大規模細胞内物質導入装置 セルスタンパー CP-01 製造：丸大機工株式会社 販売：東北化学薬品株式会社 ～セルスタンパーとは～ 秋田県立大学 齋藤敬准教授開発の技術で、光化学反応による細胞膜穿孔を 齋藤敬准教授開発の技術で 光化学反応による細胞膜穿孔を ハイスループットで行うための装置です。 ＊IEEE/NIH Life Science Systems & Applications Workshop’09 受賞技術 基本原理 ～光化学反応による細胞膜穿孔法～ 光や超音波等によって活性を制御可能な酸化触媒を利 用し、局所的に細胞膜を酸化すると、細胞膜を一時的に 穿孔可能です。現在達成している穿孔径は500-1000nm と他法に比べ大きく、様々な物質を導入可能です。その 穿孔箇所を細胞自身が数十秒～数分以内に修復、しか も細胞が生き続けることが出来ます。 微小ガラス管 (A) 細胞膜 大規模細胞膜穿孔法 大規模細胞膜穿 法 光増感剤を軟質ポリマー(PDMS)に練り込み、ナノ剣山状 構造体として成形したもの（細胞膜穿孔体）を細胞表面に 押し当て光を照射すると、剣山の先端部分で、光酸化反 応が起こり、一度に多数の細胞膜を穿孔することができ ます（現仕様で最大一回250万細胞の処理が可能）。 光増感剤を含む 注入液 あるいは光触媒を 被覆したキャピラリ 加圧 細胞膜 穿孔体 (B) 弱い紫外光照射 細胞 細胞群 細胞群 活性酸素種が生成、 膜を酸化させ、穿孔 (C) 細胞膜の流動性・ 細胞の抗酸化作用 によって膜が回復 (D) 基本実施例： マイクロインジェクション T.K. Saito et al., Biotechnol. lett., 2002, 309-314 光照射 光増感剤を含む、 ナノ剣山状ポリマー （細胞膜穿孔体）を 細胞に押し付け、 光を照射する。 導 導入したい物質を 物質 細胞外に分散させ、 穿孔した細胞膜から、 自然拡散によって 細胞内物質導入を行う。 大規模細胞膜穿孔法 模式図 T K Saito et al., T.K.Saito al 2009 IEEE/NIH Life Science Systems and Applications Workshop Proceedings, 2009, 5-8 光化学細胞膜穿孔法を用いた細胞内物質導入実験例 循環器系細胞への物質導入 a HeLa細胞へのタンパク質直接導入実験 HeLa細胞へのタンパク質直接導入 同一細胞集団への時間差物質導入 b 対象：ヒト冠状動脈血管内皮細胞 a)透過像 b)蛍光像 条件：穿孔体突起あたり加圧 389hPa， 励起光源:Nikon Eclipse 100W水銀ランプ光 B-2Aフィルタ透過、光照射時間120s, 導入物質:蛍光色素 AlexaFluor594 K.Inomata et al., 生体医工学, 52, p.O2-04-6, 2014 細胞と同位置に蛍光が観察 左上：透過像 左下：GFP導入後の蛍光像 右：2画像の加工合成写真 （透過像：青色（細胞外を着 右：2画像の加工合成写真.（透過像：青色（細胞外を着 色）、蛍光像：緑） 条件：穿孔体突起あたり加圧 68hPa 励起光源:Olympus IX71 100W水銀ランプ光 12%減光 WIBフィルタ透過、光照射時間:30s 導入物質：GFP (Mw=27kDa) 齋藤敬ら，日本ロボット学会学術講演会予稿集 (CDROM) ，27, 1B3-03, 2009 写真：HeLa細胞（青）に対し、先にAlexa594（赤）を、３ 日後にAlexa488（緑）を導入（細胞の密集と重なりに 緑 導 よる凹凸あり） 条件：外部色素濃度 20μM, 圧力 204hPa、 励起光源:Olympus IX71100W水銀ランプ光 12%減光 WIBフィルタ透過、光照射時間:120s 導入物質:蛍光色素 AlexaFluor488, 同594 齋藤敬ら，日本ロボット学会学術講演会予稿集 (CDROM) ，27, 1B3-03, 2009 ＣＰ-０１製品仕様 全体構成 付属ソフトウェア USB接続 (2ポート) ① 最初に穿孔対象と穿孔体が 接触する位置を登録します。 