岡山大学温泉研究所報告
0号 (
1
9
80)25
-SI市
第5
尿 酸 の 測 定 法 に つ い て
自動分析法 (
Pa
t
e
l法)の検討 -
-
西 村 佳 子*･青 木 宏 子*
*･御 船 政 明**
*岡山大学温泉研究所
温泉 内科学部門
**岡 山大学 医学部 附属病院
(
指導 森 永
三朝分院
寛 教授)
(
1
9
8
0
年 1月 9日受付)
1
. 緒言
2
I
. 試薬
尿酸 は Me
r
c
k の特級 を用 い ,他 はすべて ,市販 の特
現在 ,体液 中の尿 酸の測定 には ,主 と して還元 法 とウ
級試薬 を使用 した .
9
7
9年 の
リカ-ゼ法 (
酵素法) とが利用 されて い る.1
Col
l
e
geofamer
i
c
a
npat
bol
ogi
s
t
sの Bas
i
cs
ur
ve
y
(
Tabl
el)によると,尿酸 のi
R
E
J
定法 と して , リンタン
尿酸保存標 準液 (
1
0
0mg/
1
0
0ml
) :炭酸 リチ ウム 6
0
mgを 1
0
0.
O
mlの メスフラス コに と り,約 5
0-6
0
mlの
0
o
C の 恒 温槽 中で加 温溶解 す る.
脱 イオ ン水 を加 えて ,6
グステ ン酸還元法が多用 されてい る.
0
0.
0
mgを加 え て加温溶解 し,冷却 した後 に
次 に尿酸 1
oAnal
yzer(
以下A.A.と略す)-Ⅰ
テ クニ コ ン Aut
脱 イオ ン水 を加 えて全量を 1
0
0.
O
mlと した .
型 による尿酸の測定法 には ,還元法 の うちの N1
3
b法
尿酸使用標準液 :尿酸保存 標準液 を用 いて ,尿酸濃
が用 い られてお り,著者 らは この方 法 によ り測定 を行 な
ったが ,感度が不 良で あ っ た .また A.A.-Ⅰ 塾で
EDTA-ヒ ドラジ ン還元法 を利用 した Pat
el法 (
Fi
g.
0,6.
0,9.
0,1
2.
0,1
5.
0,2
0.
0,2
5,
0(
mg/
1
0
0
度 が 3.
ml
) とな るよ うに脱 イオ ン水 で希釈 した .
6
0
g/
1
0
0
ml
) :タ ン
タ ングステ ン酸 ナ トリウム溶液 (
1) を追試 した ところ, ど- ク問の分離 が悪 く,キ ャ リ
グステ ン酸 ナ トリウム 6
00
g を脱 イオ ン水 に 溶 か して
ーオーバ ーが危倶 され た .
1
00
0mlと した .
今回著者 らは ,Pat
el法 の再検討 を行 ない ,Pat
el法
EDTA ･4ナ トリウム (5g/
1
0
0
ml
) :エチ レンジア
の一部 を改変 して健常者 の血清尿酸値 の測定 を試 み ,揺
0g を脱 イオ ン水 に溶か して
ミン 4酢酸 -4ナ トリウム 5
ば満足 すべ き結果 を得 た .その Pat
el変法 による成績
1
0
0
0
mlと した .
について報告す る.
EDTA-タ ングステ ン酸 試薬 :6
0
g/
1
0
0
mlタ ングス
2.試薬および装置
g/
1
0
0
mlEDTA ･4ナ トリウ
テ ン酸 ナ トリウム液 と 5
Tabl
e1. Themai
nmet
hodsf
ort
i
l
edet
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caci
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phosphotungstate Reduction Methodt A
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uricase Method{ A
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Oxygen Rate Method
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B
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A
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p.8
,
(S
e
t
1 979 .
A
d
A ) ,C
ol
l
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path
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2
6
西 村 佳 子 ･青 木 宏 子 ･御 舷 政 明
0
.
0
2
0
.
0
4
Tube Size
(inches)
DISCARD
SA MPL
E
0
DI
ALYZER
sAMPLER
0. 9
5 t
!
N
a CI
AIR
HYDRAZ川 E SULFATE
EDTA SODIUM TUNGSTATE
0.
056t AIR
りC
PHOSPHOTUNGSTIC
ACID REAGENT
PROP〔
)
RTIONING
PUMP
TO PUMP
COLORIMETER RECORDER
WATER BATH
660 nm
ROOM TEMPERATURE
P
ATE
L,
C.
P.S
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mi
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Ch
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4,p.
