岡山大学温泉研究所報告 0号 ( 1 9 80)25 -SI市 第5 尿 酸 の 測 定 法 に つ い て 自動分析法 ( Pa t e l法)の検討 - - 西 村 佳 子*・青 木 宏 子* *・御 船 政 明** *岡山大学温泉研究所 温泉 内科学部門 **岡 山大学 医学部 附属病院 ( 指導 森 永 三朝分院 寛 教授) ( 1 9 8 0 年 1月 9日受付) 1 . 緒言 2 I . 試薬 尿酸 は Me r c k の特級 を用 い ,他 はすべて ,市販 の特 現在 ,体液 中の尿 酸の測定 には ,主 と して還元 法 とウ 級試薬 を使用 した . 9 7 9年 の リカ-ゼ法 ( 酵素法) とが利用 されて い る.1 Col l e geofamer i c a npat bol ogi s t sの Bas i cs ur ve y ( Tabl el)によると,尿酸 のi R E J 定法 と して , リンタン 尿酸保存標 準液 ( 1 0 0mg/ 1 0 0ml ) :炭酸 リチ ウム 6 0 mgを 1 0 0. O mlの メスフラス コに と り,約 5 0-6 0 mlの 0 o C の 恒 温槽 中で加 温溶解 す る. 脱 イオ ン水 を加 えて ,6 グステ ン酸還元法が多用 されてい る. 0 0. 0 mgを加 え て加温溶解 し,冷却 した後 に 次 に尿酸 1 oAnal yzer( 以下A.A.と略す)-Ⅰ テ クニ コ ン Aut 脱 イオ ン水 を加 えて全量を 1 0 0. O mlと した . 型 による尿酸の測定法 には ,還元法 の うちの N1 3 b法 尿酸使用標準液 :尿酸保存 標準液 を用 いて ,尿酸濃 が用 い られてお り,著者 らは この方 法 によ り測定 を行 な ったが ,感度が不 良で あ っ た .また A.A.-Ⅰ 塾で EDTA-ヒ ドラジ ン還元法 を利用 した Pat el法 ( Fi g. 0,6. 0,9. 0,1 2. 0,1 5. 0,2 0. 0,2 5, 0( mg/ 1 0 0 度 が 3. ml ) とな るよ うに脱 イオ ン水 で希釈 した . 6 0 g/ 1 0 0 ml ) :タ ン タ ングステ ン酸 ナ トリウム溶液 ( 1) を追試 した ところ, ど- ク問の分離 が悪 く,キ ャ リ グステ ン酸 ナ トリウム 6 00 g を脱 イオ ン水 に 溶 か して ーオーバ ーが危倶 され た . 1 00 0mlと した . 今回著者 らは ,Pat el法 の再検討 を行 ない ,Pat el法 EDTA ・4ナ トリウム (5g/ 1 0 0 ml ) :エチ レンジア の一部 を改変 して健常者 の血清尿酸値 の測定 を試 み ,揺 0g を脱 イオ ン水 に溶か して ミン 4酢酸 -4ナ トリウム 5 ば満足 すべ き結果 を得 た .その Pat el変法 による成績 1 0 0 0 mlと した . について報告す る. EDTA-タ ングステ ン酸 試薬 :6 0 g/ 1 0 0 mlタ ングス 2.試薬および装置 g/ 1 0 0 mlEDTA ・4ナ トリウ テ ン酸 ナ トリウム液 と 5 Tabl e1. Themai nmet hodsf ort i l edet er mi nat i o nofur i caci d phosphotungstate Reduction Methodt A "a un t霊 te "e .t:::h.d uricase Method{ A "a un t::it:e dt:::h.d Oxygen Rate Method Iro n Re d uc t io n B { tu A "a u n o : i te " : t:: :ho as i c s y ve ur p.8 , (S e t 1 979 . A d A ) ,C ol l e ge of a m e r i ca n path olo g i st s, 2 6 西 村 佳 子 ・青 木 宏 子 ・御 舷 政 明 0 . 0 2 0 . 0 4 Tube Size (inches) DISCARD SA MPL E 0 DI ALYZER sAMPLER 0. 9 5 t ! N a CI AIR HYDRAZ川 E SULFATE EDTA SODIUM TUNGSTATE 0. 