Scheda Tecnica

Biolife
Italiana S.r.l.
Scheda Tecnica
N°401307-rev.3 B I-3
07/2009 Pagina 1 di 2
CLOSTRIDIUM PERFRINGENS AGAR BASE
D-CYCLOSERINE ANTIMICROBIC SUPPLEMENT
KANAMYCIN POLYMYXIN B ANT. SUPPLEMENT
Terreno di base in polvere e supplementi
selettivi per l’isolamento di Clostridium perfringens
FORMULE TIPICHE
Clostridium Perfringens Agar Base (g/l)
Triptosio
15
Estratto di carne
5
Peptone di soia
5
Estratto di lievito
5
Ferro ammonio citrato
1
Sodio metabisolfito- bisolfito 1
Agar
13
D-Cycloserine Antimicrobic Supplement (x fiala)
D-Cicloserina
200 mg
Kanamycin Polymyxin B Antimicrobic Supplement (x fiala)
Kanamicina
6 mg
Polimixina B
15.000 U.I.
PREPARAZIONE
Sospendere 22.5 g in 450 ml di acqua distillata fredda, portare ad ebollizione sotto agitazione ed
autoclavare a 121°C per 15 minuti. Raffreddare a 50°C.
TSC Agar: Per la preparazione del TSC Agar ricostituire con le precauzioni dell’asepsi il contenuto di una
fiala di D-Cycloserine Antimicrobic Supplement (cat. n. 4240002) con 5 ml di acqua distillata sterile ed
addizionarlo al terreno di base.
SFP Agar: per la preparazione del SFP Agar ricostituire una fiala di Kanamycin Polymyxin B Antimicrobic
Supplement (cat. n. 4040005) ed addizionarla al terreno di base.
Per entrambi i terreni addizionare 50 ml di Egg Yolk Emulsion, mescolare con cura e distribuire in piastre
Petri, in ragione di 15 ml per piastra.
pH finale 7.6 ± 0.2
DESCRIZIONE
Clostridium perfringens provoca disordini gastroenterici caratterizzati da dolori addominali e diarrea senza,
di norma, febbre e vomito. L’infezione è di solito provocata dall’ingestione di carne ed alimenti a base di
carne (sughi) contaminati da feci o da altro materiale contenente C. perfringens e non opportunamente
cotti. La tossinfezione alimentare può essere diagnosticata con colture quantitative in anaerobiosi su
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alimenti e feci. La dose minima infettante è di 10 cellule/g di alimento. Per l’isolamento ed il conteggio di C.
perfringens negli alimenti, i metodi più diffusi nell’Europa continentale e nel Nord America, sono quelli che
utilizzano il terreno di Harmon e coll.: (Tryptose Sulfite Cycloserine - TSC - Agar) o il terreno di ShahidiFerguson con kanamicina e polimixina B (SFP Agar) che hanno sostituito i terreni di Angelotti (Sulfite
Polymyxin Sulphadiazine Agar) e di Marshall (Tryptone Sulfite Neomycin Agar), trovati inibitori per alcuni
ceppi di C. perfringens. Il TSC Agar è preparato aggiungendo al terreno di base, Clostridium Perfringes
Agar Base, il supplemento selettivo liofilo D-Cycloserine Antimicrobic Supplement e l’arricchimento Egg
Yolk Emulsion. Il terreno di Shahidi e Ferguson è preparato aggiungendo al terreno di base, il supplemento
selettivo Kanamycin Polymyxin B Antimicrobic Supplement e l’arricchimento Egg Yolk Emulsion.
IMPIEGO
Per il conteggio presuntivo di C. perfringens l’ICMSF consiglia la tecnica della semina in superficie del
campione su TSC Agar o su SFP Agar con rosso d’uovo e la deposizione di un secondo strato di terreno
senza rosso d’uovo, al di sopra dello strato inoculato. Per la conferma di C. perfringens si devono eseguire i
tests di mobilità di produzione dei nitriti e di liquefazione della gelatina.
