Isolation Spiroleptosphol B Leptosphaeria. doliolum PS培地5L、２５℃、２週間振トウ培養 1H HO O OH H3C 菌体 MeOH抽出 残査 謝辞 NMR スペクトル (CDCl3) O 培養液 NOE H O O CH3 H3C CH3 HO ・EIMSを測定して頂きました北海 道大学農学研究科川端準教授、 福士江里博士に感謝いたします。 H H O H 8.4 Hz O H OH ・細胞毒性活性を測定して頂きま した弘前大学三浦富智準教授に 感謝いたします。 CH3 MeOH抽出物 濃縮 Leptosphaeria doliolum ヨモギ茎より分離した子のう菌 ・Ｘ線結晶解析をして頂きました宇 都宮大学農学研究科二瓶賢一準 教授に感謝いたします。 AcOEt / H2O 水層 AcOEt抽出物 (1.0 g) SiO2カラム (MeOH / CH2Cl2) 1% MeOH BuOH / H2O BuOH抽出物 (150 mg) 15% MeOH (280 mg) 5% MeOH 230 mg spiroleptosphol Leptospholic acid 水層 Sep-Pak ODS (H2O→MeOH) 細胞毒性活性 EC50 = 20 ug / mL (P388) MeOH 70% (20 mg) MeOH 60% (280 mg) ODS (中圧カラム) 32 % MeCN / H2O spiroleptosphol B (92 mg) HPLC : Waters SunFireTM 20 % MeCN / H2O H3C OH H3 C O HO HO O 平衡混合物 OH CH3 HO O rt. 4days CH3 O H spiroleptosphol Bに分解 CH3 CH3 HO CH3 CH3 1H leptospholic acid (18 mg) spiroleptosphol C (65 mg) CDCl3 OH R HO O OH H3C OH O O NMR スペクトル (CDCl3) ESIMS : m/z = 355 [C19H30O6+H]+ after 4days 1H NMR スペクトル (CD3OD) norleptosphol C (16 mg) Spiroleptosphol H 89.1 157.1 EIMS : m/z = 336.1905 [C19H28O5]+ H H5.16 OH O 174.6 68.7 O HO NOE相関 4.68, 4.80 (R) 58.7 H 3.45 H H (R) 2.16 20.9 0.91 124.3 H 72.2 (R) 39.0 CH3 3.84 H (R) 19.0 (R) 70.0 129.8 34.3 H 1.32 0.80 4.40 H CH3 (R) H 141.7 43.9 127.7 5.58 H 31.6 HO 11.9 5.43 (R) 29.8 0.85 H H O Norleptoshol C Spiroleptosphol C R OH ESIMS : m/z = 327 [C18H30O5+H]+ O 10.6 Hz H O CH3 H 0.98, 1.24 H H OBz CH2 HO HO H 5.33 5.75 NMRスペクトルはブロード (CDCl3, CD3OD, acetone) NOE H 10 11 H3C H 5 3 1.11, 1.28 HO H 8.1 Hz 6 4 H HO OH 7 H 10.6 Hz 立体化学 O O BzO BzCl, Py spiroleptosphol CDスペクトル CH2 O HO CH3 O BzCl, Py, DMAP CH3 CH3 HO H OH O BzO 60Ž , 14h CH3 H Biosynthesis of Spiroleptosphol CH3 安定同位体ラベル実験 CH3 BzO CH3 CH3 側鎖部位の絶対立体化学 spiroleptosphol NMR スペクトル (CDCl3) CH3 NOE H OH 1H CH3 PtO2/C, H2 MeOH, 12h CH3 H d, 6.3 Hz NMR スペクトル (CD3OD) OBz BzO O 1H 1) O3 (R) (R) O O HO キラルGC-MS OH 2) NaBH4 51.7 lower incoporation 52.3 methionoine OH 42.8 42.2 HO 天然物 OH (S) (S) (R) (R) 2 34.9 35.2 JCC (Hz) S, S体 OH 42.4 68.0 R, R体 White, j. D. et. al (1994) ラセミ体 OH 培養１０日目に各ラベル 化合物を培地に添加。 10 mg / flask OH カラム : (RESTEC Rt-βDEXm™, 30 m, 0.25 mm ID) 75° Stereochemistry of Similar Spiro Metabolites from Fungi CH2 O O HO 6 7 HO 3 5 4 10 OH R compounds C4 C5 C6 C7 C10 spiroleptosphol R R R R R (3R,5R)-(E)-3,5dimethylhept-1-en-1-yl - (E,E)-3,5-dimethylhepta1,4-dien-1-yl - - R producers OH Leptosphaeria doliolum oxaspirol - - arthropsolide D S R S S S (E)-but-2-en-1-yl Arthropsis truncata oxaspirodion - - S* keto form S* (E)-but-2-en-1-yl Chaetomium subspirale Rhodotorula glutinis T-110 paecilospirone S* R* S* keto form S* (E)-but-2-en-1-yl Paecilomyces sp. massarigenin A S* S* R* S* R* methyl Massarina tunicata mycosporulone keto form S* R* keto form S* methyl Coniothyrium sporulosum 6-epi-5’-hydroxymycosporulone S* R* R* keto form R methyl Microsphareopsis sp. FO5050Ⅳ rosigenin S* R* R* keto form S* methyl Mycospharella rosigena O Acetyl-CoA S-Enz Enz-S O O HO O O 脱炭酸 O TCA cycle O O O HO O heptaketide O O O HO HO Me HO Me CH3 OH OH CH3 CH3 CH3
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