056t AIR りC PHOSPHOTUNGSTIC ACID REAGENT PROP〔 ) RTIONING PUMP TO PUMP COLORIMETER RECORDER WATER BATH 660 nm ROOM TEMPERATURE P ATE L, C. P.S e mi mi cr om eth o df o rd et er mi n at l o nofs eru mu r i ca ci d u si ngE D T Ah yd r a zi n e.Cl i n. Ch e m.1 4,p. 7 6 8,1 9 6 8. ' sme t h o d Fi g.1. Fl o wdi a gr a mo fPa t el 2 2. 装置 ム液 とを 3対 1の割合に混合す る. ( 0. 0 2 5 g / 1 0 0 ml ):硫酸 ヒ ドラジ 5 0 mgと酢酸ナ トリウム 1 6. 6 gを脱 イオ ン水で 溶解 ン2 0 0 0 mlとした . して ,全量を 1 0 0 0 mlの丸底 フラスコに リンタングステ ン酸試薬 :1 タングステ ン酸ナ トリウム 4 0 g,蒸留水 300m1,1 )ン酸 ( 8 5 %オル トリン酸)3 2 mlを加えて混和溶 解 し,フラ 硫酸 ヒ ドラジン試薬 スコに還流冷却器を接合 して ,約 2・3時間おだやかに 煮沸す る.室温 になるまで放置 した後 ,内容を義留水で 1 0 0 0 mlとした.ただ し, リンタグス テ ン酸 試薬 ( 和光 自動分析用試薬)を代用 して もよい. ( 0. 9 g / 1 0 0 ml ) :塩化ナ ト リウ 9gを脱 イオ ン水 に溶か して 1 0 0 0 mlとした . 塩化 ナ トリウム溶液 ム 水酸化ナ トリウム 溶液 ( 0. 1N) :水酸化ナ ト リウム 4gを脱 イオ ン水 に溶か して 1 0 0 0 mlとした . テ クニ コン社製の A.A. -Ⅰ型を使用 した. 3 . 測定方法の検討 3 1 . 測定条件 Pa t e l法 による測定方法を 検 討 し,サ ンプ ラー のカ ムを原法の ( 4 0 1 / 2 )か ら ( 3 0 1 /1 ) に変え,サ ンプル ライ ンの空気の吸引チューブの内径 0 . 0 4 5イ ンチ ( Ⅰ) , および発色試薬 ライ ンの 空 気 の 吸 引 チ ュー ブ の 内 径 0. 0 5 6イ ンチ (Ⅱ)をそれぞれ 0. 0 5 6,0. 0 6 5イ ンチに 変え ,また ,H3型ガラスフ ィッテ ィングに接続 させた 空気 とサ ンプルのチ ューブの位置を逆 に し,ウオーター バ スコイルを冷却器つ き ミキ シングコイルに変 えたフロ -ダイアグラム ( Fi g.2)を利用すれば, ピーク問 の 分離がよいことがわか った .この測定条件 よ って記録 さ れたフローチャー トを Fi g.3に示 した. 27 尿酸の測定法 について Tube Size (inches) D I S C ARD AMP L E R S AMP LE S 0.020 D I AL YZE R AI R∼ HYD R AZ I N ESU LF ATE T R ED A 0.06 51[ SOD IU MTUNG TAT E S AI * WA TER F / C P H OSP H O TU NG S TI C ACI DR E AG E N T P R OP OR TI ONI NG P U MP TOP U MP * modified b y authors C O L ORI ME TE R R EC OR D E R ★ ★ 660 nm T ec h ni c o nc od eN o.1 1 6-7 0 2-1 Fi g.2. Fl owdi a gr am f oraut omat edur i caci das s ay (L uOO L JBL u ) 亡○= 2 1ua3uOU Fi g.3. Act ualr ec or di ngofa ut omat edur i c aci das s ay xlO X5 x2 XI Dilution Fi g.4. Rel at i o nbet wee nur i caci dc onc e nt r at i o nsa nddi l ut i o nofur i ne 2 8 西 村 佳 子 ・青 木 宏 子 ・御 船 政 明 Tabl e2. Recover yr at eofur i caci daddedt os er u m andur i ne Uric Acid No. ln Serum Uric Acid Recovery ( mg/100ml) 0000000500 