VL 5 - Innate phagocytosis and antigen presentation

Clinical case
A 16 year old boy has an small accident with a scratch at the
right hand.
Few Hours later: around the wound 3 cm Erythema with
swelling/edema.
Wound and surrounding appears to be warmer and painful.
Rubor
redness
Tumor
swelling
Calor
warming
Functio laesa
loss of function
Celsus ca 30 AC
Galen ca 150 AC
Dolor
pain
What can trigger an inflammation?
pathogen
infection
Injury, mechanical stress, Trauma
Cell death – DANGER!
Activation of the immune system
Elimination of
pathogen
Removal of
dead cells
What can trigger an inflammation?
pathogen
Typical
Biochemical
structures=
patterns
Injury, mechanical stress, Trauma
PAMPs=
DAMPs=Alarmine
Pathogen
Associated
molecular
patterns
Damage
associated
molecular
patterns
Pattern recognition receptors = PRRs
(soluble and cell-associated)
Activation of the immune system
Elimination of
pathogen
Removal of
dead cells
Mustererkennungrezeptoren (PRRs)
•
membrangebundene PRRs
scavenger Rezeptoren
Toll-like Rezeptoren
C-Typ-Lektin-Rezeptoren
Erkennung nach Opsonisierung:
mit Antikörpern: Fc-Rezeptoren
mit C3b: Komplement-Rezeptoren
CR3
•
cytosolische PRRs
NOD-like Rezeptoren (NOD1, NOD2)
RIG-I-likeRNA-Helikase
•
sezernierte Proteine
Collektine: (gehören auch zu C-Typ-Lektinen)
Mannose-bindendes Lectin (MBL) und surfactant
protein A, D (SP-A, SP-D)
Ficoline
Pentraxine: Serum Amyloid, C-reaktives Protein,
•
endozytierende Rezeptoren
•
signalgebende Rezeptoren:
 adaptive Immunantwort
(Expression von Cytokinen ,
kostimulatorischen Proteinen
•
Komplement-Aktivierung
Inhibition of virus replication by IFNa/b
IFNa/b
2-5OA
RNAseL
Degradation of dsRNA
PKR
eIF2-p
PKR = RNA-dependent protein kinase
2-5OA = 2´-5´ oligoadenylate synthetase
translation
Alarmins = DAMPs
(damage/danger associated molecular patterns)
Necrotic dying cells release danger signals
ECM
infection
MSU
Cell death
Inflammasome
activation
ATP
Trauma
Injury
burn
DC
HMGB1
HSPs
inflammation
Plasma enzymes
HMGB = high mobility group B
HSPs = heat shock proteins
MSU = monosodium urate; uric acid crystals
ECM = extra cellular matrix
ECM
Degradation
(e.g. Hyalunoric acid)
TLR
Stimulation
(also other
receptors)
cytokines
Partikel, die zum lysosomalen Schaden (und damit mitochondrialen Stress) führen,
aktivieren das Inflammasom und damit Entzündung
Beispiele: Harnsäurekristalle (Gicht), Asbest, Nanopartikel (Kosmetika),
Aluminiumsalze (Adjuvanz)
fMet
mtDNA
DAMPs get released by necrotic but not apoptotic cells
DAMPs can get inactivated during Apoptosis
Summary PRR signaling
pathogen
3) Sekretion of pro-inflammatory mediators
by immune cells (Makrophages, Dendritic cells)
bioactive lipids
(Thromboxanes,
Prostaglandines,
leukotriens)
Vasodilation
Higher blood circulation
rubor=redness
cytokines
Activation of
local endothelial
cells
chemokines
attract
„gorging“ phagocytic
cells
tumor=Swelling
Synthesis
of bioactive
Lipids
Pharmacological
Targets:
Phospholipase A2
Cyclooxygenase (COX)
Ibuprofen
Gewebe (Haut)
Haut
(Epithel)
Komplement
aktivierung
MΦ
Mast
zelle
Histamin
Blutgefäß
DCs
PGs
Öffnung
Vaso
Tight
dilatation junctions
Chemokine
Zytokine
(z.B. TNFa, IL-1) (z.B. IL-8 = CXCL8)
Influx
C +AK
Induktion
Influx
Adhäsions
Granulozyten
moleküle
PAMPs = pathogen associated molecular patterns
DAMPS = danger/damage associated molecular patterns
PRRs = pattern recognition receptors
Gewebe (Haut)
Haut
(Epithel)
Komplement
aktivierung
MΦ
Mast
zelle
Histamin
Blutgefäß
DCs
PGs
Öffnung
Vaso
Tight
dilatation junctions
Chemokine
Zytokine
(z.B. TNFa, IL-1) (z.B. IL-8 = CXCL8)
Influx
C +AK
Induktion
Influx
Adhäsions
Granulozyten
moleküle
PAMPs = pathogen associated molecular patterns
DAMPS = danger/damage associated molecular patterns
PRRs = pattern recognition receptors
neutro
neutro
LFA-1
ICAM-1
TNFa, IL-1
CXCL8= IL-8
Macro
PAMPs
Clinical case development
• Afternoon: ague (shivering fever) 38,5 oC.
