pEBMulti ベクター

簡単に Stable 株が作製できる ! この速さはクセになる !
Episomal 型複製ベクター
pEBMulti ベクター
簡単に安定発現株を樹立できる
宿主ゲノム DNA に組込まれない
シャトルベクター※として使用できる
※ 1 種類の抗生物質で大腸菌・動物細胞の
クローンを選抜できるベクター
本品は、霊長類 ( ヒト、サル )、イヌなどの細胞に導入する
遺伝子発現ベクターです。
本品は、Epstein-Barr Virus (EBV) 由来の複製起点
OriP と EBV Nuclear Antigen 1(EBNA1) 遺伝子の働
きにより、遺伝子導入細胞中において Plasmid が細胞分
裂後の娘細胞に分配される Episomal 型ベクターです。
pUC ori
pEBMulti-Hyg-RFP
pEBMulti-Hyg
-ΔEBNA1-RFP
高発現安定株
樹立まで約1週間!!
Hygromycin B選抜8日目のRFP発現細胞懸濁液
TK promoter
pUC ori
HygR
TK promoter
Neo/KanR
EBNA 1
pEBMulti-Hyg
SRα promoter
EBNA 1
pEBMulti-Neo
SV40 promoter
11,004 bp
10,224 bp
SV40 polyA
SV40 polyA
OriP
MCS
OriP
MCS
CAG promoter
CAG promoter
Multiple Cloning Site（MCS）
MCS シークスエンス用プライマー：現品説明書をご参照下さい。
AATTAACCCTCACTAAAGGGGTACCGGGCCCCCCCTCGAGGTCGACGGTATCGATAAGCTTGATATCGAATTCCTGCAGCCCGGGGGATCCACTAGTTCTAGAGCGGCCGCGACTCTAGA
KpnI
XhoI SalI
ClaI
EcoRV
NotI
AGAATTAACCCTCACTAAAGGGGTACCGGGCCCCCCCTCGAGGTCGACGGTATCGATAAGCTTGATATCGAATTCCTGCAGCCCGGGGGATCCACTAGTTCTAGAGCGGCCGCGACTCTA
KpnI
XhoI SalI
ClaI
EcoRV
BamHI
NotI
従来ベクターとの比較
安定発現株樹立までに要する期間（日数）
安定発現株樹立に要する抗生物質濃度
※1
安定発現株樹立後の獲得細胞数（Vero細胞）
大腸菌宿主の適用性
pEBMulti
Hygromycin B
G418
メリット！１week
100-500μg/ml 100-1,000μg/ml
4.5×10 6 個
ND※３
一過性発現ベクター
Hygromycin B
G418
２weeks
３ｰ４weeks
100-500μg/ml 100-1,000μg/ml
2×10 6 個
ND※3
XL10-Goldなど大型ベクターの
複製に適している大腸菌株
DH5α、JM109など
約10 kbp
約4-6 kbp
メリット！
可
不可
メリット！
不要
要
ベクターサイズ（汎用される平均的なサイズ）
マルチジーントランスフェクション、
遺伝子導入細胞からの導入遺伝子除去※2
安定発現細胞のゲノムへの挿入領域の確認
※ 1. ６ウェルプレートで細胞が 80％コンフルエントになるまで培養し、ベクターのトランスフェクション後 Hygromycin B 350μg/ml で 8 日間培養した。
※ 2. マルチジーントランスフェクション後の選抜において、
一過性発現ベクターの場合得られる安定発現細胞は 1 種類のベクターのみを保持していることが多く、
複数個の遺伝子を同時に保持している細胞を選抜しにくい。一方、EBNA ベクターの場合、導入した複数個の遺伝子を保持した安定発現細胞を容易に選抜
できる。
※ 3. ND：Not Determined
性状
OriP & EBNA1
EBNA1結合サイト
ベクターサイズ：約11 kbp
（pEBMulti-Hyg）
約10 kbp（pEBMulti-Neo）
精製法：塩化セシウム密度勾配遠心法
組成：10 mmol/l Tris-HCl(pH 8.0),1 mmol/l EDTA
濃度：1μg/μl
OriP
DNA結合/二量体ドメイン
大腸菌･動物細胞選抜抗生物質：
Hygromycin B（Code No.050-08121）
G418またはGeneticin（Code No. 057-08131）
NLS
EBNA1
90
Nuclease 混入チェック：電気泳動で確認済み
MCS プロモーター：CAG
327
459
607
クロマチン結合ドメイン
pEBMulti ベクター
による安定発現株
pEBMulti ベクターを用いた RFP 発現細胞のポピュレーション解析
