XLXL-Bradford[界面活性剤 Bradford[界面活性剤適応 界面活性剤適応] 適応] Cat No. KY-1040、KY-1041 【目的・用途】 一般的な Bradford 法によるタンパク質定試薬は、界面活性剤の影響を大 きく受けてしまいます。本試薬は、様々な界面活性剤に溶解したタンパク質 【通常法プロトコール】 １） XL-Bradford 試薬の準備 [×5]XL-Bradford 試薬を室温に戻してから、超純水で 5 倍希釈して十分に 濃度を正確に測定できるよう、Bradford 試薬を改良したものです。タンパク 質抽出や精製の工程で添加した界面活性剤の存在を気にせずに正確なタン パク質定量ができます。 混和し、0.45μm フィルターなどを用いてフィルトレイトします。 ２） スタンダードの調製 測定可能範囲内で 5 段階程度のスタンダードタンパク質溶液を作製しま 操作手順は本試薬とタンパク質溶液を混合して 595nm の吸光度を測定する す。スタンダードはサンプルと同じバッファーで希釈するようにしてくだ だけで迅速・簡便な定量が可能です。混合してから加温する必要なく、また、 混合後 1 時間程度は吸光度が変化しませんので、多検体を処理する場合にも 最適です。 さい。 ３） 試薬の混合 サンプル及びスタンダード 10μL に対して、希釈・ろ過した XL-Bradford 【特徴】 試薬を 500μL 加え、混合します。 ４） インキュベート ● 様々な界面活性剤を含む試料中のタンパク質定量が可能 室温で 5 分間インキュベートします。インキュベート時間が⻑くなると ● 簡便な操作 徐々に吸光度が高くなりますので、室温で 1 時間以内にしてください。 ５） 測定 【キット内容・保存方法】 Cat.No 内容 容量 保管温度 使用期限 KY-1040 [×5] XL-Bradford試薬 100mL 4℃ 1年 KY-1041 [×5] XL-Bradford試薬 500mL 4℃ 1年 表2 測定可能範囲内で 5 段階程度のスタンダードタンパク質溶液を作製しま 通常法 微量法 0.1〜1.0 mg/mL 2〜50μg/mL す。スタンダードはサンプルと同じバッファーで希釈するようにしてくだ さい。 サンプルに含まれていても測定に影響がない化学物質の上限濃度 成分 バッファー HCl NaOH Acetate Ammonium sulfate Citrate Glycine HEPES Phosphate Tris SDS Deoxycholate 界面活性剤 100mM 600mM 微量法 2.5mM 2.5mM 15mM 1M 50mM 25mM 1.25mM 2M 2M 50mM 50mM 100mM 100mM 1% 2% 2.5mM 2.5mM 0.025% 0.05% 5% 10% 0.125% 0.25% Briji35 7.5% 0.188% o-β-D glucoside 10% Tween20 D-β-D maltoside Zwittergent NP-40 その他 通常法 100mM 許容上限 Triton X-100 o-β-D thioglucoside CHAPS 還元剤 １） XL-Bradford 試薬の準備 ２） スタンダードの調製 定量できるタンパク質濃度の範囲 酸・塩基 【微量法プロトコール】 [×5] XL-Bradford 試薬を室温に戻します。希釈はしません。 【基本情報】 表1 595nm で吸光度を測定します。 2% 0.05% 5% 4% 0.125% 0.10% 10% 0.25% 0.25% 7.5% 0.188% 2-Mercaptoethanol EDTA 1M 100mM 25mM 2.5mM NaCl Sucrose 5M 300mM 125mM 7.5mM Dithiothreitol Glycerol KCl Urea 【本品以外に準備が必要な器具】 1M 100% 1M 6M 25mM 2.5% 25mM 150mM 595nm の吸光度測定が可能な分光光度計もしくはプレートリーダー 分光光度計に適合したキュベット(試験管・チューブを使用する場合) 試験管・チューブ・マイクロプレート ボルテックスミキサー 0.45μm フィルター 正確なピペット ３） 試薬の混合 サンプル及びスタンダード 400μL に対して、[×5] XL-Bradford 試薬を 100 μL 加え、混合します。 ４） インキュベート 室温で 5 分間インキュベートします。インキュベート時間が⻑くなると 徐々に吸光度が高くなりますので、室温で 1 時間以内にしてください。 ５） 測定 595nm で吸光度を測定します。 【関連商品】 プロテインスタンダード KY-1010 プロテインスタンダード[BSA] Bradford 法 KY-1020 KY-1030 BCA 法 総タンパク質定量キット[Bradford] XL-Bradford[SDS-PAGE 適応] KY-2010 総タンパク質定量キット[BCA] KY-2030 総タンパク質定量キット[還元剤適応 BCA] KY-2020 総タンパク質定量キット[micro-BCA]
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