Local inflammation signs enhanced.
• Additonally signs of Lymphadenitis and
swelling of lymphnodes.
• Medic prescribes Antibiotics (Ampicillin) and
lokal cooling Kühlung.
Start of acute phase response
„Warning“ remote response
cytokines
Tumor Necrosis
Factor alpha (TNF-a)
Interleukin-1 (IL-1)
Pyrogene cytokines
Interleukin-6
(IL-6)
Granulocytes/Monocytes
Colony Stimulating factor
GM-CSF
Hypothalamus
Temperature
Set point changes
Liver
Synthesis of
Acute-Phase-Proteins
Bone marrow
New synthesis of
Phagocytic cells
Fever
u.a. Opsonisation
„Linksverschiebung“
Akut Phase Proteine
Opsonisierung:
Markierung von Erregern
durch Bindung an Erregerstrukturen
für die erleichterte Phagozytose
Beispiele:
Collectins:
C reaktives Protein (CRP)
mannose binding protein (MBP)
serum amyloid protein (SAP)
surfactant proteins (SP-A SP-D)
Komplement C3 (C3b)
Energy for the immune system
Adipocyted
Lipolyse
LipoproteinlipaseActivity
Lipid metabolism
Muscle cells
IL-1 and
TNF-alpha
Protein
metabolism
Appetite
cachexia and Wasting
Makrophage functions
1) Secretion of pro-inflammatory mediators
a) cytokine
b) chemokines
c) bioactive lipids
2. Phase: attraction/accumulation
of more/other immune cells
2) Phagocytosis
3) Killing of phagocytosed pathogen
Phagozytosis receptors
for opsonized pathogenes
? CRP-Rezeptor (CD32??)
? MBP-Rezeptor (CD14??)
CRP
MBP
Fibronektin
Komplement
(C3b)
Integrine
„Pathogene
Oberfläche“
C3b
CR1 (CD35)
Antikörper
Fc-Rezeptoren
(CD16; CD32; CD64)
Opsonisierungsprinzip
Makrophagen
Phagozytosis receptors
for non-opsonized pathogenes
Scavenger-Rezeptoren:
SR-A I+II
MARCO
Lektin-type-Rezeptoren:
Mannose Rezeptor
b-Glukan-Rezeptor (Dectin-1)
LPS-Rezeptor
CD14
Phagozytose-Rezeptoren
für opsonisierte Pathogene
? CRP-Rezeptor (CD32??)
? MBP-Rezeptor (CD14??)
CRP
MBP
Fibronektin
Komplement
(C3b)
Integrine
„Pathogene
Oberfläche“
C3b
CR1 (CD35)
Antikörper
Fc-Rezeptoren
(CD16; CD32; CD64)
Opsonisierungsprinzip
Makrophagen
Phagozytose
1) Aufnahme des Erregers
- Pseudopoiden
- Aufnahme in die Zelle
- Ablösung von Zellmembran
2) Verschmelzung mit Lysosom
- Phagolysosom
- saurer pH
3) Abtöten des Erregers
- oxidative burst
(O2-Radikale; NO)
4) Abbau der Erregerbestandteil
- Enzyme
(Hydrolasen, Proteasen, etc...)
