GE Healthcare Life Sciences Istruzioni per EasiCollect™ Foglio informativo del prodotto WB120462 Raccolta di campioni della mucosa boccale utilizzando il Dispositivo EasiCollect AvvertimentoUnicamente a scopo di ricerca. NON UTILIZZARE NELLE PROCEDURE DIAGNOSTICHE Introduzione EasiCollect è uno strumento multifunzionale per la raccolta e la conservazione di cellule della mucosa boccale. Le cellule sono catturate sull'applicatore spugnoso, prelevando un campione dall'interno di entrambe le guance e poi trasferendolo su una carta Indicating FTA™ presente all'interno del dispositivo. Le Carte FTA sono trattate con una miscela chimica proprietaria che rompe le cellule e consente loro di rilasciare il DNA. La stessa miscela chimica protegge il DNA da danni biologici o ambientali. Le Carte Indicating FTA contengono un colorante che diventa bianco quando sono applicati liquidi incolore alla carta. Ciò permette di disporre di un metodo facile per la localizzazione del campione. Conservazione Conservare il prodotto a temperatura ambiente. Dopo aver applicato i campioni, lasciar asciugare la Carta Indicating FTA, quindi riporla in un sacchetto multi-barriera (WB100036) a temperatura ambiente, in un contesto asciutto. Le carte con i campioni asciutti possono essere conservate per lunghi periodi di tempo in un sacchetto multi-barriera con un disseccante (WB100003). Suggerimenti utili: • Indossare in ogni momento guanti protettivi, quando si movimentano campioni biologici ed evitare di toccare la superficie del dispositivo di raccolta, al fine di prevenire qualsiasi tipo di contaminazione. • La raccolta dei campioni può essere migliorata se i soggetti evitano di mangiare, bere o fumare nei 30 minuti antecedenti alla raccolta dei campioni. Le caratteristiche principali del dispositivo EasiCollect sono illustrate nella figura riportata qui di seguito. Testina spugnosa Preparazione del dispositivo 1. Non aprire le confezioni prima dell'uso. Quando si raccolgono i campioni, indossare sempre guanti. 2. Aprire la guaina protettiva posta all'estremità della Carta FTA. Far scivolare verso l'esterno il dispositivo EasiCollect, lasciando l'estremità spugnosa nella confezione. 3. Registrare le informazioni identificative sul retro della Carta FTA ed estrarre completamente dalla guaina della confezione. Raccolta delle cellule della mucosa boccale 4. Tenere EasiCollect come mostrato (Figura 2). Posizionare la testina spugnosa in bocca e applicando una leggera pressione, passarla lungo la linea gengivale e sotto la lingua. Quando la testina spugnosa sarà bagnata di saliva, strofinare l'interno di ciascuna guancia per 15 secondi. Assicurarsi di sentire/vedere la guancia protrudere leggermente durante l'operazione di raccolta del campione. È di estrema importanza garantire che la testina spugnosa sia rivestita di saliva durante questa fase, al fine di consentire un ottimale trasferimento del campione. 5. Rimuovere la testina spugnosa dalla cavità orale. 6. Rimuovere con cura la copertura protettiva in plastica del supporto della Carta FTA (Figura 2) per scoprire la Carta FTA. 15 secondi Ogni guancia Figura 2 Trasferimento del campione 7. Ripiegare il dispositivo sul cardine (1) e spingere la testina spugnosa fino a farle toccare la Carta FTA (Figura 3). 8. Assicurarsi che la testina spugnosa sia disposta con il dispositivo di chiusura dello stelo nella posizione più bassa (2) e che sia bloccata sotto l'apposita linguetta (3). Cardine 9. Lasciare la testina spugnosa a contatto con la Carta FTA per 10 secondi. Sistema di bloccaggio dello stelo a 2 posizioni 3 Area di campionamento Linguetta per la testina Carta FTA 2 1 Figura 1 3 2 Figura 3 Posizione di asciugatura 10. Rilasciare la linguetta della testina spugnosa semplicemente flettendo il dispositivo (Figura 4). 11. Sollevare lo stelo fino alla posizione superiore del dispositivo di bloccaggio dello stelo (4), rimuovendo e allontanando la testina spugnosa dalla posizione di contatto con la carta FTA. Nota: Prima di trasportare i campioni, si raccomanda che siano lasciati asciugare completamente. Gli utenti dovranno determinare se tipi o volumi diversi di campioni o differenti condizioni locali richiedono tempi di asciugatura più lunghi o brevi. Per esempio, il tempo di asciugatura raccomandato per un campione di sangue umano intero è approssimativamente di tre ore a temperatura ambiente. Questo periodo di tempo è stato determinato seguendo il tempo di asciugatura di 125 µL di sangue umano intero a 18-22°C e al 60% di umidità relativa, utilizzando un metodo di perdita del peso del campione. Non sottoporre a riscaldamento per abbreviare il tempo di asciugatura. 