4442244929 0000n U0O909 1612633887 1936485547 1 11112222 000000000n U 5550000000 1111222 9490499949 5476474547 ( %) 0人 U00000000 2264430555 0000000000 11111■ ■■1111 Found 9■ ・ -75010983 8009145546 11 ー︼l1l1 0000000000 5555500000 11111 8043880438 35L L 7453L L '545 1234567890 ( mg/100ml)Added Uric Acid Uric Acid Recovery ln urlne ( mg/100ml) rate ( %) ( mg/100ml)Added Found 103. 6 100. 0 3 106. 0 Tabl e3. Pr eci si onofur i c : aci d' anal ysi s C;S。こて,serum upi;m:, 433N4344A T 4 8888888888 77880 0898C O8 4444444444 8900901001 8899890 ノ9q一 9 8∧ U99( U89998 45445444A T4 2222222222 Samp一e l・Samp一e 2・Samp一e 3., Samp一e 1. Samp一e 2.Sample 3. 568877′ oL L )76 6666666666 Range upi;mg a, cio d霊 ,urine 4445555566 5555555555 1234567890 Mean S.D. l 5. 49 0.07 6.65 0.11 8.35 0. 07 4.79 0. 06 8.98 0.15 24. 89 0. 07 5.4 6.5 8. 2 4.7 8. 8 24, 8 5?6 6号8 8. 5 4 4. f 9 ,!1 25チ 0 1. 62 0.84 1.19 1. 68 C.V.(A) 1.35 32. 希釈試験 尿中尿酸は高濃度のことが多いので,原尿を脱イオ ン 水で適当に希釈 して測定試料 とした.原尿を脱 イオ ン水 0.28 1 0 6. 0%平均 1 0 3. 6%尿では,99. 0-1 0 4. 0%平均 1 02. 5 %であった ( Tabl e2). 3 4. 精度 で 2-1 0倍に希釈 した場合の測定値間の変化について検 血清および尿 (5倍希釈)の各 3試料について,各 々 討 した結果 ,希釈倍数 と測定値 との 間 に は,良 好 な直 1 0回連続測定 した時の精度について検討 した結果 ,変動 線性が認め られた.原尿は 5倍に希釈す る こ と と した 係数 ( Fi g.4). 尿では,0. 2 8-1. 6 8%平均 1. 05%であった ( Tabl e3). 3⊥ 3. 回収試験 35. 本法 と T J A テス ト ( W ako)法によ る測 定 値間 プール血清に 5. 0, 1 0. 0mg/1 0 0mlの尿酸を, また 5 ( C. Ⅴ. )は血清では,0. 8 4-1. 62%平均 1. 27% , の相関について 倍希釈 した尿に 5. 0, 1 0. 0, 2 0. 0mg/1 0 0mlの尿酸を添加 血清 95試料 と尿 3 5試料につ き,本法 ( Pat el変法) した時の回収率について検 討 した.血清では,1 0 0. 0- と UA テ ス ト ( W ako)法による測定値問 の相 関性 に 尿酸の測定法 について 29 mg/7 00m7 4 3 S 1 L J Ta uO蔦M 33 . V. n PO 2・ 0 4・ D 6. 0 8. 0 Authors'method 20 0 10. 0 mg/1 00ml Fi g.5. Cor r el at i onbet wee nU.A.t es tWa ko met hodandaut hor s 'met hod Au thors'method mg/100ml Fi g.6. Cor r el at i onbet wee nU. A.testWako met hoda ndaut hor s 'met hod Tabl e4. Nor malme a nval uesofs er um ur i caci d Numbers Mean( mg/100ml) of subjects m。