Principles of KILLING
ROS-formation
ROS = reactive oxygen species
„respiratory burst“
Stickstoffoxid-abhängiges
Abtöten
Trotz „unfreundlicher“
Bedingungen
Überleben
von intrazellulären
Bakterien
Beispiele:
Mycobakterien
tuberculosis
leprae
Phagozytose nicht möglich-Was nun?
Parasiten z.B. Würmer
„Frustrierte“ Phagozytose
Degranulation
C3a
C5a
Fce
IgE
Mastzellen
Eosinophile
Basophile
Phagozytose nicht möglich-Was nun?
Hermetisch „Abriegeln“
Granulom
What happens if you have a mutation in the NAPDH-Oxidase
Chronic granulomatosis
Gewebe (Haut)
Haut
(Epithel)
Komplement
aktivierung
MΦ
Mast
zelle
Histamin
Blutgefäß
DCs
PGs
Öffnung
Vaso
Tight
dilatation junctions
Chemokine
Zytokine
(z.B. TNFa, IL-1) (z.B. IL-8 = CXCL8)
Influx
C +AK
Induktion
Influx
Adhäsions
Granulozyten
moleküle
PAMPs = pathogen associated molecular patterns
DAMPS = danger/damage associated molecular patterns
PRRs = pattern recognition receptors
Von der angeborenen zur erworbenen Immunität:
Transport von Erregerbestandteilen zum Lymphknoten
TLR
Von der angeborenen zur erworbenen Immunität:
Lymphknoten – Treffpunkt der Immunzellen
Activation of inflammation by „Danger“
is required to initiate an immune response
apoptotic
cell death
necrotic
cell death
NO
danger
Damage
(DAMPS)
DC
Pathogen
(PAMPS)
DC
Ag
presen
tation
T
soluble
Mediators
(e.g. cytokines)
Ag
presen
tation
costimulation
T
Lymphe und Lymphbahnen
•
Lymphe: wasserklare Flüssigkeit; nur viszeral durch Chylomikronen milchig getrübt;
bis 2 L/d werden in die Blutbahn eingespeist
•
Gefäße und Leitungen, welche Flüssigkeit der Gewebe aufnehmen und zurück zur
Blutbahn bringen (überwiegend linke Schlüsselbeinvene)
Immunologie-Vorlesung
MHC und Antigenpräsentation
•
Haupthistokompatibilitätskomplex (MHC, major histocompatibility complex)
•
Antigen-Prozessierung
•
Professionelle Antigen-präsentierende Zellen: Dendritische Zellen, B-Zellen und
Makrophagen
soweit nicht anders angegeben, Abbildungen
aus Janeway´s Immunobiology, Garland Science,
8.ed. / 2008
Antigen presentation
via
Major histocompatibility Antigens
responsible for Transplant rejection
Major histocompatibility complex = MHC
(all spezies)
In Humans they are named:
Human Leukocyte Antigen = HLA
Erworbene Immunität:
Aktivierung von CD4+ T-Helfer-Zellen
Extrazelluläre
Erreger
Antigen präsentierende Zelle
• Extrazelluläre Erreger werden in endozytotischen Vesikeln prozessiert
und über MHC Klasse II Moleküle CD4+ T-Helfer-Zellen präsentiert.
• MHC Klasse II Moleküle werden nur von Antigen präsentierenden Zellen
exprimiert (Dendritische Zellen, Makrophagen, B-Zellen)
MHCII-presentation
Erworbene Immunität:
Aktivierung von CD8+ zytotoxischen T-Zellen
Infizierte Zelle
viral
protein
Major
Histocompatibility
Complex
• Intrazelluläre Erreger werden durch das Proteasom prozessiert und
über MHC Klasse I Moleküle den CD8+ zytotoxischen T-Zellen präsentiert.
