ここまでできる！ HPLC検出器使い方のコツ 高速液体クロマトグラフの機能紹介 HPLC/RHPLC Prep-HPLC UHPLC 1つのシリーズ 5つのラインアップ Prep-SFC（UFC） UFC：Unified fluid chromatograph Analytical SFC（UFC） 6機種 計11タイプの検出器 1. 分析手法に対応した適切なセル選択 分析手法に対応した適切なセルの選択が必要 分析システム 充填剤粒子径 [µm] HPLC RHPLC* 従来（汎用） UHPLC 超高速・高分離 UFC（SFC） 超臨界流体 3～5 2～3 ～2 5~10 カラム内径 [mm] 4.6 2～4.6 2～3 4.6 流量 [mL/min] ～5 ～2 ～ 1.5 ～5 システム圧力 [MPa] ～ 30 ～ 70 ～ 130 ～29 Analytical 検出器セル 高耐圧セル Semi-micro Semi-micro SP** * Rapid Separation HPLC Semi-micro cell Analytical cell ** UV/PDA検出器のみ UHPLC用カラムでの適切なセルの選択 Column ZORBAX Eclipse Plus C18 (2.1 mmI.D. x 50 mmL, 1.8 µm) Flow rate 0.6 mL/min 2. 示差屈折率検出器（RI-4035） RI-4035を使用することで、最適なシステム条件で セミミクロスケールの測定が可能 ○ 配管&セルの低容量化により、ピークの拡散を低減 装置名 IN側容量 RI-2031 （低流量配管,分析用） 70 μL RI-2031 （高流量配管, 分取用） 500 μL RI-4030 （低流量配管,分析用） 45 μL RI-4030 （高流量配管, 分取用） 486 μL RI-4035 3.2 μL EXTREMA RI-4035 セル容量 10 μL 10 μL 2.7 μL 配管容量、セル容量ともに設計値 2. 示差屈折率検出器（RI-4035） セミミクロスケールGPCによる測定比較 RI-4035はセミミクロサイズのカラムを用いた、ポリスチレンオリゴマーの分析 においてピークの拡散を低減 RI-4035 EXTREMA RI-4035 RI-4030 測定条件 カラム： 移動相： 移動相流量： カラム温度： サンプル： 注入量： KF-401HQ （4.6 mmI.D. x 250 mmL） THF（安定剤含有） 0.3 mL/min 25 ℃ ポリスチレンオリゴマー 2 mg/mL（THF安定剤含有） 5 μL（フルループ注入） 3. 紫外可視吸光度検出器/蛍光検出器 2波長同時検出が可能 最適検出波長が異なる試料の同時分析が可能注1） 注1）2波長の設定は、設定領域が決まっています。 1 CH1:UV 210 nm 2 3 4 CH2:UV 250 nm 2 1 3 4 Sample: 1.Toluene, 2.Methyl benzoate, 3.Resolcinol, 4.Caffeine 3. 紫外可視吸光度検出器/蛍光検出器 2波長同時測定例 UV検出 UV-4070によるタンパク質構成アミノ酸分析 EXTREMA UV-4070 ー 570 nm ー 440 nm Lys His Cystine Column: AApak Na-LG (6.0 mmI.D. x 50 mmL, 4 µm) Column temp.: 60 ℃ Mobile phase: Amino Buffer Na-LG 1st~4th Arg Reagent: Jas-NIN Reaction temp.: 110 ℃ Flow rate: 0.5 mL/min each Wavelength: 570, 440 nm Trp GABA Phe Tyr Leu Ile Pro Val Ala Met Ser Glu Asp Thr Gly ニンヒドリン ポストカラム誘導体化アミノ酸分析に適用可能 2級アミノ酸であるProlineのみ440 nmで検出 4. PDA検出器 3Ｄクロマトグラムの差クロマトグラム EXTREMA MD-4010 Chromatogram 差し引き 差クロマトグラム（3D） 3Dクロマトグラムの差クロマトグラムで溶媒組成変化によ るベースライン変動の補正が可能 ベースラインを差し引くことで理想的なスペクトルを取得 Blank 4. PDA検出器 ピーク純度計算（PDAデータを利用） 目的のピークが1成分しか含んでいないのか（=高 純度ピーク）、複数成分を含んでいるのか（=低純度 ピーク）を判別 ピークトップのスペクトルとピーク内の全スペクトル を比較した時の相関係数のレベルから、高・中・低 純度を判別 ピーク純度パラメーター 任意で設定した相関係数の範 囲に応じて色別で表示されるた め、視覚的に容易に判別 ピーク純度計算結果 5. データ取込（サンプリング）間隔の設定 データ取込間隔 検出器から出てきたデータを、データ処理装置（ソフトウェア）が取 り込む間隔 一般的には1つのピークに対して20データポイントが必要 データポイント数が不足すると、ピーク形状の悪化や再現性の低下 に繋がる（ただし、データポイント数が多いとデータ容量が増大） 20 points 20 points/sec (= 20 Hz, 50 msec) 10 points/sec (= 10 Hz, 100 msec) 2 points/sec (= 2 Hz, 500 msec) 1 sec データポイントの取得イメージ 5. データ取込（サンプリング）間隔の設定 データ取込間隔によるピーク形状への影響 青: 50 points/sec 赤: 5 points/sec レスポンス: U.FAST 注) 見やすいように0.1 min offset しています 6. レスポンス（時定数,応答速度）の設定 検出器から出力される信号の処理法で、SN比を改善す るために設定 青: レスポンス U.FAST 赤: レスポンス U.SLOW 50 points/sec レスポンス、データ取り込み間隔の設定比較 U.FAST 50 points/sec U.SLOW 50 points/sec U.FAST 5 points/sec U.SLOW 5 points/sec S/N Response point/sec U.FAST 50 U.SLOW 50 U.FAST 5 THB 32.1 275.6 241.7 EAB 47.7 416 355.9 DHB 20.6 211.2 156.2 DHMB DHDMB HMB 21.1 12.8 10.5 225.5 146 124.1 158.1 97.3 80.4 最適なレスポンス、データ取り込み を行うことで、S/N良く測定 ノイズレベル(mV) 4706 391 632 ノイズは小さいが、ピーク 形状がブロード まとめ シリーズの検出器は、6機種 計11タイプの検出 器をラインアップし、幅広いニーズに対応 Semi micro, Analytical, Prep, Inert, High Pressure など、 分析手法に合わせた各種セルをラインアップ 2波長検出など搭載機能の使用により、得られる情報が増加 レスポンス、データ取り込み間隔のパラメーター設定により、 安定した分析および解析が可能 ご清聴ありがとうございました 新世代のラボのNeedsに新たなSeedsで応える のSeeds Standard ・・・ 標準化したシステム Evolution ・・・ 最新技術の導入 Extension ・・・ 優れた拡張性 Detection ・・・・ 高感度検出 Support ・・・・・・ 分離分析をサポート
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