1es巨 emales KAGEYAMA et al MIKKELSEN et al et al ALPER 〟 TISE REPORTER 〟 enzymatic spectrophotometr y ついて 検 討 した.血 清 で は ,r二 -0. 9 7,Y-1. 0 3 Ⅹ- 0. 4 3( Fi g.5),尿では ,r-0. 9 9,Y-1. 0 6 X-0. 5 4 8 3 FEICHTWEIR et al 〝 3 4 4 4 et al 6 8 8 9 6 7 ∵ r U r auto analyzer 4 4 CROuLEY KITAMURA colorimetric 8 9 0 3 3 4 KITAMURA 〟 0 3 4 6 7 8 9 5 5 5 5 5 5 5 et al enz ymatic spectrophotometry 0 7 3 0 3 4 3 1 1 GJORUP enzymatic colori metry 岡山大学温泉研究所 および岡山大学医学部附属病院三 朝分院に勤務す る職員で,定期健康診断で異常を認めな ( Fi g.6)であ り,血清 ・尿試料 とも良好 な 相 関 性 が か った健常者 68例 ,( 男子 2 9軋 認め られた. か ら採血 して得た血清を試料 と した. 4. 測定試料および結果 4 1 . 測定試料 女子 3 9例)の肘静脈 42. 測定結果 8±0. 9mg/ 1 0 0 ml , 健常者の血清尿酸値は,男子は 5. 女子は 4. 4士0. 8mg/ 1 0 0mlで ,男子が女子 に比べて平 西 村 佳 子 ・青 木 宏 千 ・御 船 政 明 0 7 尿酸の測定値は,副定方法によって差があることが知 80 i Me an ±S・D・ られてお り,BUc HANAN( 1 9 6 5 ) は,還元法は酵素法よ 5mg/ 1 0 0ml高値を示す と報告 している.Ta bl e り約 0. 4・に記載 した血清尿酸正常平均値をみて も,測 定 値 は 5 4 0 ・ 0 4 0 ,・ 0 5 + ・ ・ .&+. ?.・ n l ′ 0 0 6 ・⋮, ・ Tq・, !, ・・, ・ , n l g /1 00 ml 各報告者によって差がみ られるが ,平均値では,男子の 方が女子 より 1-2mg/ 1 0 0ml高値を示す傾向にあるこ とは各報告 とも同様である.著者 らが Pat el変法によっ bl e4.の測定値 て測定 した健常者の血清尿酸値を ,Ta と比較すると,北村 ら ( 1 9 6 6 ),CROWLEY ( 1 9 6 4 )が報 告 している,オー トアナライザー法による測定値 とほぼ 一致 した. 6 . 結語 Aut oAnal yz er -Ⅰ 型 を用 い る尿 酸 測 定 法 で あ る Pat el法を検討 し,次の結果を得た. oTMaler 0rF e maT e ① N=29 T l 王3 9 M ea n士 S.D.:5. 8土 0. 9 Mean土 S. D,' .4. 4土 0. 8 R a ng eこ4. 0-7. 7 R ang e:2. 4・ -5. 8 0 5 6,Ⅱ-0. 0 6 5インチに変え, ーブの内径を Ⅰ-0. t=6. 67 p く0. 01 H 3型ガラスフィッテ ィング-の空気 とサ ンプルの 接続位置を逆に し,冷却器つ き ミキシングコイルを Fi g.7. Ser um ur i caci dc o nc e nt r at i o nsof 使用 した結果 ,良好なフローチャ∼ トを得 ることが できた. nor mals ubj ec t s 均 1・ 4mg/ 1 0 0ml高い値を示 し,両者の問には,推計学 ② @ Pat el変法 と UA テス ト ( Wako)法 との相 関 9 7,Y-1. 0 3 Ⅹ-0. 43,尿 :rは,血清 :r-0. 現在,尿酸の測定法は,還元法か ら特異性の高い酵素 0. 9 9,Y -1. 0 6Ⅹ-0. 5 4と良好 な相関が 認 め られ た. 法に移行する趨勢にあるが,酵素法では測定条件がデ リ ケー トで精度が十分でないなどの問題があるため,酵素 回収率は,血清で 1 0 3. 6% ,尿で 1 0 2. 5%であり, 2 7% ,1. 05%であった. 変動係数は,それぞれ 1. 的に有意な差を認めた ( Fi g.7). 5 . 考按 Pat el法のフローダイアグラムを改良 し,サ ンプ ラーのカムを ( 3 0 1 / 1 ),2カ所の空気の吸 引 チ ュ ④ この改良 した Pat el変法を用いて,健常者 6 8例 法を 日常検査に使用する施設は少な く,一般の臨床検査 9例,女子 3 9例)の血清尿酸値を測 定 した ( 男子 2 では還元法が多用 されていることは,緒言に述べた如 く 結果 ,測定値は,男子 :5. 