• MHC Klasse I Moleküle werden von allen Körperzellen exprimiert
MHCI-presentation
Antigen-Präsentation von cytosolischen Antigenen über MHC-I
•
fehlgefaltete cytosolische (und virale) Proteine werden ubiquitiniert und im Proteasom gespalten
•
über einen ABC-Transporter (TAP) ins ER transportiert
•
dort an MHC-I-Moleküle gebunden und zur Zelloberfläche transportiert
Viruses have evolved different evasion strategies for MHCI escape
MHC class I
MHC class II
HLA-A, B und C
= HLA-DR, DP und DQ
Presentation of endogenes Antigens
(host, Tumors, Viruses)
Presentation exogenes Antigens
(Bakterien, Pilze etc.)
all nucleated cells
Only on specialized
Antigen-presenting cells
(=APCs)
(DCs, Makrophages; Monocytes,
B-cells)
Recognition by
cytotoxic
T-Lymphozyten (CD8+)
Recognition by
T-Helper
Lymphozyten (CD4+)
Professionelle antigenpräsentierende Zellen
Dendritische Zelle
FcR, CR, Mannose receptors, DEC-205
phagocytosis
Viral Infection
macropinocytosis
endocytosis
Endosomes/lysosomes
cross presentation
Cytosol
 MHC-I
 MHC-II
starke Induktion der
Expression von MHC-II
und B7 durch verschiedene Rezeptoren
(TLR, scavenger receptor,
CR, MMR), geeignetes
Wanderungsverhalten
(treffen T-Zellen in den
Lymphknoten
Makrophage
phagocytosis FcR, CR, Mannose receptors
Endosomes/lysosomes MHC-II
B-Lymphozyt
kostimulatorisches
Molekül B7.1 wird durch
LPS induziert
BCR
B cells only internalize antigens
that bind to BCR.
MHC-II stark exprimiert
Induktion der Expression
von MHC-II und B7 durch
verschiedene Rezeptoren
(TLR, scavenger receptor,
CR, MMR)
 MHC-II
How can DCs prime naive CD8+ T cells
for viral antigens ?
MHC class I
MHC class II
HLA-A, B und C
= HLA-DR, DP und DQ
Presentation of endogenes Antigens
(host, Tumors, Viruses)
Presentation exogenes Antigens
(Bakterien, Pilze etc.)
all nucleated cells
Only on specialized
Antigen-presenting cells
(=APCs)
(DCs, Makrophages; Monocytes,
B-cells)
Recognition by
cytotoxic
T-Lymphozyten (CD8+)
Recognition by
T-Helper
Lymphozyten (CD4+)
Crosspresentation (viral epitopes for naive CD8+ T cells)
MHC-Molecules have a similar structure
Peptid-binding MHC-I
Region (Polymorph)
Immunoglobulinlike region
(non polymorph)
MHC-II
b2 Mikroglobulin
Transmembranär
MHC-Molecules have a similar Structure
MHC class I
HLA-Klasse I
- Präsentiert Peptide, die von der Zelle gebildet werden
- Peptide von 8-9 Aminosäuren
- Auf allen Körperzellen vorhanden
- Rezeptor für CD8-Positive Zytotoxische „Killer“- T-Zellen
Ausnahme:
Dendritische Zellen können auch Peptide von aussen aufgenommenen
Proteinen auf Klasse I präsentieren (CROSS-PRIMING)
- „Priming von zytotoxischen CD8 T-Zellen in der primären Immunantwort
- Mechanismus noch unklar
MHC-Moleküle haben eine ähnliche Struktur
MHC class II
HLA-Klasse II
- Präsentiert Peptide die von der Zelle aufgenommen werden
(Phagozytose oder Pinozytose)
- Peptide von 13 und mehr Aminosäuren
- Auf Antigenpräsentierenden Zellen vorhanden
- Rezeptor für CD4-Positive Helfer- T-Zellen
MHC-Molecules are polygenic
There are 3 major gene loci for each class of MHC-Molecules
Ch. 6
Ch. 17
MHC-Molecules are polymorphic
There are several alleles for each Gene insight the population.
