様式 C-19 科学研究費補助金研究成果報告書平成２１年４月１日現在研究種目：若手研究（Ｂ）研究期間：2006∼2008 課題番号：１８７９１３９４研究課題名（和文）口腔領域の侵襲に対する術前鎮痛剤投与効果の免疫組織化学的検討研究課題名（英文） The immunohistochemical study of the preoperative analgetic effect for the invasion of the oral field 研究代表者菊地和泉（KIKUCHI IZUMI）東京医科歯科大学・歯学部附属病院・医員研究者番号：００３９６９８８研究成果の概要：今回、正常歯髄および炎症歯髄の抜髄時における痛みの相違について、c-Fos タンパクの発現量を指標として下記実験を行った。6 週齢 Wistar 雄性ラットを用い、上顎第一臼歯の歯髄に LPS を貼付した群と無処置の群を作成した。その結果、LPS にて炎症を惹起した後に抜髄を行った群では c-Fos タンパクの発現が著しく増加している像が観察された。この結果より、炎症が惹起されている状況での抜髄処置は c-Fos タンパク発現を誘導しやすいことが明らかになった。交付額（金額単位：円）２００６年度２００７年度２００８年度年度年度総計直接経費 1,400,000 1,000,000 600,000 3,000,000 間接経費合 0 0 180,000 計 1,400,000 1,000,000 780,000 180,000 3,180,000 研究分野：医歯薬学科研費の分科・細目：歯学・保存治療系歯学キーワード：歯内治療・歯髄炎・免疫組織染色・c-Fos タンパク１．研究開始当初の背景歯痛はしばしば歯痛はしばしば日常生活を妨げる程に激しく、かつ体験する可能性が高い痛みである。歯内治療は歯科治療の一分野であり、歯痛からの解放と咀嚼機能の回復をもたらすものである。しかし、症例によっては、適切な処置がなされたにもかかわらず、術後に疼痛が遷延し患者の生活の質を著しく低下させることがある。こうした現象への対応は現在のところ対症療法のみであり、発現機序および対応策の解明が急務となっている。また、痛みは極めて主観的なものであり、患者のなかには非常に強く痛みを訴える者もいれば、明確な意味もなく鎮痛剤の服用を拒否する者もいる。こうした現象に対し、我々は客観的な科学的根拠を示し、対処しなければならない。２．研究の目的実験的に痛みのレベルを評価することは容易ではない。その多くは、電気生理学的手法あるいは臨床治検であるが、前者は基礎的な研究となり臨床に反映され難く、後者は実験条件が限定されるうえ、患者の主観的な要素が入り客観的な評価が難しいという欠点がある。FOS タンパクは、感覚神経の一次ニューロンが興奮すると、それを受けて二次ニューロン内に（ラットでは約 2 時間後に）発現することが知られている。このことから、 FOS タンパクを測定すれば、痛みの定量的な評価が可能になると言える。本実験の目的は、正常歯髄および炎症歯髄の抜髄時における痛みの相違について、c-Fos タンパクの発現量を指標として痛みを定量的に評価することである。３．研究の方法 (1) 6 週齢 Wistar 雄性ラット（n=24）をエーテル麻酔後、ペントバルビタールナトリウム（ネンブタール）の腹腔内投与による全身麻酔を施した。次いで、コントラアングルに装着したラウンドバー（#1/2）にて上顎第一臼歯を咬合面から露髄させた後、歯髄に LPS （E Coli 055:B5, Sigma）を貼付した群と K ファイル（25 号）を用いて抜髄のみを行った群を作成した。 (2) LPS を貼付した群は 1 時間経過後、歯髄組織を K ファイル（25 号）を用いて除去した。抜髄処置を行わなかった群をコントロールとした。3 つの実験群はそれぞれ n=8 とした。 (3) それぞれ露髄処置から 2 時間経過後、 4%PFA/PBS にて環流固定を行った。その後、侵害受容経路の中継核である三叉神経脊髄路核尾側亜核相当部位を観察部位として摘出した。すなわち閂上方 2mm の部位から下方 2mm の部位まで計 4mm の延髄を摘出し、さらに同じ固定液で浸漬固定した（4 度、 Overnight）。 (4) PBS にて洗浄、30%Sucrose に浸漬した後、OCT コンパウンドにて包埋、凍結した。凍結切片は 20μm にて作成し、抗 c-Fos 抗体（Oncogenge）を用いて ABC 法にて免疫組織染色を行った。４．研究成果 LPS にて炎症を惹起した後に抜髄を行った群では c-Fos タンパクの発現が著しく増加している像が観察された。一方、健全歯髄に抜髄処置のみを行った群においては若干の c-Fos 発現を認め、コントロール群においては c-Fos タンパクの発現はほとんど認められなかった。以上の結果より、炎症が惹起されている状況での抜髄処置は c-Fos タンパク発現を誘導しやすいことが明らかになった。すなわち、炎症歯髄の抜髄時には強い痛みが誘発されていると考えられる。臨床において、急性の歯髄炎が惹起している状態での抜髄処置の際には、術前の鎮痛剤服用は有効であると示唆された。５．主な発表論文等（研究代表者、研究分担者及び連携研究者には下線）〔雑誌論文〕（計 8 件） ① 吉岡隆知、石村瞳、菊地和泉、小林千尋、須田英明、根尖に適合するファイルサイズの決定、日本歯内療法学会雑誌、30 巻、 2009、査読有 ② 石村瞳、福元康恵、吉岡隆知、高橋英和、菊地和泉、須田英明ガンマ線照射が根管治療に及ぼす影響一根管洗浄効果および根管充填の封鎖性について、日本歯科保存学雑誌、51 巻、147-155、2008、査読有 ③ 菊地和泉、和達礼子、吉岡隆知、須田英、 3 種の根管用水酸化カルシウム材の除去性について、日本歯科薬物療法学会雑誌、 26 巻、14-18、2007、査読有 ④ 吉岡隆知、花田隆周、萩谷洋子、佐々木るみ子、菊地和泉、福元康恵、須田英明、大林尚人、歯科用小照射野 X 線 CT および歯科用実体顕微鏡による検査を併用した逆根管充填法における根尖病変の治癒経過、日本歯科保存学雑誌、50 巻、17-22、 2007、査読有 ⑤ 新井敦子、萩谷(川村)洋子、菊地和泉、吉岡隆知、小林千尋、須田英明、歯科用小照射野 X 線 CT および歯科用実体顕微鏡による検査を併用した逆根管充填法における根尖病変の治癒経過、日本歯内療法学会雑誌、28 巻、20-23、2007、査読有 ⑥ 中野生和子, 萩谷(川村)洋子、金子実弘、菊地和泉、吉岡隆知、須田英明歯根破折の診断におけるメチレンブルー染色の効果日本歯内療法学会雑誌 28 巻、16-19、 2007、査読有 ⑦ Yoshitsugu Terauchi、Le O’Leary, Izumi Kikuchi, Mami Asanagi, Takatomo Yoshioka, Chihiro Kobayashi, Hideaki Suda、Evaluation of the Efficiency of a New File Removal System in Comparison with Two Conventional Systems.、Journal of Endodontics、33 巻、585-588、2006、査読有 ⑧ Fukumoto Y 、 I.Kikuchi, Yoshioka T, Kobayashi C, Suda H 、 An ex vivo evaluation of a new root canal irrigation technique with intra-canal aspiration 、 International Endodontic Journal、39 巻 2 号、93-99、2006、査読有〔学会発表〕（計 18 件） ① 石村瞳、花田隆周、菊地和泉、吉岡隆知、小林千尋、須田英明、18 ヶ月水中保管された根管充填歯における歯根破折について、第 129 回日本歯科保存学会春季大会、 2008/11/7、富山国際会議場 ② 和達礼子、菊地和泉、須田英明、インシデントの経験の有無が次亜塩素酸ナトリウム水溶液およびラバーダムの使用に及ぼす影響、第 28 回日本歯科薬物療法学会、 2008/6/28、文京シビックホール ③ 吉岡隆知、石村瞳、菊地和泉、須田英明、大林尚人、上顎骨唇頬側面から歯根尖が突出した症例の診断と対応、第 128 回日本歯科保存学会春季大会、2008/6/6、新潟コンベンションセンター ④ 