MagCaptureTM RNA Pull Down Assay Kit 本キットは新規アビジン様タンパク質Tamavidin®2のアミノ酸改変体の一つでビオチン溶出が可 能な性質を持つTamavidin®2-REVを固相化した磁気ビーズと弊社独自の溶出用バッファーを組 み込んだキットです。 ビオチン化RNA（bait RNA）を利用したRNA Pull Down法に用いる事ができ、ビオチン化RNAを 含むリボヌクレオプロテイン（RNP）複合体を変性させることなく、ビオチン競合溶出によって回収 することができます。 そのため、SDSなどを用いた変性溶出法に比べ回収物への非特異的タンパク質の混入を抑え る利点があり、目的のRNAと相互作用するタンパク質の同定や機能未知な新規lncRNAの機能 解析を行うアプリケーションに有用です。 ＜Tamavidin®2-REV ～ビオチンとの可逆的結合性能～＞ Takakura, Y. et al.: "Tamavidin® 2-REV : an engineered tamavidin with reversible biotin-binding capability.", J. Biotechnol., 164(1), 19-25(2013). Tamavidin®2-REVは、新規アビジン様タンパク質「Tamavidin®2」の改変体です。ビオチンとの結合力 を低減することにより、可逆的なビオチン結合複合体を形成することができます。これにより、過剰ビ オチンの添加により、ビオチン化分子の競合溶出が可能です。 （従来のアビジン/ストレプトアビジンとビオチンとの結合力は非常に強固で、不可逆的に結合します） 【キット内容】 10回用 ○ RPD Capture Magnetic Beads ・・・500μL ○ RPD Wash Buffer ・・・55mL ○ RPD Cell Lysis Buffer ・・・25mL ○ RPD Reconstitution Buffer ・・・1,500μL ○ RPD Biotin Elution Buffer ・・・1,000μL 【操作手順 概要】 データ ～HOTAIR RNA を用いたRNA Pull Down Assay～ (kDa) 4% SDS溶液 溶出 キット添付ビオチン溶液 溶出 HOTAIR HOTAIR Mock Sample buffer溶出 Sample buffer溶出 キット添付ビオチン溶液 溶出 Mock 4% SDS溶液 溶出 HOTAIR M HOTAIR 本キット 0.1% Input Sample buffer溶出 M HOTAIR (kDa) Sample buffer溶出 : ベイトRNA 従来品 ストレプトアビジン磁気ビーズ Mock キット添付ビオチン溶液 溶出 HOTAIR キット添付ビオチン溶液 溶出 Mock 4% SDS溶液 溶出 Sample buffer溶出 Mock HOTAIR 4% SDS溶液 溶出 HOTAIR Sample buffer溶出 Sample buffer溶出 HOTAIR HOTAIR Sample buffer溶出 Mock 0.1% Input M WB 本キット ストレプトアビジン磁気ビーズ 0.1% Input 従来品 銀染色 : ベイト RNA 100 Ezh2 75 250 150 銀染色 100 ベイトRNA : ビオチン標識HOTAIR RNAセンス鎖 溶出 : Sample Buffer、4%SDS溶液、キット添付ビオチン溶液 サンプル: K562細胞（1×107細胞）のトータルセルライセート 75 50 Western Blot 一次抗体：抗Ezh2抗体 二次抗体：抗ウサギIgG(Fc), モノクローナル抗体, POD結合（code No. 016-23943） 37 25 従来品と比較して本キットでは低バックグラウンドでRNA結 合タンパク質を回収。 20 15 コードNo. 品名 規格 容量 希望納入価格（円） 297-77501 MagCaptureTM RNA Pull Down Assay Kit 遺伝子研究用 10回用 58,000 ■ MagCaptureTM Tamavidin®2-REV ■ MagCaptureTM HP Tamavidin®2-REV 本品はTamavidin®2-REVの磁気ビーズ結合品です。粒子径の異なる２種類をご用意しています。 ※ MagCaptureTM HP Tamavidin®2-REV は低粒子径タイプです。 データ ～HOTAIR RNA を用いたRNA Pull Down Assay/MagCaptureTM Tamavidin®2-REV SDS sample buffer Elution Antisense M MagCaptureTM Tamavidin®2-REV Sense (kDa) Antisense 従来品 Streptavidin 磁気ビーズ Mock WB Sense Antisense Sense Mock Antisense M Sense (kDa) Mock 従来品 Streptavidin MagCaptureTM 磁気ビーズ Tamavidin®2-REV Mock SDS sample buffer Elution 銀染色 100 250 Ezh2 75 150 100 Streptavidinとの性能比較 75 銀染色 ベイトRNA : ビオチン標識HOTAIR RNAセンス鎖 溶出 : Sample Buffer サンプル: K562細胞（5×106細胞）のトータルセルライセート 50 Western Blot 一次抗体：抗Ezh2抗体 二次抗体：抗ウサギIgG(Fc), モノクローナル抗体, POD結合（code No. 016-23943） 37 25 20 従来品と比較して本キットでは低バックグラウンドでRNA結合タン パク質を回収。 