MHC-Molecules are polymorphic
There are several alleles for each Gene insight the population.
Expression of MHC allelel is codominant
How many different MHC-I molecules are expressed on each cell?
How diverse are your individual MHC molecules?
How many different MHC-I molecules are expressed on each cell?
How can we nevertheless achieve to present a wide range of different epitopes??
Only Anchor-amino acids must fit
Example of HLA-I Allel specific Peptides
Are we able to present each theoretical possible epitope?
Bindung der Peptide an MHC-I und II
MHC-I
MHC-II
Peptid (8-10 AS) bindet mit seinen Enden
passgenau in der Furche
Peptid ( 13 AS) kann auf beiden Seiten
über die Furche ragen
Bindung über C/N-Terminus, Ankerreste
(z.B. C-terminale AS hydrophob)
Ankerreste an verschiedenen Stellen
innerhalb des Peptids
Peptide aus Abbau von fremden (und
eigenen) Proteinen im Proteasom (z. B.
von Viren infizierten Zellen
Peptide von über Endozytose
aufgenommenen und prozessierten
Proteinen
Beispiel (abhängig vom
jeweiligem MHC-Molekül)
If we have individually only
a restricted set of MHC molecules Why do we need polymorphic MHC alleles ?
(bad for transplantation...)
Why do we need polymorphic MHC alleles ?
(bad for transplantation...)
Not all theoretical epitopes can be generated by proteasome
(switch by IFNg induced immunoproteasome,
other proteases can generate epitopes)
Not all generated epitopes can be presented by a particular MHC allele
(anchor positions must fit!)
Selection of variability in population (by smell)
At least some survive the plague....
Lck
CD4 und CD8 als Korezeptoren
CD4
•
erkennt MHC-II
•
eine Polypeptidkette mit 4 Ig-ähnlichen Domänen
•
D1 bindet an a2/b2-Domäne von MHC-II
•
wird von T-Helfer-Zellen exprimiert
Lck
CD8
•
erkennt MHC-I
•
Dimer aus a und b-Kette mit je 1 Ig-ähnlichen Domäne, über
eine hochglykosylierte (und deshalb gestreckten) Polypeptidkettenabschnitt mit dem Membransegment verbunden
•
bindet an a3/a2-Domäne von MHC-I
•
wird von zytotoxischen T-Zellen exprimiert
CD8+ /
die lymphocyte-specific protein tyrosine kinase (lck)
ist eine mit CD4/CD8 assoziierte Tyrosinkinase
TH-Zellen: Bindung von MHC-II an TCR/CD4
TC-Zellen: Bindung von MHC-I an TCR/CD8
Immature
DC
Principal function
Expression of
FcR, Mannose-R
Expression of
Co-stimulatory
Molecules (CD80/CD86)
MHCII
Antigen capture
Mature
DC
Antigen presentation
++
-
- or low
++
half life
10h
100h
number of surface
molecules
106
7x106
mDCs
CD8-
pDCs
CD11c-low
CD11b-negative
B220-high
mDCs
CD8+
Surface markers
CD11c-high
CD11b-high
TLR expression
TLR 4, 5, 8
TLR 7, 9
TLR 3
Major cytokines
TNF, IL-6
IFN-a, b
IL-12
Ability to
cross present
Major function
+/-
Induction of
T cell response
against most
antigens
+/-
Induction of
T cell response
against viruses
CD11c-low/high
CD11b-negative
CD8a+
++
activation of
CD8+ T cell response
by cross priming
Figure 5-17
(Alternative) Antigenpresentation of (Glyco)lipids via CD1
CD1d
CD1c
CD1a, b, c
Glycolipids
lipids
lipids
NKT cells
d-T cells
IL-4, IFN-
IFN-
CD1-restricted
ab-T cells
IFN-g