Universal Buffer Set

10 × Reaction Buffer for Restriction Enzyme
Universal Buffer Set
Code No. 1000
Size: 1 ml × 7 tubes
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Stored at － 20℃
Lot No.
＊適切に保存し、受取り後 2 年を目途にご使用ください。
2 year s f ro m date of re ceipt un d e r p ro p e r s to r a g e
conditions.
Compositions of Universal Buffer (Stored at － 20℃ ) :
1. 10 × L
100 mM
100 mM
10 mM
2. 10 × M 100 mM
100 mM
10 mM
500 mM
3. 10 × H 500 mM
100 mM
10 mM
1,000 mM
Tris-HCl, pH7.5
MgCl2
Dithiothreitol
Tris-HC, pH7.5
MgCl2
Dithiothreitol
NaCl
Tris-HCl, pH7.5
MgCl2
Dithiothreitol
NaCl
4. 10 × K 200 mM Tris-HCl, pH8.5
100 mM MgCl2
10 mM Dithiothreitol
1,000 mM KCl
5. 10 × T 330 mM Tris-Ac, pH7.9
(BSA-free) 100 mM Mg-Ac
5 mM Dithiothreitol
660 mM K-Ac
6. 0.1％ BSA
7. 0.1％ Triton X-100
Description :
TaKaRa applies a system in which enzyme activities measured in the
optimal universal buffers (one of 5 buffers : Bold ) are displayed. The
relative activities in other universal buffers are expressed as 100% of the
optimal universal buffers. The relative activity of each enzyme is shown in
the table on the back of this sheet. ( ) indicates buffers which are likely to
be affected by star activity etc. In order to avoid these effects, use of Bold
or buffers is recommended. For 14 enzymes (Acc III, Bal I, Bcn I, Bgl I,
Bpu 1102 I, Cfr 10 I, Eam 1105 I, Eco 52 I, Nru I, Psh B I, Sna B I, Ssp I, Taq I and
Vpa K11B I), each basal buffer should be used.
Instructions for use :
Please dilute with sterilized water to 10-fold. Since 10×T buffer does not
contain BSA, be sure to add BSA to a final concentration of 0.01%.
Some restriction enzymes are supposed to exhibit a 100% activity when
BSA or Triton X-100 is added to the reaction system. Since BSA or Triton
X-100 supplied with enzymes is 10×concentration (0.1%), be sure to
add 1/10 volume of the reaction mixture like buffer before starting the
reaction.
Q&A:
Q1.
A1.
Q2.
A2.
For each restriction enzyme, relative activity in a universal buffer is indicated. Some restriction enzymes show higher activity in other buffers compared to that
supplied with enzyme (For example, Hin d lll, whose supplied buffer is M, exhibits
200% of activity in buffer K). In these cases, are there any problems in using high
activity buffer?
No problem. Supplied buffers are selected from activity measured buffers
on the basis of similarity to the original basal buffer, which does not need to
mean that they show the highest activity. There are no problems in performing
reaction using buffers other than supplied buffers. But please do not use buffers
with bracket numbers, since they are prone to be affected by star activity etc.
Why does TaKaRa supply the universal buffers attached to a part of restriction
enzymes, so enzymes are able to exhibit lower activities in these universal
buffers than that in the basal buffer?
TaKaRa possibly supplied the universal buffers attached to enzyme in order
to be convenient to perform double digestions. Since the difference among
L, M, and H buffer is only the salt concentration, user can easily perform 2nd
digestion just adding of 2nd enzyme and salts for suitable concentration
without procedures to exchange buffer, such as ethanol precipitation, etc . The
basal buffer is supplied with enzymes in which enzymes do not exhibit so higher
activities than that in five kinds of universal buffers. Attentions should be paid
for this difference in composition of each buffer, since these basal buffers are
prepared to be used in optimal conditions for each enzymes.
