Diagnóstico de laboratorio de cryptosporidiosis
Cryptosporidium spp.
Lineamientos básicos
A. Se deben muestrear múltiples muestras fecales (por lo menos 3) antes de reportar un resultado
negativo.
B. Para incrementar la recuperación de oocistos, las muestras fecales fijadas en formalina se deben
concentrar antes del examen microscópico (Ej. centrifugar 10 min a 500 × g cuando se utiliza el
procedimiento de concentración con formalina-acetato de etilo).
C. La selección de las técnicas diagnósticas dependen de la disponibilidad de equipo, reactivos, experiencia y consideraciones del tiempo y costo.
1. Frotis directo
Utilizando el microscópio de contraste de fases (DIC) los oocistos
se observan como estructuras pequeñas y redondas (4 a 6 µm)
similares a levaduras. No autofluorescen. Éste método es menos
útil para Cryptosporidium que para Cyclospora, especialmente
cuando los oocistos son tan pocos que pueden ocultarse entre las
heces.
2. Tinción ácido-resistente modificada
Los oocistos (4 a 6 µm) presentan una pared celular bien definida que se tiñe desde rosa tenue hasta rojo
intenso. Sin embargo, la tinción presenta variantes, en particular, en infecciones que se están resolviendo
los oocistos no captan el colorante (fantasmas). Los oocistos maduros pueden presentar hasta 4 esporozoítos perceptibles. Éste es un método práctico y fácil, además se puede mantener un registro permanente. Los artefactos pueden hacer confuso el diagnóstico.
Frotis fecal con oocistos de
Cryptosporidium parvum
teñidos con la técnica de
tinción ácido-resistente
modificada.
3. Ensayo directo de anticuerpos inmunofluorescentes (DFA)
Ésta técnica ofrece la más alta sensibilidad y especificidad posible y es considerada el patrón de oro por muchos laboratorios. Sin embargo, no se obtiene una
laminilla que pueda ser almacenada. Requiere de equipo especial (microscópio
de fluorescencia) y paquetes diagnósticos comerciales.
Oocistos de C. parvum marcados con anticuerpos inmunofluorescentes.
Diagnóstico de laboratorio de cryptosporidiosis
4. Inmunoensayo enzimático (EIA)
El EIA no requiere de habilidad al microscópio, es altamente sensible y específico, y es útil como prueba
de tamizaje para gran cantidad de especímenes. Sin embargo, puede requerir de equipo especial (lector
de placa de microtitulación) y paquetes diagnósticos comerciales. Este método detecta coproantígenos
de Cryptosporidium; por lo que los especímenes no deben ser concentrados antes de la prueba. Los
resultados cercanos a positivos y negativos dudosos se deben confirmar con la prueba DFA.
La calidad de los reactivos en los paquetes diagnósticos puede variar, o deteriorarse durante su almacenamiento;
es por eso que se requiere usar testigos externos para determinar que la prueba está funcionando correctamente.
Métodos para detección (no confirmación) de Cryptosporidium
Los oocistos se pueden detectar por los siguientes métodos, pero deben confirmar los resultados con las
pruebas diagnósticas descritas arriba.
A. Tinción de safranina
Los oocistos de Cryptosporidium a veces (no siempre) se tiñen de un color rojo-anaranjado brillante.
Este método se ha propuesto para Cyclospora, pero no se usa ampliamente para Cryptosporidium
porque los oocistos de Cryptosporidium no siempre se tiñen bien.
Frotis fecal con oocistos de Cryptosporidium parvum con teñidos con la técnica de safranina.
B. Tinción tricrómica
Los oocistos se pueden detectar, pero no confirmar con este método. Puesto que la tinción tricrómica es
parte de las técnicas de rutina para frotis fecales, en la mayoría de los laboratorios, el personal debe familiarizarse con la apariencia de Cryptosporidium teñido con tricrómica para que los oocistos sean detectados durante estos exámenes. Sin embargo, ese método de tinción no es adecuado para un diagnóstico
definitivo porque los oocistos aparecen sin teñir. Los oocistos se ven como estructuras pequeñas y redondas de 4 a 6 µm. Las técnicas diagnósticas descritas arriba sirven para confirmar la presencia de Cryptosporidium cuando se sospecha que aparece en un frotis fecal teñido con tinción tricrómica.

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