Programma IT

INSEGNAMENTO: Metodologie diagnostiche di Biochimica e di Biologia molecolare
MODULO: METODOLOGIA DIAGNOSTICA MOLECOLARE
Obiettivi formativi
Scopo del corso è di introdurre gli studenti ai principi ed alle tecnologie di base ed avanzate della
biologia molecolare clinica, di illustrarne le modalità di applicazione nella diagnosi, nella
predizione, nella prognosi e nel supporto terapeutico delle principali patologie umane.
Programma
Programma in forma sintetica
Definizione e scopi della Biologia molecolare clinica; principali tecniche impiegate: la reazione
polimerasica ed i metodi di ibridazione; principali applicazioni a differenti alterazioni congenite ed
acquisite, comprese le neoplasie; prelievo, estrazione e conservazione dei materiali;espressione
proteica e metodi proteomici; tecnologie high-throughput, gene arrays, principi di pattern
recognition.
Programma in forma estesa:
Parte generale

La rivoluzione della Biologia Molecolare e il suo impatto sulla pratica della medicina.
La mappatura del genoma umano nel Progetto Genoma Umano.
 Potenzialità della Biologia Molecolare clinica nella predizione di malattie, nella diagnosi, nella
prognosi e nel guidare la terapia
 Visione generale sulle tecniche ad alta sensibilità basate sui metodi di amplificazione, quali
reazione polimerasica (PCR), branched-DNA (BDNA), ibridazione in situ fluorescente (FISH) e
spettroscopia di massa
Principi basici del meccanismo genico
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DNA e RNA, struttura e stabilità.
- Principali caratteristiche differenziali di DNA e RNA.
- Melting e annealing.
Organizzazione in vivo delle molecole di DNA e di RNA
Principali enzimi la cui funzione è associata agli acidi nucleici:
- Polimerasi
- Trascrittasi inversa
- DNA ligasi
- Desossi- e ribonucleasi
- Endo ed exo-nucleasi
- Endonucleasi di restrizione
 Replicazione del DNA trascrizione del DNA a RNA e modificazioni post-trascrizionali
 Traslazione di RNA a proteine, controllo trascrizionale
 Regolazione genica, sRNA, meccanismi epigenetici
 Meccanismi di riparazione del DNA
 Mutazioni del DNA
Principali tecniche di studio
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Estrazione degli acidi nucleici
Separazione Elettroforetica
Ibridazione degli acidi nucleici
Componenti di base
Sonde, cDNA, RNA
Condizioni di ibridazione
Metodi di rivelazione dell’avvenuta ibridazione, formati di ibridazione, fasi di ibridazione
- ibridazione su supporto solido,
- ibridazione dot/blot e reverse dot/blot,
- tecniche di ibridazione Southern e northern,
- ibridazione su microarrays,
- ibridazione in situ, FISH
 Metodi di amplificazione,
 Rivelazione dei polimorfismi,
 Sequenziamento del DNA
 Reazione polimerasica a catena – PCR e Real-time PCR (varie tecniche)
 Principali metodi impiegati in proteo mica (tipi di elettroforesi, cromatografia, spettrometria)
Elementi di bioinformatica

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