吉岡隆知、花田隆周、石村瞳、萩谷洋子、菊地和泉、小林千尋、須田英明垂直性歯根破折、第 29 回日本歯内療法学会 2008/5/25、東京歯科大学千葉校舎 ⑤ 菊地和泉、吉岡隆知、須田英明、大林尚人、フェネストレーションからの根尖突出の出現率、第 127 回日本歯科保存学会秋季大会、2007/11/9、岡山コンベンションセンター ⑥ 福元康恵、石村瞳、菊地和泉、吉岡隆知、須田英明、高橋英和、高線量放射線照射を受けたウシ象牙質における根管洗浄の効果、第 127 回日本歯科保存学会秋季大会、2007/11/8、岡山コンベンションセンター ⑦ Kikuchi Izumi, Yoshioka Takatomo, Suda Hideaki、 Diagnosis of extruded root ends through bone fenestration by cone beam computerized tomography、 13th Biennial Congress of the European Society of Endodontology、 2007/9/8、イスタンブール ⑧ 菊地和泉、吉岡隆知、和達礼子、須田英明、木下淳博、大林尚人、倉林亨、医歯学シミュレーション教育システムの歯科用 CT 操作マニュアルへの応用、第 26 回日本歯科医学教育学会総会･学術大会、 2007/7/7、長良川国際会議場 ⑨ 菊地和泉、塚越香、和達礼子、吉岡隆知、須田英明、根管貼薬後の薬剤投与についてのアンケート、第 27 回日本歯科薬物療法学会、2007/6/22、日本大学会館アルカディア市ヶ谷（歯学会館） ⑩ 吉岡隆知、武田美里、後藤早智、花田隆周、石村瞳、萩谷(川村)洋子、菊地和泉、小林千尋、須田英明垂直性歯根破折の原因に関する基礎的検討、日本歯科保存学会、2007/6/7、大宮ソニックシティ ⑪ 吉岡隆知、花田隆周、石村瞳、萩谷(川村) ⑫ ⑬ ⑭ ⑮ ⑯ ⑰ ⑱ 洋子、菊地和泉、小林千尋、須田英明、大林尚人、倉林亨、歯内療法における歯科用 CT の有用性、第 28 回日本歯内療法学会、2007/5/27、広島国際会議場福元康恵、石村瞳、麻薙万美、菊地和泉、吉岡隆知、須田英明、高橋英和、放射線照射が根管壁象牙質の洗浄効果に与える影響、第 124 回日本歯科保存学会秋季大会、2006/11/10、鹿児島市民文化ホール佐々木るみ子、菊地和泉、吉岡隆知、須田英明、歯科用実体顕微鏡および 3DX による検査を行った根周囲外科手術について、第 124 回日本歯科保存学会秋季大会、 2006/11/10、鹿児島市民文化ホール中野生和子、萩谷(川村)洋子、金子実弘、菊地和泉、吉岡隆知、須田英明、歯根破折の診断におけるメチレンブルー染色の効果、第 27 回日本歯内療法学会、 2006/7/29、徳島大学蔵本キャンパス新井敦子、萩谷(川村)洋子、菊地和泉、吉岡隆知、小林千尋、須田英明、歯根破折と根尖性歯周炎の X 線透過像による鑑別診断、第 27 回日本歯内療法学会、 2006/7/29、徳島大学蔵本キャンパス菊地和泉、和達礼子、吉岡隆知、須田英明、根管充填材料カルフィー・ペーストおよびカルシペックス II の除去について、第 25 回日本歯科薬物療法学会、 2006/6/24、高松市文化芸術ホール菊地和泉、吉岡隆知、和達礼子、須田英明、荒木孝二、俣木志朗、医歯学シミュレーション教育システム教材の歯科医師による評価、第 25 回日本歯科医学教育学会総会･学術大会、2006/6/16、ネ!ット U 仙台市情報・産業プラザ吉岡隆知、花田隆周、川村洋子、佐々木るみ子、菊地和泉、福元康恵、須田英明、大林尚人、根尖切除法における歯科用小照射野 X 線 CT および歯科用実体顕微鏡による検査、第 124 回日本歯科保存学会春季大会、2006/5/25、神奈川県民ホール〔図書〕（計 0 件）〔産業財産権〕 ○出願状況（計 0 件）名称：発明者：権利者：種類：番号：出願年月日：国内外の別： ○取得状況（計 0 件）名称：発明者：権利者：種類：番号：取得年月日：国内外の別：〔その他〕ホームページ等６．研究組織 (1)研究代表者菊地和泉（KIKUCHI IZUMI）東京医科歯科大学・歯学部附属病院・医員研究者番号：00396988 (2)研究分担者（）研究者番号： (3)連携研究者（研究者番号：）