7
6
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6
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h
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Fi
g.1. Fl
o
wdi
a
gr
a
mo
fPa
t
el
2
2. 装置
ム液 とを 3対 1の割合に混合す る.
(
0.
0
2
5
g
/
1
0
0
ml
):硫酸 ヒ ドラジ
5
0
mgと酢酸ナ トリウム 1
6.
6
gを脱 イオ ン水で 溶解
ン2
0
0
0
mlとした .
して ,全量を 1
0
0
0
mlの丸底 フラスコに
リンタングステ ン酸試薬 :1
タングステ ン酸ナ トリウム 4
0
g,蒸留水 300m1,1
)ン酸
(
8
5
%オル トリン酸)3
2
mlを加えて混和溶 解 し,フラ
硫酸 ヒ ドラジン試薬
スコに還流冷却器を接合 して ,約 2･3時間おだやかに
煮沸す る.室温 になるまで放置 した後 ,内容を義留水で
1
0
0
0
mlとした.ただ し, リンタグス テ ン酸 試薬
(
和光
自動分析用試薬)を代用 して もよい.
(
0.
9
g
/
1
0
0
ml
) :塩化ナ ト リウ
9gを脱 イオ ン水 に溶か して 1
0
0
0
mlとした .
塩化 ナ トリウム溶液
ム
水酸化ナ トリウム 溶液 (
0.
1N) :水酸化ナ ト リウム
4gを脱 イオ ン水 に溶か して 1
0
0
0
mlとした .
テ クニ コン社製の A.A.
-Ⅰ型を使用 した.
3
. 測定方法の検討
3
1
. 測定条件
Pa
t
e
l法 による測定方法を 検 討 し,サ ンプ ラー のカ
ムを原法の (
4
0
1
/
2
)か ら (
3
0
1
/1
) に変え,サ ンプル
ライ ンの空気の吸引チューブの内径 0
.
0
4
5イ ンチ (
Ⅰ)
,
および発色試薬 ライ ンの 空 気 の 吸 引 チ ュー ブ の 内 径
0.
0
5
6イ ンチ
(Ⅱ)をそれぞれ
0.
0
5
6,0.
0
6
5イ ンチに
変え ,また ,H3型ガラスフ ィッテ ィングに接続 させた
空気 とサ ンプルのチ ューブの位置を逆 に し,ウオーター
バ スコイルを冷却器つ き ミキ シングコイルに変 えたフロ
-ダイアグラム
(
Fi
g.2)を利用すれば, ピーク問 の
分離がよいことがわか った .この測定条件 よ って記録 さ
れたフローチャー トを
Fi
g.3に示 した.
27
尿酸の測定法 について
Tube Size
(inches)
D
I
S
C
ARD
AMP
L
E
R
S
AMP
LE S
0.020
D
I
AL
YZE
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R
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0.06 51[
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*
modified b
y authors
C
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E
R
★
★
660 nm
T
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o.1
1
6-7
0
2-1
Fi
g.2. Fl
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Fi
g.3. Act
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g.4. Rel
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ne
2
8
西 村 佳 子 ･青 木 宏 子 ･御 船 政 明
Tabl
e2. Recover
yr
at
eofur
i
caci
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os
er
u m andur
i
ne
Uric Acid
No. ln Serum
Uric Acid
Recovery
(
mg/100ml)
0000000500
4442244929
0000n
U0O909
1612633887
1936485547
1 11112222
000000000n
U
5550000000
1111222
9490499949
5476474547
(
%)
0人
U00000000
2264430555
0000000000
11111■
■■1111
Found
9■
･
-75010983
8009145546
11 ー︼l1l1
0000000000
5555500000
11111
8043880438
35L
L
7453L
L
'545
1234567890
(
mg/100ml)Added
Uric Acid Uric Acid
Recovery
ln urlne
(
mg/100ml)
rate
(
%)
(
mg/100ml)Added Found
103.
6
100.
0
3
106.
0
Tabl
e3. Pr
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c
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C;S｡こて,serum
upi;m:,
433N4344A
T
4
8888888888
77880
0898C
O8
4444444444
8900901001
8899890
ノ9q一
9
8∧
U99(
U89998
45445444A
T4
2222222222
Samp一e l･Samp一e 2･Samp一e 3., Samp一e 1. Samp一e 2.Sample 3.
568877′
oL
L
)76
6666666666
Range
upi;mg
a,
cio
d霊 ,urine
4445555566
5555555555
1234567890
Mean
S.D.
l
5.