製品についての
技術的なお問い合わせ先
●製品説明
TaKaRa では、Universal Buffer［5 種 Buffer 中の 1 種：太字で表記］で酵
素活性を測定し、その値を表示するシステムを採用しています。その酵素
活性を 100% とした際の、各 Universal Buffer での相対活性を裏面に記載
しています。
（　）は Star 活性等の影響を受けやすいバッファーを示してい
ます。これらの影響を避けるため、なるべく太字かのバッファーをご
使用ください。
なお、
Acc III、
Bal I、
Bcn I、
Bgl I、
Bpu 1102 I、
Cfr 10 I、
Eam1105 I、
Eco 52 I、
Nru I、
Psh B I、Sna B I、Ssp I、Taq I 、Vpa K11B （
I 14 品目）については、各酵素添付
の Basal Buffer を使用してください。
●使用方法
反応液中に 1/10 量になるよう、バッファーを加えてください。
なお、10 × T 溶液には、BSA は含まれておりません。最終濃度 0.01％に
なるように、BSA を使用時に添加してください。
一部の制限酵素（裏面リスト＊ 1, ＊ 2）では、反応系に BSA や Triton
X-100 を加えた場合に 100％の活性を示すように設定されています。酵素
に添付されている BSA や Triton X-100 は 10 ×濃度
（0.1％）なので、バッファー
と同様に反応液の 1/10 量を加えて反応を行ってください。
● Q&A
Q1．制限酵素にはそれぞれ Universal Buffer での相対活性が表示してあ
るが、添付 Buffer よりも他のバッファーの方が高い活性を示している
ことがある（例えば Hin d III の場合、添付 Buffer は M だが、K Buffer
で 200% の活性を示している）。このような場合、活性の高い方のバッ
ファーで反応しても問題はないのか？
A1．問題ありません。添付 Buffer は活性測定を行っているバッファーで、
もとの Basal Buffer に近い組成のものを選んでいますので、必ずしも
一番高い活性を示すバッファーとは限りません。
添付 Buffer以外のバッ
ファーで反応していただいても問題ありませんが、数字に（　）のつ
いているバッファーは Star 活性等の影響を受けやすいバッファーです
ので使用を避けてください。
Q2．TaKaRa の制限酵素の中には、Basal Buffer に比べて相対活性の低い
Universal Buffer を添付している酵素があるのはなぜ？
A2．TaKaRa の制限酵素は Double Digestion を想定して可能な限り
Universal Buffer を添付しています。L、M、H Buffer は主に塩濃度
が異なるので、まず低い塩濃度の Buffer 中で第一の酵素で切断し、
その後塩を加えて高い塩濃度下で第二の酵素で切断を行えば、エタ
ノール沈殿後の Buffer 交換の必要がありません。5 種類の Universal
Buffer で相対活性があまり高くない酵素については Basal Buffer を添
付しています。この Basal Buffer は各制限酵素至適 Bufferであるため、
組成が制限酵素によって異なりますのでご注意ください。
References
1. Sambrook, J.,et al .(1989) “Molecular Cloning” 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory, 5.3-5.32.
2. O’Farrell, P.H.,et al .(1980) Mol. Gen. Genet. 179, 421-435.
● 注意
本製品は研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨
床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、
家庭用品等として使用しないでください。
タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のため
の改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
TaKaRa テクニカルサポートライン
v201006Da
Tel 077-543-6116
Fax 077-543-1977
Relactive Activity for Each Universal Buffer :
Restriction
Relative activities (%)
L
M
H
K
Enzyme
Aat II
<20
<20
<20
<20
100
Restriction
Enzyme
Hpa I
L
<20
T (+BSA)
Relative activities es (%)
M
H
K
(40)
20
100
T (+BSA)
(80)
Acc I
20
100
<20
(<20)
160
Kpn I
100
60
<20
<20
(100)
Acc II
(260)
100
<20
20
200
Mbo I
20
40
60
40
Acc III
Afa I
100
(<20)
(<20)
(80)
(<20)
Mbo II
60
100
60
<20
60
100
<20
60
20
40
60
<20
<20
Mfl I
80
<20
<20
140
100
80
40
Mlu I
60
100
(100)
200
60
60
Msp I
80
80
<20
80
100
100
Mun I
(200)
<20
<20
160
Mva I
(<20)
(40)
80
100
(20)
Nae I
100
<20
<20
Nco I
(40)
(60)
20
Afl II
20
80
＊1
Alu I
100
100
<20
Aor 13H I
<20
20
<20
Aor 51H I
80
100
<20
20
120
Apa I
100
<20
<20
<20
<20
Apa L I
100
20
<20
<20
120