細胞膜 穿孔体 (消耗品) Windows® PC （別途用意） CP-01本体 （土台部にLED光源内蔵） システム構成イメージ 本体仕様 適用ディッシュサイズ：Φ90×16 (H) mm 以下 押付圧力：0～500 hPa 押付圧力の制御方式：サーボモーターでのストローク制御、 スプリングたわみ量可変方式 (ストローク：34mm) 使用温度範囲：0～40℃ 使用温度範囲 0 0 85% RH以下 以下 (結露しな (結露しないこと) と) 電源：AC100V (50/60Hz) 外形寸法：120 (W)×160 (D)×165 (H) mm 質量：約 2 kg 細胞膜穿孔体（専用消耗品） （拡大断面） （全体） 20μm 細胞膜穿孔体（直径12mm、厚さ3mm） Aタイプ：突起径 Aタイプ 突起径 1m、高さ 1 高さ 2m、ピッチ 2 ピッチ 3m 3 Bタイプ：突起径 1.7m、高さ 1.7m、ピッチ 3m Cタイプ：突起径 0.3m、高さ 0.3m、ピッチ 0.3m 穿孔体はＣＰ-０１本体の取り付け部のマグネットに簡単に 装着できます。 また、穿孔体は表面が汚れると機能しなくなります。 使用頻度にもよりますが、基本的には一日使用したら可燃 物として廃棄して下さい 物として廃棄して下さい。 製造 ② 穿孔体のタイプ、細胞加圧 圧力、穿孔時間、ディッシュ 上で細胞の占める面積の 割合（概算）を入力します。 ③ 穿孔開始ボタンをクリックする と自動的に穿孔体が下降、 操作画面 細胞膜穿孔（加圧・光照射）を 行い、終了後に元の状態に ※ソフトウェア動作環境 復帰します。 Microsoft® Windows Vista, ④ ②に戻り、条件を調整しつつ Windows 7, Windows 8 (それぞれ32/64bit) 繰り返し穿孔を行うことが 可能です。 ※Microsoft® 、Windows®、Windows Vista® 、Windows 7® 、Windows 8® は、 米国Microsoft Corporationの米国およびその他の国における商標または登録商標です。 ご使用に際して 1. 操作条件により、細胞膜が穿孔されない場合や細胞が死ぬ 場合があります。また細胞種等により、最適な穿孔条件は 異なると考えられます。 2. セルスタンパーは通常の実験室やクリーンブースでの使用 を想定しており、インキュベーター内のような高湿度環境、 また乾熱滅菌器や冷凍冷蔵庫等の高／低温度環境では使 用できません． 3. 本製品は研究機器であり、本製品および本製品で処理した 細胞は医療行為には適用できません． 4. 内蔵LED光源は強力なため、光源を長時間凝視することは 避けて下さい。 5. 付着細胞の処理に適しますが、浮遊細胞も対応可能です。 販売 丸大機工株式会社 東北化学薬品株式会社 ＭＡＲＵＤＡＩＫＩＫＯ ＣＯ．，ＬＴＤ． TOHOKU CHEMICAL ＣＯ．，ＬＴＤ． 〒０１８ ０３１１ 秋田県にかほ市金浦字笹森１２５－１ 〒０１８‐０３１１ 秋田県にかほ市金浦字笹森１２５ １ 〒０３６ ８６５５ 青森県弘前市大字神田１－３－１ 〒０３６-８６５５ 青森県弘前市大字神田１ ３ １ ｈｔｔｐ：//ｗｗｗ．ｍａｒｕｄａｉｋｉｋｏ．ｃｏ．ｊｐ ｈｔｔｐ：//ｗｗｗ．ｔ－ｋａｇａｋｕ．ｃｏ．ｊｐ ■ セルスタンパー ＣＰ-０１ についてのお問い合わせ 東北化学薬品（株）生命システム情報研究所 〒020-0022 岩手県盛岡市大通３丁目3番１０号 七十七日生盛岡ビル Ｔ l 019 629 2661 Ｆax：019-629-2663 Ｔel：019-629-2661 Ｆ 019 629 2663 東北化学薬品株式会社 東京支店 〒101-0032 東京都千代田区岩本町1-8-15 イトーピア岩本町1丁目 Tel: 03-3866-9777 Fax: 03-3866-9735 E-mail：[email protected] (担当 多田) 2014年11月製作 製品の性能および仕様は、改良のため予告なく変更することがありますので、ご了承ください。
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