RNA-SEQ

RNA-SEQ
RNA-SEQによる包括的な
遺伝子発現プロファイリング
転写産物分析のための革命的ツール
遺伝子発現の調節は、内部刺激および外部刺激の双方から影響を受ける非常に動的なプロ
セスです。疾患状態を原因とするような遺伝子発現の変化は、目的の表現型に対して遺伝子
調節がどのような影響を与えているのかを理解するために極めて重要です。RNA-seqは、次
世代シークエンシングアプリケーションであり、サンプルまたはサンプルのセット内のすべて
のRNA分子に対する、バイアスのない包括的かつ定量的な解析を提供します。これにより、
RNA-seqは遺伝子発現の特性を解析する世界的にも強力なツールとなります。また、RNA-seq
は、変異体および選択的スプライシングされた転写物を確実に識別することができます。以
下に示すように、RNA-seqはハイブリダイゼーションに基づくマイクロアレイ技術と比較して
明らかなメリットを有しています。GENEWIZはIllumina HiSeq 2500 およびIon Proton™プラッ
トホームの双方で、カスタマイズ可能なソリューションを提供しています。GENEWIZの NGS
チームは、実験の設計から高度なバイオインフォマティクス分析まで、複雑なRNA-seqプロ
ジェクトの管理において豊かな経験を有しています。
マイクロアレイ
RNA-Seq
トランスクリプトーム全体をシークエンシング。
あらかじめデザインされたプローブセットにサンプルを
ハイブリダイズする。
基準配列の有無を問わず、効果的に分析。
基準配列がある場合のみ分析。
スプライス変異体を含む、既知および未知の転写産物の
アイソフォームを検出。
既知のアイソフォームのみ検出。
高ダイナミックレンジで、高発現、低発現の両方の転写産物を
高い精度で検出。
ダイナミックレンジが狭い。高発現、低発現の転写産物に対しては、
データにバイアスがかかる可能性を否定できない。
置換および塩基の挿入または欠損を含む、新規配列変異体の
検出。
配列変異体の検出は不可能。
単一塩基レベルで、転写境界を正確に特定。
精度の低い分解能。
RNA-SEQのプロセス
サンプル
ライブラリの作成
RNAを単離
マッピングおよびダウンストリーム解析
シークエンス
シークエンス
ペアエンド または シングルエンド
R1 R2
発現レベル
リード
お問い合わせ・見積もり依頼
ジーンウィズ・ジャパン・プロジェクトマネージメントチーム [email protected]
ジーンウィズ・ジャパン www.genewiz.jp/public/index.aspx
RNA-SEQ
GENEWIZの完全なソリューション
実験設計
• 経験豊かなプロジェクトマネージャーとの無料相談
• 最適なライブラリタイプ、シークエンシングプラットフォーム、構成および
リード長、カバレッジの深さ、および分析要件を決定
RNA-SEQによる包括的な
遺伝子発現プロファイリング
RNA-SEQの特徴
• トランスクリプトーム全体の分析
• 発現量の正確な定量化
• 単一塩基レベルの分解能
• 高ダイナミックレンジ
• 選択的スプライシングの分析
GENEWIZのメリット
• 低RNAインプット専用のプロトコール
サンプル調製
• ストランド特異的な情報専用の
プロトコール
• 品質チェックによってサンプルの完全性と量を確認
• 最適化されたサービス
• rRNA除去、mRNAの精製および断片化、ds-cDNA合成、インデックスアダプタを
ライゲーションし、シークエンシング用ライブラリを作成
• 迅速なターンアラウンド時間を選択可能
• 高度なバイオインフォマティクス分析能
• 基準配列が不要
• 迅速なターンアラウンド時間を選択可能
• NGS専門家による専属サポート
多重化
• アダプター結合ライブラリのノーマライズおよびプール
サンプル提出
• サンプル全体に、均一なシークエンシングのカバレッジを行うためにプール
されたライブラリを定量化
• 総RNA*
• mRNA
• ds-cDNA
• 細胞ペレット
次世代シークエンシング
• Illumina HiSeq 2500またはIon Proton™プラットフォームによるシークエンシング
* 推奨するサンプルタイプ
成果物
• FASTQファイルでの生データ
バイオインフォマティクス分析
マッピングおよびリードのヒットカウント
各遺伝子にマップされたリード数をノーマライズし、サンプル内の遺伝子発現
レベルを決定。
• バイオインフォマティクスレポート:
• 遺伝子発現解析
• 新規アイソフォームの検出
• 突然変異の検出
• シークエンスアセンブリ
識別的遺伝子発現
統計学的にサンプルまたはサンプル群間の発現を比較。
新型アイソフォームの検出
スプライス変異体などの新型転写産物アイソフォームを識別。
突然変異の検出
一塩基変異オチド変異、並びに小規模な挿入および欠失を検出。
De novoトランスクリプトームアセンブリ
基準配列がない場合、シークエンスデータのアセンブリ。
お問い合わせ・見積もり依頼
ジーンウィズ・ジャパン・プロジェクトマネージメントチーム [email protected]
ジーンウィズ・ジャパン www.genewiz.jp/public/index.aspx