15 10 データ ～HOTAIR RNA を用いたRNA Pull Down Assay/MagCaptureTM HP Tamavidin®2-REV 銀染色 SDS sample buffer Elution WB MagCaptureTM MagCaptureTM HP Tamavidin®2-REV Tamavidin®2-REV SDS sample buffer Elution MagCaptureTM MagCaptureTM HP Tamavidin®2-REV Tamavidin®2-REV MagCaptureTM Tamavidin®2-REVとの回収量比較 銀染色 ベイトRNA : ビオチン標識HOTAIR RNAセンス鎖 溶出 : Sample Buffer サンプル: K562細胞（5×106細胞）のトータルセルライセート Western Blot 一次抗体：抗Ezh2抗体 二次抗体：抗ウサギIgG(Fc), モノクローナル抗体, POD結合（code No. 016-23943） MagCaptureTM HP Tamavidin®2-REV を用いることでRNA結合タン パク質の回収量（SDS sample buffer溶出）が向上した。 コードNo. 136-18341 133-18611 品名 MagCapture MagCapture 規格 容量 希望納入価格（円） Tamavidin®2-REV 遺伝子研究用 2mL 40,000 HP Tamavidin®2-REV 遺伝子研究用 2mL 58,000 TM TM Tamavidin®2 組換え体 シリーズ キノコの一種であるタモギダケ（Pleurotus cornucopiae）からクローニングされたアビジン様 ビオチン結合タンパク質Tamavidin®2のアミノ酸改変型のラインアップです。従来のTamavidin®2 の特長に加え、各製品それぞれに異なった特長がありますので、用途に応じて使い分けがで きます。 耐熱性 ※2 有機溶媒耐性 ビオチン結合速度定数 ビオチン解離速度定数 分子量 品名 等電点(pl)※1 Tamavidin®2 7.4 Tm=85℃ あり (1.0±0.5)×106 Tamavidin®2-REV 8 Tm=75℃ - (1.3±0.5)×106 (1.5±0.4)×10-5 約60kDa 6 (ka(M-1S-1)) (kd(S-1)) (4量体) 検出限界値以下 ※4 約60kDa Tamavidin®2-LPI 6 Tm=65℃ - (1.2±0.1)×10 検出限界値以下 約60kDa Tamavidin®2-HOT 7.23 高耐熱性 高耐性 ※3 (3.0±1.7)×105 検出限界値以下 約60kDa ※1 等電点：Tamavidin®2-LPIのみ実測値。他はアミノ酸配列より算出した値。 ※2 耐熱性(Tm値)：ビオチン結合活性が加熱前の50％となる20分加熱温度。Tamavidin®2-HOTについては、99.9℃、30分間加熱後も結合活性90％以上を保持する のでTm値の算出不可。 ※3 高耐性：40-50％ DMSO中。 ※4 検出限界値：5×10-6(kd(S-1)) コードNo. 209-18261 品名 205-18263 Tamavidin®2, recombinant 特長 規格 ‐ 203-18264 203-19401 209-19403 202-19351 208-19353 209-19361 205-19363 容量 1mg 希望納入価格（円） 5mg 25,000 25mg 120,000 1mg 18,000 5mg 70,000 8,500 Tamavidin®2-REV, recombinant ビオチンと可逆 的結合性 Tamavidin®2-LPI, recombinant 非特異的結合 低減性 1mg 12,000 5mg 48,000 Tamavidin®2-HOT, recombinant 超耐熱・有機溶 媒耐性 1mg 18,000 5mg 70,000 免疫化学用 ライセンスについて ・・・Tamavidin®は日本たばこ産業株式会社の登録商標です。Tamavidin®2は日本たばこ産業株式会社か らライセンスを受けて販売しております。 ●本文に記載しております試薬は、試験・研究用にのみ使用されるもので、「医薬品」、「食品」、「生活用品」などとして使用できません。 ●希望納入価格には消費税等が含まれておりません。 ●希望納入価格は予告なく変更する場合がございますがご了承下さい。 1 6 5 0 0 開 01
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