peptidi contenenti MetO112
Caratteristiche dei pazienti studiati
Controlli
Controlli
(C)
(n=21)
Pazienti diabetici di tipo 2
Pazienti con IM
< 45 aa
(IM)
(n=23)
Pazienti con
diabete di tipo 2
(D)
(n=21)
P
C vs
IM
OX ApoA1
(%)
1.7±1.3
4.8±2.6
10.6±5.3
●
C vs
D
●●●
IM vs
D
●●●
Pazienti con IM < 45 anni
In revisione a International Journal of Cardiology
In revisione a International Journal of Cardiology
Grafico biplot delle principali
variabili dei pazienti studiati
Caratteristiche dei pazienti studiati
Sesso (M/F)
Età (anni)
Durata diabete
(anni)
Glicemia a digiuno
(mg/dl)
HbA1c (%)
TC (mg/dl)
LDL (mg/dl)
HDL (mg/dl)
Trigliceridi (mg/dl)
IM (no/yes)
Pazienti con IM
< 45 aa
(IM)
(n=23)
Pazienti con
diabete di tipo 2
(D)
(n=21)
6/15
41.4 ± 2.8
-
22/1
40.7±3.4
-
10/11
51.8±3.5
8.5±3.9
83.5±4.8
89.1±7.4
156.7±29.7
5.4±0.3
203.2±33.3
117.5±30.6
68.7±11.2
85.4±21.6
21/0
5.2±0.4
205.3±26.3
143.7±24.7
38.3±10.4
146.3±55.9
0/23
8.2±0.8
203.2±37.0
118.3±30.6
49.7±14.0
178.0±91.8
21/0
P
C vs
IM
-
C vs
D
-
IM vs
D
-
ns
ns
ns
-
-
-
ns
●●●
●●●
ns
●●●
●●●
ns
●●
ns
ns
●
-1
●●
-2
●●●
ns
●●●
●●
●●●
-
-
ns
-
= controlli
= pazienti con IM < 45 aa
= pazienti diabetici di tipo 2
5
4
3
HDL
C-HD L
Durata
Dura ti on diabete
2
OX_ApoA-1%
Ox
apoA-I
PC 2
Controlli
(C)
(n=21)
1
-3
-2
-1
1
2
3
4
5
TG
Trigliceridi
-3
-4
PC 1
In revisione a International Journal of Cardiology
In revisione a International Journal of Cardiology
Conclusioni
Vi è un’aumentata ossidazione delle HDL in pazienti ad
alto rischio cardiovascolare rispetto ai controlli,
indipendentemente dai livelli di HDL.
Nei pazienti con diabete di tipo 2 l’ossidazione delle HDL
correla con la durata di malattia e non con il grado di
controllo glicemico.
I livelli di MetO dell’apo A-I, misurati con metodologia
specifica ed accurata, potrebbero costituire un possibile
marker di rischio cardiovascolare.
GRAZIE PER L’ATTENZIONE

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