49
0.07
6.65
0.11
8.35
0.
07
4.79
0.
06
8.98
0.15
24.
89
0.
07
5.4
6.5
8.
2
4.7
8.
8
24,
8
5?6
6号8
8.
5
4
4.
f
9
,!1
25チ
0
1.
62
0.84
1.19
1.
68
C.V.(A) 1.35
32. 希釈試験
尿中尿酸は高濃度のことが多いので,原尿を脱イオ ン
水で適当に希釈 して測定試料 とした.原尿を脱 イオ ン水
0.28
1
0
6.
0%平均 1
0
3.
6%尿では,99.
0-1
0
4.
0%平均 1
02.
5
%であった (
Tabl
e2).
3
4. 精度
で 2-1
0倍に希釈 した場合の測定値間の変化について検
血清および尿 (5倍希釈)の各 3試料について,各 々
討 した結果 ,希釈倍数 と測定値 との 間 に は,良 好 な直
1
0回連続測定 した時の精度について検討 した結果 ,変動
線性が認め られた.原尿は 5倍に希釈す る こ と と した
係数
(
Fi
g.4).
尿では,0.
2
8-1.
6
8%平均 1.
05%であった (
Tabl
e3).
3⊥
3. 回収試験
35. 本法 と T
J
A テス ト (
W ako)法によ る測 定 値間
プール血清に 5.
0,
1
0.
0mg/1
0
0mlの尿酸を, また 5
(
C.
Ⅴ.
)は血清では,0.
8
4-1.
62%平均 1.
27% ,
の相関について
倍希釈 した尿に 5.
0,
1
0.
0,
2
0.
0mg/1
0
0mlの尿酸を添加
血清 95試料 と尿 3
5試料につ き,本法 (
Pat
el変法)
した時の回収率について検 討 した.血清では,1
0
0.
0-
と UA テ ス ト (
W ako)法による測定値問 の相 関性 に
尿酸の測定法 について
29
mg/7
00m7
4
3
S
1
L
J
Ta
uO蔦M 33 .
V.
n
PO
2･
0
4･
D
6.
0
8.
0
Authors'method
20
0
10.
0
mg/1
00ml
Fi
g.5. Cor
r
el
at
i
onbet
wee
nU.A.t
es
tWa
ko
met
hodandaut
hor
s
'met
hod
Au
thors'method
mg/100ml
Fi
g.6. Cor
r
el
at
i
onbet
wee
nU.
A.testWako
met
hoda
ndaut
hor
s
'met
hod
Tabl
e4. Nor
malme
a
nval
uesofs
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um ur
i
caci
d
Numbers
Mean(
mg/100ml)
of
subjects m｡1es巨 emales
KAGEYAMA
et al
MIKKELSEN et al
et al
ALPER
〟
TISE REPORTER
〟
enzymatic
spectrophotometr
y
ついて 検 討 した.血 清 で は ,r二
-0.
9
7,Y-1.
0
3
Ⅹ-
0.
4
3(
Fi
g.5),尿では ,r-0.
9
9,Y-1.
0
6
X-0.
5
4
8
3
FEICHTWEIR et al
〝
3 4
4 4
et al
6 8 8
9 6 7
∵
r
U
r
auto analyzer
4
4
CROuLEY
KITAMURA
colorimetric
8 9 0
3 3 4
KITAMURA
〟
0 3 4 6 7 8 9
5 5 5 5 5 5 5
et al
enz
ymatic
spectrophotometry
0 7 3
0 3 4
3 1 1
GJORUP
enzymatic
colori
metry
岡山大学温泉研究所 および岡山大学医学部附属病院三
朝分院に勤務す る職員で,定期健康診断で異常を認めな
(
Fi
g.6)であ り,血清 ･尿試料 とも良好 な 相 関 性 が
か った健常者 68例 ,(
男子 2
9軋
認め られた.
か ら採血 して得た血清を試料 と した.
4. 測定試料および結果
4
1 . 測定試料
女子 3
9例)の肘静脈
42. 測定結果
8±0.
9mg/
1
0
0
ml
,
健常者の血清尿酸値は,男子は 5.
女子は 4.
4士0.
8mg/
1
0
0mlで ,男子が女子 に比べて平
西 村 佳 子 ･青 木 宏 千 ･御 船 政 明
0
7
尿酸の測定値は,副定方法によって差があることが知
80
i
Me
an
±S･D･
られてお り,BUc
HANAN(
1
9
6
5
) は,還元法は酵素法よ
5mg/
1
0
0ml高値を示す と報告 している.Ta
bl
e
り約 0.