pEBMulti-Luciferase
pEBMulti-ΔEBNA1-Luciferase
短期間で安定発現株を樹立
Drug
Screening
(4Days)
HEp-2 cells
FCM
HEp-2 cells (Control)
pEBMulti-Hyg-RFP
Hygromycin B
pEBMulti-Neo-RFP
G418
−
−
＋
5
4
3
2
1
0
Day 3
102
103
102
*73
1243
104
100
101
102
103
101
102
*88
1102
103
104
100
101
102
103
104
pEBMulti-Neo-ΔEBNA1-RFP
G418
−
＋
㻾㻟
103
㻾㻟
㻾㻠
㻾㻟
100
*7
14
100
101
102
103
*37
162
104
100
101
102
103
104
㻾㻞
101
㻾㻞
101
102
103
RFP
発現量
増強
100
101
102
103
104
pEBMultiにRFPを組込んだ発現プラスミド（pEBMulti-RFP）を作製し、HEp-2細胞に導入した。その後、
フローサイトメトリーを用いてRFP陽性細胞のポピュレーション解析を行った。
㻾㻞 RFP安定発現細胞の選抜が可能である。
抗生物質処理により、
またpEBMulti-RFP導入細胞は、EBNA1
欠損プラスミド（pEBMulti-ΔEBNA1-RFP）導入細胞と比較してRFP発現量が顕著に上昇したことから、
pEBMultiを用いることにより高発現の安定発現株を容易に選抜可能である。
データ提供：筑波大学大学院人間総合科学研究科三輪佳宏先生、田中順子先生
コード No.
品名
120
90
60
30
0
0
1
2
*RFP Positive Cells（％）
RFP Fluorescent Intensity (Av.)
3
4
5
6
7
EBNA1により短期間（7日）のLuciferase
の発現を確認した。継代操作なし。
Luciferaseの発現持続性
（長期）
74
104
Vero
（サル）
150
Days
*74
5
100
↓
㻾㻞
*7
100
102
101
㻾㻞
Day 11
Luciferaseの発現持続性
（短期）
EBNA1
発現
㻾㻠
㻾㻠
102
㻾㻠
㻾㻟
103
104
104
＋
Day 8
Hygromycin B ῧຍᚋ᪥ᩘ
EBNA1によって短期間で
安定発現株を樹立できた。
㻾㻠
㻾㻞
*8
78
100
104
pEBMulti-Hyg-ΔEBNA1-RFP
Hygromycin B
−
㻾㻠
Relative luciferase activity
100
101
播種
㻾㻟
㻾㻞
101
㻾㻞
*10
107
100
㻾㻟
100
101
㻾㻞
㻾㻠
Relative luciferase activity
㻾㻟
㻾㻠
102
103
㻾㻟
103
104
104
＋
Vero
（サル）
6
Viable cells（x106）
Transfection
pEBMulti-RFP
293T
（ヒト）
30
25
20
15
10
5
0
0
4
8
Days
12
16
EBNA1により長期間（16日）のLuciferase
の発現を確認した。継代操作あり。
容量
希望納入価格（円）
050-08121
pEBMulti-Hyg
20μg
60,000
057-08131
pEBMulti-Neo
20μg
60,000
●本文に記載されております試薬は、試験、研究の目的のみに使用されるもので、
「衣料品」、
「食品」、
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●希望納入価格には消費税等が含まれておりません。
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支店 103 - 0023
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東海営業所
筑波営業所
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東京都中央区日本橋本町四丁目５番１３号（03）3270 - 8243（試薬学術部）
（092）622-1005（代）中国営業所
（082）285-6381（代）
（052）772-0788（代）横浜営業所
（045）476-2061（代）
（0298）58-2278（代）東北営業所
（022）222-3072（代）
（011）271-0285（代）
フリーダイヤル：0120 -052 -099 フリーファックス：0120 -052 -806
10Y05 開 01K

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