Per l’isolamento ed il conteggio di C. perfringens negli alimenti operare secondo lo schema di lavoro
seguente:
• Inoculare le piastre con 0.1 ml delle diluizioni decimali del campione preparato in Peptone Water,
distribuendo in superficie con un tampone. Lasciare asciugare 5-10 minuti.
• Coprire lo strato inoculato con 10 ml di terreno preparato come sopra descritto ma senza rosso d’uovo.
Lasciare solidificare.
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07/2009 Pagina 2 di 2
• Incubare le piastre per 20-24 ore a 37°C in atmosfera anaerobia (5% CO2, 10% H2, 85% N2).
Per il conteggio presuntivo di C. perfringens scegliere le piastre contenenti da 20 a 200 colonie e
considerare come tali le colonie che si presentino nere, larghe e circondate da un alone opaco di
precipitazione del rosso d’uovo.
I tests di conferma comprendono:
• riduzione dei nitrati a nitriti (+)
• mobilità (-)
• liquefazione della gelatina (+)
CONTROLLO QUALITÀ SUGGERITO
(37°C - 24 h - Anaer.)
Controllo della produttività
C.perfringens ATCC 13124: crescita, colonie nere
Controllo della selettività
E.coli ATCC 25922: inibito
CONSERVAZIONE:
Terreno in polvere: conservare a 10-30°C al riparo della luce, in luogo asciutto. In queste condizioni il terreno è
valido fino alla data di scadenza indicata in etichetta. Non utilizzare oltre questa data. Una volta aperta la
confezione, conservare il prodotto mantenendo il tappo del contenitore ben chiuso. Eliminare se vi sono segni
evidenti di deterioramento della polvere (modifiche del colore, indurimento della polvere ecc.) Conservare il
terreno di base senza supplementi preparato in laboratorio per un massimo di 1 mese a 2-8°C.
Supplementi selettivi :conservare il fino alla data di scadenza indicata sull’etichetta, a 2 - 8°C.
PRECAUZIONI E SICUREZZA DEGLI OPERATORI
Terreno in polvere: il preparato qui descritto non è classificabile come pericoloso ai sensi della legislazione
vigente ma contiene sodio metabisolfito ad una concentrazioni >1% e come tale richiede la scheda di sicurezza,
che deve essere consultata prima dell’uso. Come per tutti i terreni in polvere anche la sua manipolazione del
deve essere effettuata con una adeguata protezione delle vie respiratorie. Non ingerire.
D- Cycloserine Antimicrobic Supplement: il preparato qui descritto non è classificato come pericoloso ai sensi
della legislazione vigente né contiene sostanze pericolose in concentrazioni 1%.
Kanamycin Polymyxin B Antimicrobic Supplement : il preparato qui descritto contiene kanamicina ed è
classificato come T (tossico) ai sensi della legislazione vigente. Consultare la scheda di sicurezza prima
dell’impiego.
I prodotti qui descritti sono per uso diagnostico in vitro e devono essere usati in laboratorio, da operatori
adeguatamente addestrati, con metodi approvati di asepsi e di sicurezza nei confronti degli agenti patogeni.
Sterilizzare i materiali inoculati dopo il loro uso e prima dell’eliminazione come rifiuto
BIBLIOGRAFIA
• Haushild, A.H.W. & Hilaheimer, A. (1974). App. Microbiol. 27, 78
• Harmon, S.M., Kautter, O.A. & Peeler, J.T. (1971). App. Microbiol., 22,688
• Shehidi, SA. & Ferguson, AR. (1971). App. Microbiol., 21, 500-606
CONFEZIONI
Terreno in polvere
4013071 Clostridium Perfringens Agar Base,
4013072 Clostridium Perfringens Agar Base,
Supplementi selettivi
4240002 D- Cycloserine Antimicrobic Supplement,
4240005 Kanamycin Polymyxin B Ant. Supplement,
100 g (2.3 L)
500 g (11.3 L)
10 fiale liofile, ciascuna per 500 ml
10 fiale liofile, ciascuna per 500 ml
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