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TOYOPEARL① AF‐ rProtehAHC‐ 650Fからのリガンド漏出に関する検討
蜘
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TOYOPEARLAF‐ rProtehAHC‐ 650F
TOYOPEARL AF‐ rProt(〕 h A HC‐ 650Fは、
高吸着タイプの耐アルカリ性ヅコンビナント
Proteh A固定化担体で、抗体医薬品の精製に
適しています。一般に PrOtein A充填剤を用いた
精製では、抗体を中性溶液で吸着させ、酸性溶液
で溶出させますが、その際に、担体から PЮ teh
Aリガンドが漏れ出し、精製液中に混入する可能
性が指摘されています。
本報では、精製における種々のパラメータが
TOYOPEARL AF‐ rProteh A HC‐ 650Fのリガ
ンド漏出量に与える影響について調べました。合
わせて、TOYOPEARL AF‐ rProteh A‐ 650F
(高流速対応タイプ)、他社品 (アガロースベース)
Dedgn‐ Expertにより最適化された組み合わせ
にて測定し、そのデータを解析することにより、変
動の影響を調べました。Proteh Aリガンド濃度の
測定は EHSAキットを用いました。
図 1に、溶出pH、抗体負荷量の変化がリガンド
漏出量に与える影響を 3水準の抗体負荷濃度で
調べた結果を示します。
pHが低くなるほどリガンドの帰出量が多くなる
傾向が見られましたが、ほとんどの条件において
漏出量は 10 μg′ L以下でした。
図 2、 3に他社品を含めた 3種類の担体につい
て、2種類の溶出用緩衝液 (クエン酸塩、酢蜘
での漏出量を比較した結果を示します。
TOYOPEARL AF‐ rPЮ h AHC‐ 650Fでは、
との漏出量もそれぞれ比較しました。
各担体を充填したミニカラム RoboCol― n(200
t(〕
リガンド漏出量が非常に少ないことがわかります。
μLlを用い、全自動溶液分注システム坐 can社
Freedom EVOにて測定しました。
それぞれのパラメータは、溶出pH、抗体負荷量、
抗体負荷濃度としました。それぞれの変動範囲を
表
1に示します。実験計画法 (DOE)ソフトウェア
表 1パラメータとその変動範囲
パラメータ
溶出 pH
(クエン酸塩緩衝液および酢酸塩緩衝液)
抗体負荷量 (gた咆d)
!ヽl直
最′
抗体負荷濃度 (gた )
225
中心値
帥
275
3.25
375
4.25
10.0
200
2.50
300
475
400
025
500
925
7.00
リガンド漏出量(μ gた )
０
４
０
４
40
５
３
５
３
全
Φ？望∪咽憚ば逢遷
6
8
4
6
4
2
4
０
３
61
０
３
8
2
士
￨
５
２
５
２
￨
０
２
25
30
35
30
EIution pH
35
40
30
EIution pH
抗体負荷濃度:475gに
抗体負荷濃度:250gた
35
40
EIution pH
抗体負荷濃度 :7.00gた
図 1各抗体負荷濃度におけるリガンド漏出量 (クエン酸塩緩衝液)
(TOYOPEARLAF― rProtein A HC-650F)
リガンド漏出量(μ gた )
抗体サンプル濃度: 475g/L
０
４
０
４
40
５
３
５
３
175
０
３
150
15
125 4 100
０
３
会
ω？望∪嘲憚ばモ堺
200
50
５
２
５
２
30
35
０
２
０
２
26
40
25
30
TOYOPEARLAF― rPЮteinA
35
40
25
EImon pH
EIution pH
図2
35
40
EIuton pH
TOYOPEARLAFギ Protein
HC‐ 650F
30
他社品 (アガロースベース )
A 650F
各担体からのリガンド漏出量 (クエン酸塩緩衝液)
抗体サンプル濃度: 475gた
リガンド漏出量(μ gた )
０
４
０
４
５
３
５
３
５
０
３３
100
50
０
３
０
３
今
Φ？コ
う︶
嘲悼ば逢螺
125
30
35
20
５
２
５
２
10
30
35
40
25
30
EI面 on
EIutlon pH
TOYOPEARLAF‐ rPЮ teinA
０
２
０
２
25
HC 650F
図3
35
40
25
pH
TOYOPEARLAF‐ rProtein
30
35
40
EIution pH
A‐ 650F
各担体からのリガンド漏出量 (酢酸塩緩衝液)
他社品 (アガロースベース )

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