8±0. 9mg/ 1 0 0ml ,女子 である.他方 ,試料処理数の増加に伴 って ,還元法を用 :4. 4±0. 8 mg/ 1 0 0mlとな り,有意な性差が認め ら いたオ- トアナライザー法が広 く行われ,同法による尿 れた. 酸 測 定 の成 績 が 報 告 され て い る ( CROWLEY1 9 6 4, BywATERS1 9 6 4,PATEL1 9 6 8,WHEAT1 9 6 8 ). 著者 らは ,A. A. -Ⅰ型を用い,尿酸のオー トアナラ イザー法 としては実用性があるといわれている Pat el 原 1 3b 法お 法に一部改良 を加 えた結果 ,テクニコン N- el原法に比べて ,感度 も ピーク間の分離 もと よび Pat 〔謝辞〕 稿を終 るに当 り御指導 ,御校閲をいただいた 森永寛教授に深謝する.実験に際 し,衡協力いただいた 岡山大学医学部附属病院三朝分院検査室の皆様に厚 く御 礼申 しあげる. 7 . 文献 もにす ぐれており,また回収率 ・精度については,血清 ALP ER,C. ,SEI TC HI X,∫ .( 1 9 5 7 ) Compar i s on of ・尿試料とも良好な成績を得 ることができた.また,こ t heAr c hi bal dkT e na ndSt r a ns ky c ol or i met r i c の改良方法による尿酸の測定は UA テス ト ( Wako)法 pr oc edur ea ndt he Pr aet or i us e nz ymat i c と良好な相関を示 した. pr oc edur ef ort hedet er mi nat i o nofur i cac i d. el変法は ,A. A. -Ⅰ型に 著者 らが改良を加えた Pat よる尿酸測定法 として,日常の臨床検査に十分利用で き るものと思われ る. Cl i n. Che m. ,3( 2 ),9 5 1 01. BUc I I ANAN,M .∫. ,I s DAL E,Ⅰ.C.a ndRos E,B.S. ( 1 9 6 5 )Ser um ur i c aci d es t i mat i on c hemi c al 尿酸の測定法について 31 a nde nz ymat i cmet hodsc o mpar e d.An n. r he um. TI I EDETERMI NATI ONOF t J RI C ACI I )t J SJ NG Di s. ,2 4,2 8 5 2 8 8. MODI FI EDPATEL' S二 METEOD BywATERS,E.G.L a ndHoLLOWAY,Ⅴ.P.( 1 9 6 4 ) Meas ur eme ntofs er um ur i caci di nGr eatBr i t - n.r he um.Di s. ,2 3,2 3 623 9. ai ni n1 9 6 3.An .(1964) An automated analysis CROWLEY,L.Ⅴ i n.Che m. ,1 0, bas edo naCar bo nat emet hod.Cl 8 3 8 84 4. く Ⅰ * *, Ma s aa ki Yos hi ko NI S HI MURA*,Hi r oko AoI Di r ect or:H.MoRI NAGA) MI F UNE**( * Di v i s i o no fI nt e r nalMe d i c i n e,Z n s i i i ut efo r The r mal S pr i n gRe s e ar c h,Oka yamaUni v e r s i t y * * Oka yamaUni Z ) e r S i i yHo s bi i aZM2 ' s as aBy a7 1 C h FEI CHTMEI R,T.V.a nd WRENN,H.T. ( 1 9 5 5 ) Di r ectdet er mi nat i onofur i caci dus i ngur l C aS e. Abst r act:N1 3b met ho df ordet er mi nat i o n of Am. I. Cl i n.Pat h. ,2 5,8 3 38 3 9. ur i caci dbyAut oAnal