Bal I
Bam H I
20
20
<20
<20
40
(<20)
<20
40
100
(<20)
Ban II
(120)
(120)
100
80
(100)
Bci T130 I
(<20)
(20)
80
100
(20)
Bcn I
<20
20
40
60
60
Bgl I
Bgl II
<20
<20
<20
20
20
100
40
(100)
<20
(60)
Bln I
<20
20
40
100
20
Bme T110 I
<20
<20
20
100
<20
Psh B I
Psp 1406 I
Bmg T120 I
<20
<20
100
40
<20
Bpu 1102 I
<20
<20
<20
40
Bsp T104 I
100
60
<20
Bsp T107 I
<20
20
80
Bsp 1286 I
100
20
80
＊1
100
＊1
<20
60
＊1
100
(60)
Nde I
<20
40
100
100
80
Nhe I
(120)
100
<20
<20
(160)
Not I
(<20)
(<20)
<20
(<20)
Nru I
Nsb I
0
40
<20
20
20
<20
20
<20
60
100
Pma C I
100
80
<20
<20
100
Psh A I
20
40
<20
100
60
(20)
20
(40)
40
<20
40
60
20
<20
Pst I
(<20)
(60)
100
80
60
Pvu I
(<20)
(20)
(40)
<20
100
Pvu II
(80)
40
<20
20
100
100
Sac I
<20
<20
60
<20
<20
100
80
60
Sac II
40
20
<20
<20
100
<20
20
＊2
80
＊1
100
(20)
(40)
(40)
Bsp 1407 I
20
60
20
20
100
Sal I
<20
<20
100
100
60
20
100
(20)
Bss H II
140
Sau 3A I
(60)
(80)
(<20)
(60)
100
(100)
(100)
100
<20
Bst P I
80
Sca I
(<20)
(<20)
100
(60)
(<20)
Bst X I
<20
40
100
<20
<20
Sfi I
(40)
<20
(<20)
100
60
100
100
40
100
<20
Bst 1107 I
Sma I
<20
<20
<20
<20
Cfr 10 I
Cla I
(<20)
40
(<20)
(<20)
40
(20)
100
100
120
100
60
Smi I
<10
<20
100
40
<10
Cpo I
<20
<20
80
100
<20
Sna B I
Spe I
(20)
(80)
(40)
<20
<20
Dpn I
100
80
100
(40)
(80)
60
60
120
140
100
Sph I
(20)
(40)
120
(20)
Dra I
100
100
100
60
100
80
Sse 8387 I
(120)
<20
<20
(60)
Ssp I
Stu I
(<20)
(60)
40
(100)
(80)
60
100
60
80
140
Taq I
40
80
60
60
80
80
40
100
(80)
Eae I
60
＊1
60
100
<20
<20
120
Eam1105 I
Eco O65 I
(<20)
(20)
(40)
(60)
20
40
40
(40)
40
Eco O109 I
100
60
<20
<20
100
Tth111 I
(20)
Eco R I
(20)
(100)
100
(120)
(80)
Van 91 I
<20
(20)
(<20)
(40)
(40)
100
100
(120)
60
(60)
Eco R V
Vpa K11B I
<20
<20
(40)
<20
Eco T14 I
(<20)
(40)
100
120
(60)
60
Xba I
<20
20
<20
Eco T22 I
<20
20
(140)
(20)
120
100
Xho I
<20
Eco 52 I
Eco 81 I
<20
<20
<20
<20
<20
<20
100
160
60
100
<20
<20
60
Xsp I
<20
60
<20
100
160
Fba I
(<20)
(<20)
(80)
100
(20)
＊1
60
＊1
100
Fok I
(20)
<20
<20
(200)
Hae II
80
100
<20
80
140
Hae III
60
100
100
60
100
Hap II
100
60
<20
<20
100
Hha I
80
100
100
120
120
Hin c II
20
100
20
40
100
Hin d III
(60)
100
<20
200
(100)
Hin f I
80
100
100
160
60
Hin1 I
40
<20
20
60
60
80
＊1
80
＊1
＊ 1 : +0.01% BSA → 100%
Afl II, Aor 13H I, Eco O65 I, Fok I, Hin1 I, Mun I, Nco I, Pvu I, Sse 8387 I, Xba I
＊ 2 : +0.01% BSA+0.01% Triton X-100 → 100%　Not I
Note
This product is intended to be used for research purpose only. They
are not to be used for drug or diagnostic purposes, nor are they
intended for human use. They shall not to be used products as food,
cosmetics, or utensils, etc.
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v201006Da

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