4･に記載 した血清尿酸正常平均値をみて も,測 定 値 は
5
4
0
･
0
4
0
,･
0
5
+
･
･
.&+.
?.･
n
l
′
0
0
6
･⋮,
･
Tq･,
!,
･･,
･
,
n
l
g
/1
00
ml
各報告者によって差がみ られるが ,平均値では,男子の
方が女子 より 1-2mg/
1
0
0ml高値を示す傾向にあるこ
とは各報告 とも同様である.著者 らが Pat
el変法によっ
bl
e4.の測定値
て測定 した健常者の血清尿酸値を ,Ta
と比較すると,北村 ら (
1
9
6
6
),CROWLEY (
1
9
6
4
)が報
告 している,オー トアナライザー法による測定値 とほぼ
一致 した.
6
. 結語
Aut
oAnal
yz
er
-Ⅰ 型 を用 い る尿 酸 測 定 法 で あ る
Pat
el法を検討 し,次の結果を得た.
oTMaler
0rF
e
maT
e
①
N=29
T
l
王3
9
M
ea
n士 S.D.:5.
8土 0.
9 Mean土 S.
D,'
.4.
4土 0.
8
R
a
ng
eこ4.
0-7.
7
R
ang
e:2.
4･
-5.
8
0
5
6,Ⅱ-0.
0
6
5インチに変え,
ーブの内径を Ⅰ-0.
t=6.
67
p
く0.
01
H 3型ガラスフィッテ ィング-の空気 とサ ンプルの
接続位置を逆に し,冷却器つ き ミキシングコイルを
Fi
g.7. Ser
um ur
i
caci
dc
o
nc
e
nt
r
at
i
o
nsof
使用 した結果 ,良好なフローチャ∼ トを得 ることが
できた.
nor
mals
ubj
ec
t
s
均 1･
4mg/
1
0
0ml高い値を示 し,両者の問には,推計学
②
@ Pat
el変法 と UA テス ト (
Wako)法 との相 関
9
7,Y-1.
0
3
Ⅹ-0.
43,尿 :rは,血清 :r-0.
現在,尿酸の測定法は,還元法か ら特異性の高い酵素
0.
9
9,Y -1.
0
6Ⅹ-0.
5
4と良好 な相関が 認 め られ
た.
法に移行する趨勢にあるが,酵素法では測定条件がデ リ
ケー トで精度が十分でないなどの問題があるため,酵素
回収率は,血清で 1
0
3.
6% ,尿で 1
0
2.
5%であり,
2
7% ,1.
05%であった.
変動係数は,それぞれ 1.
的に有意な差を認めた (
Fi
g.7).
5
. 考按
Pat
el法のフローダイアグラムを改良 し,サ ンプ
ラーのカムを (
3
0
1
/
1
),2カ所の空気の吸 引 チ ュ
④
この改良 した Pat
el変法を用いて,健常者 6
8例
法を 日常検査に使用する施設は少な く,一般の臨床検査
9例,女子 3
9例)の血清尿酸値を測 定 した
(
男子 2
では還元法が多用 されていることは,緒言に述べた如 く
結果 ,測定値は,男子 :5.
8±0.
9mg/
1
0
0ml
,女子
である.他方 ,試料処理数の増加に伴 って ,還元法を用
:4.
4±0.
8
mg/
1
0
0mlとな り,有意な性差が認め ら
いたオ- トアナライザー法が広 く行われ,同法による尿
れた.
酸 測 定 の成 績 が 報 告 され て い る (
CROWLEY1
9
6
4,
BywATERS1
9
6
4,PATEL1
9
6
8,WHEAT1
9
6
8
).
著者 らは ,A.
A.
-Ⅰ型を用い,尿酸のオー トアナラ
イザー法 としては実用性があるといわれている Pat
el
原
1
3b 法お
法に一部改良 を加 えた結果 ,テクニコン N-
el原法に比べて ,感度 も ピーク間の分離 もと
よび Pat
〔謝辞〕 稿を終 るに当 り御指導 ,御校閲をいただいた
森永寛教授に深謝する.実験に際 し,衡協力いただいた
岡山大学医学部附属病院三朝分院検査室の皆様に厚 く御
礼申 しあげる.
7
. 文献
もにす ぐれており,また回収率 ･精度については,血清
ALP
ER,C.
,SEI
TC
HI
X,∫
.(
1
9
5
7
) Compar
i
s
on of
･尿試料とも良好な成績を得 ることができた.また,こ
t
heAr
c
hi
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