yz er -Iwaspr opos e df r om GJ ORUP,S. ,PoULS EN,H.and PRAl 汀ORI US,E. Tec mi l c o n Cor por at i o n, butt he s e ns i t i vi t y of ( 1 9 5 5 ) Theur i c aci dc onc e nt r at i o ni ns er um det er mi ne dby e nz ymat i cs pect r o phot omet r y. modi 丘c at i o n by Pat el ,good s e ns i t i vi t y was Sc andi 7 1 aV.I.CZ i 7 2 .Lab.Z n L ・ e S i. ,7,2 0 1 20 3. obt ai nedf ordet er mi ni ngofur i caci d,buti ns u丘- 影 山信雄 ( 1 9 7 2 )新 しい尿酸測定用キ ット ` ウ リカラ-. Ci ents e par at i onbet wee npeakswasac c ompa ni ed. 4 0 0 'の検討 .臨床検査 ,1 6,8 91 8 9 5. 衡坐清允 ,北村元仕 ( 1 9 7 6 )尿酸一その数値をどう読む か- .日本臨床 ,3 4( 増刊号),1 8 6 0 1 8 66. MI XXELS EN,W .H. ,DoDGE,H.∫. ,VAI XENBURG, H.( 1 9 6 5 )The di s t r i but i o n ofs emm ur i caci d t hi smet hod wasi ns uf nci e nt.Ac c or di ng t ot he Togetgood s e par at i on,Pat el ′ s met hodwas r ee xami nedbyt hea ut hor s,andt her es ul t swer e asf ol l ows. Su氏Ci e nts e par at i o nwasobt ai ne dbymodi ing f t he負ow di agr am ofPat el ′ smet hod.Themea n val uesi napo pul at i o nuns e】 ect edast ogo utor r ec over yr at esofur i caci d adde dt os er um a nd hyper ur i c emi a:Tec ums e h,Mi c hi ga n1 9 5 91 9 6 0. Ame r.I. Me d. ,3 9,2 4 2 2 5 1. ur i newer e1 0 3. 6% and1 0 2. 5%,a ndc oe 氏ci e nt s PATEL,C.P. ( 1 9 6 8 ) Semi mi cr o met hod f or ofvar i at i o nwer e1. 27% a nd1. 05% r es pect i vel y. The c or r el at i o n bet wee nt hi s modi 丘ed Pat el ' s det er mi nat i o nofs er um ur i caci dus i ngEDTA met hod a nd t he U.A.t es tWako met hod was hydr azi ne.Cl i n.Che m. ,1 4,7 6 4 7 7 5. W王 I EAT,∫ .L.( 1 9 6 8 )Anaut omat ed phos pho・ r ec ogni z ed( s er um :n-9 5,r-0. 9 7,ur i ne:n35,r-0. 9 9 ).Ac c or di ngt oourmodi 丘edmet hod, t m gs u t at emet hodus i ng NaOH ast heal kal i . ur i caci dc o nc e nt r at i o ni ns er um of6 8s ubj ect s, Cl i n.Che m. ,1 4,6 3 0 6 3 6. wer e5. 8±0. 9mg/ 1 0 0mli n2 9mal esand4. 4±0. 8 mg/1 0 0mli n3 9f emal es.
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