12. Lasciare che il campione si asciughi. 4 Figura 7 Elaborazione del campione FTA PCR diretta 1. Rimuovere un punzone di 1,2 mm dalla Carta Indicating FTA, utilizzando un Harris Micro-Punch (WB100005), Harris Uni-Core Punch (WB100028) o un e-Core™ (WB100052) 2. Aggiungere i reagenti PCR al disco e procedere con il processo di amplificazione seguendo le istruzioni del produttore. Punch-In PCR 1. Rimuovere un punzone da 2,0 mm dalla Carta Indicating FTA, utilizzando un Harris Micro-Punch™ (WB100007) o un Harris UniCore™ Punch (WB100029) Figura 4 Controllo del trasferimento 13. Non appena asciutta, controllare la carta FTA e assicurarsi che il colore sia cambiato e diventato bianco all'interno dell'area del campione (Figura 5). 14. Il mancato cambiamento di colore indica che probabilmente non vi è stato un trasferimento del colore sufficiente da permetterlo e si dovrà, pertanto, ripetere la raccolta del campione con un dispositivo nuovo. Non procedere alla raccolta del campione con lo stesso dispositivo. 15. Il campione potrà, quindi, essere elaborato immediatamente o imballato a fini di trasporto o conservazione. Trasferito • Assicurarsi che il dispositivo di bloccaggio dello stelo sia nella posizione superiore, come mostrato per l'asciugatura e che la testina spugnosa sia stata rilasciata dall'apposita linguetta (Figura 7). Non trasferito 2. Lavare il disco punzonato con 200 μL di reagente di purificazione FTA (WB120204) tre volte per cinque minuti ogni volta. Gettare l'acqua di lavaggio: 3. Lavare il disco punzonato due volte con 200 μL -1 buffer TE (10 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, pH 8,0). Gettare l'acqua di lavaggio. 4. Aggiungere i reagenti PCR al disco e procedere con il processo di amplificazione, seguendo le istruzioni del produttore. Legale. GE, imagination at work e GE Monogram sono marchi registrati di General Electric Company. EasiCollect, e-Core, FTA, Micro-punch, Whatman e Uni-core sono marchi registrati delle società GE Healthcare. © 2013 General Electric Company – Tutti i diritti riservati. Pubblicato per la prima volta nel gennaio 2013. Figura 5 Guida alla risoluzione dei problemi Qualora non sia avvenuto un buon trasferimento del campionee l'areabianca non si sia prodotta, occorrerà rivedere quanto segue: • Assicurarsi che la testina spugnosa sia ben bagnata con la saliva prima di strofinare il dispositivo, poichè la saliva contribuisce al trasferimento del campione. • Assicurarsi che il dispositivo sia tenuto nella posizione di trasferimento del campione per 10 secondi senza interruzione (Figura 6). Controllare che la testina spugnosa sia collocata sotto l'apposita linguetta e che le posizioni di bloccaggio inferiori dello stelo siano utilizzate quando il dispositivo è nella posizione di trasferimento. In tal modo, si garantisce l'applicazione di una pressione omogenea in tutta l'area di campionamento. Tutti i beni e i servizi sono soggetti ai termini e alle condizioni di vendita dell'azienda di GE Healthcare che li fornisce. Su richiesta, è disponibile una copia di tali termini e condizioni. Contattare il rappresentate GE Healthcare locale per ottenere le informazioni più aggiornate. Per informazioni sull'ufficio di zona, visitare www.gelifesciences.com/contact GE Healthcare UK LimitedAmersham PlaceLittle Chalfont, Buckinghamshire,HP7 9NA, UK http://www.gelifesciences.com Uffici di GE Healthcare: GE Healthcare Bio-Sciences AB Björkgatan 30, 751 84 Uppsala, Svezia GE Healthcare Europe GmbH Munzinger Strasse 5, D-79111 Friburgo, Germania GE Healthcare Bio-Sciences Corp. 800 Centennial Avenue, P.O. Box 1327, Piscataway, New Jersey 08855-1327, USA Figura 6 GE Healthcare Japan Corporation Sanken Bldg. 3-25-1, Hyakunincho, Shinjuku-ku, Tokyo 169-0073, Giappone imagination at work 29094549IT AA 01/2013
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